20xx核酸檢測基本知識-文庫吧資料
2024-10-17 10:47本頁面
【正文】 用熒光基團(tuán)標(biāo)記探針,5′端標(biāo)記熒光基團(tuán)R,3′端標(biāo)記淬滅基團(tuán)Q,在沒有PCR擴增時,由于熒光基團(tuán)和淬滅基團(tuán)空間距離很近,使熒光基團(tuán)被淬滅,不發(fā)熒光。檢測HIVRNA,需要先利用逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)將RNA轉(zhuǎn)錄為cDNA，繼而以cDNA為模板進(jìn)行PCR擴增即可，這樣的反應(yīng)稱為RTPCR。③引物的延伸：DNA模板—引物結(jié)合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP為反應(yīng)原料，靶序列為模板，按堿基配對與半保留復(fù)制原理，合成1條新的與模板DNA鏈互補的半保留復(fù)制鏈，重復(fù)循環(huán)變性—退火—延伸三過程，就可獲得更多的“半保留復(fù)制鏈”，而且這種新鏈又可成為下次循環(huán)的模板。①模板DNA的變性：模板DNA經(jīng)加熱至93℃左右一定時間后，使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結(jié)合，為下輪反應(yīng)作準(zhǔn)備。(PCR)PCR技術(shù)的基本原理類似于DNA的天然復(fù)制過程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。它的原理就是由2段寡核苷酸單鏈DNA探針與目標(biāo)序列雜交,當(dāng)該2段DNA探針與沒有發(fā)生突變的模板褪火后,如果2探針是緊鄰的,中間沒有核苷酸間隔,則可在連接酶作用下連接起來,連接以后的新鏈又可以作為模板,引導(dǎo)下一周期的連接產(chǎn)生新的子鏈?！孢M(jìn)行,可在1h內(nèi)將RNA模板擴增約109倍。雙鏈DNA可在T7RNA聚合酶的作用下,經(jīng)其啟動子序列起動而轉(zhuǎn)錄RNA，RNA又可在反轉(zhuǎn)錄酶的作用下反轉(zhuǎn)錄成DNA，進(jìn)入循環(huán)相,對模板進(jìn)行大量擴增。NASBA原理是提取病毒RNA,加入AMV逆轉(zhuǎn)錄酶、RNA酶H、T7RNA聚合酶和引
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