20xx核酸檢測基本知識(參考版)
2024-10-17 10:47本頁面
【正文】 （4）應(yīng)在完成檢測后5個工作日內(nèi)發(fā)出檢測報告。（2）HIV核酸檢測陽性：發(fā)現(xiàn)核酸陽性反應(yīng)，應(yīng)該重復(fù)采集樣品進行復(fù)測，復(fù)測結(jié)果呈核酸陽性反應(yīng)則判定為核酸陽性，復(fù)測結(jié)果為核酸陰性反應(yīng)則判為不確定結(jié)果，需進一步隨訪檢測。自動化核酸擴增儀使用酶聯(lián)比色分析或熒光探針雜交等原理測定。擴增產(chǎn)物常用分析方法是瓊脂糖凝膠電泳法，與分子量標準比較，判斷擴增片段是否在預(yù)期的分子量范圍內(nèi)。在擴增儀中，按照設(shè)定的程序進行擴增。使用商品化RTPCR一步法試劑進行第一輪擴增反應(yīng)。逆轉(zhuǎn)錄cDNA合成反應(yīng)需使用逆轉(zhuǎn)錄引物、dNTPs、逆轉(zhuǎn)錄酶、RNA酶抑制劑、DTT、緩沖液和適量無RNA/DNA酶的超純水以及RNA模板。在擴增儀或水浴箱中，在規(guī)定的溫度和時間下進行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。DNA應(yīng)置于20℃保存，RNA和需長期保存的DNA應(yīng)置于80℃保存。：使用硅膠柱離心、磁性硅膠顆粒分離方法以及自動化儀器等商品化試劑或設(shè)備并按說明書操作。bDNA有數(shù)十個覆蓋整個基因組的探針,可以方便地檢測HIV某些變異株,但靈敏度不及PCR，提高bDNA靈敏度是一大難點。通過發(fā)光強度來定量,因為發(fā)光強度與樣品中HIVRNA含量成比例。在微孔中形成HIVRNA寡核苷酸復(fù)合物。后者再與放大探針即bDNA探針雜交。將HIV的RNA通過離心從病毒顆粒中釋放出來,然后用捕獲探針1將其捕獲到微孔中。——bDNAbDNA是定量檢測血漿中的HIV1型RNA的一種方法。發(fā)出的熒光可以被熒光探頭檢測到,一邊擴增,一邊檢測,這樣就實現(xiàn)了“實時”檢測。本技術(shù)的原理是使
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