20xx核酸檢測基本知識-在線瀏覽
2024-10-17 10:47本頁面
【正文】 42℃進(jìn)行,可在2h內(nèi)將RNA模板擴(kuò)增約109倍。整個反應(yīng)分非循環(huán)相和循環(huán)相:在非循環(huán)相中,引物I與模板RNA退火后在AMV逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下合成cDNA,形成RNA:DNA雜合體,隨即RNaseH降解RNA,引物Ⅱ與cDNA退火,在反轉(zhuǎn)錄酶作用下合成第2條DNA互補(bǔ)鏈。TMA技術(shù)原理與NASBA基本一致，略有不同之處是TMA利用的是MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶及T7RNA聚合酶兩種酶，MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶既有逆轉(zhuǎn)錄酶的活性又具有RNA酶H活性。(LCR)LCR是基于靶分子依賴的寡核苷酸探針相互連接的一種探針擴(kuò)增技術(shù)，是繼PCR后新發(fā)展的一種較有前景的體外擴(kuò)增技術(shù)。若連接區(qū)段發(fā)生核苷酸的堿基突變,則連接反應(yīng)不能發(fā)生,擴(kuò)增反應(yīng)終止。PCR由變性—退火—延伸三個基本反應(yīng)步驟構(gòu)成。②模板DNA與引物的退火(復(fù)性)：模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后，溫度降至55℃左右，引物與模板DNA單鏈的互補(bǔ)序列配對結(jié)合。每完成1個循環(huán)需2～4min，2～3h就能將待擴(kuò)目的基因擴(kuò)增放大幾百萬倍。實時熒光定量PCR技術(shù),是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程,最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。而當(dāng)PCR擴(kuò)增時,引物與熒光標(biāo)記的特異性探針同時結(jié)合在模板上,熒光標(biāo)記的探針與模板的結(jié)合位置位于上下游引物之間,利用Taq酶的5′3′外切酶活性,將熒光探針?biāo)?熒光基團(tuán)被釋放出來,由于在空間上與淬滅基團(tuán)分開,則發(fā)出熒光。該技術(shù)不僅實現(xiàn)了PCR從半定量到定量的飛躍,而且與常規(guī)PCR相比,它具有特異性強(qiáng)、自動化程度
范文總結(jié)相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1