選修課臨床檢驗9熒光定量pcr在臨床實驗室診斷中的應用-文庫吧
2024-09-29 15:48 本頁面
【正文】 基 礎：常規(guī) PCR+熒光探針（ TaqMan熒光探針 ) 酶 學 基 礎： Taq酶的 5’ 3’外切核酸酶活性 熒光化學基礎：熒光報告基團和淬滅基團標記探針 熒光共振能量轉(zhuǎn)移原理 (FRET ) Ct值 ： C代表 Cycle， t代表 threshold， 其 含義是：每個反應管內(nèi)的熒光信號到達 設定的閾值時所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)。 ?定 量 的 實 現(xiàn) ： ? 熒光探針與擴增產(chǎn)物結(jié)合 ? Taq酶外切作用，探針裂解，熒光 被激發(fā) ? 熒光信號的檢測 ? 熒光強度與定量核酸模板相關(guān)性 ? 實時定量與終產(chǎn)物定量 ? ? ? ? ? ? 熒光定量 PCR技術(shù)的主要優(yōu)點 一、真正的樣品原始核酸模板的準確定量 二、定量范圍寬（ 0— 1010/ml)，無需梯度稀釋 三、封閉狀態(tài)檢測，避免擴增產(chǎn)物污染 四、探針使用使特異性更強 五、光譜分析技術(shù)使敏感性更高 六、儀器讀數(shù)，結(jié)果判斷客觀真實 七、無需 PCR后處理，操作更簡便、快速 八、數(shù)據(jù)電腦管理，利于醫(yī)院管理 熒光定量 PCR技術(shù)檢測的報告形式 一、報告形式： 熒光定量 PCR檢測的報告以：“拷貝數(shù)”（ copy) 二、拷貝數(shù)的意義： 表示原始標本內(nèi)可供探針結(jié)合的核酸片段數(shù)量。 三、拷貝數(shù)與病原體的關(guān)系： 拷貝數(shù)與病原體的數(shù)量成正相關(guān) 一般來說：細菌是單拷貝的，病毒是多拷貝的。 檢測結(jié)果分析 熒光定量 PCR檢測結(jié)果的正常值？ 外源基因：正常值： 0拷貝 0拷貝：根據(jù)臨床表現(xiàn) 內(nèi)源基因：正常值：參照正常細胞相關(guān)基因表達水平 FQPCR在臨床醫(yī)學中的應用 病原體的定量檢測； 腫瘤基因和腫瘤標志物表達 (mRNA)的檢測； 遺傳病基因的檢測； 與疾病相關(guān)的各種蛋白質(zhì)（細胞因子、酶、 激素、受體）的基因表達的定量檢測； 藥物療效的考核手段。 建立病原體的分子診斷標準 FQPCR在病原體檢測中的應用 一、肝炎病毒定量檢測 二、優(yōu)生優(yōu)育相關(guān)項目檢測 三、結(jié)核桿菌及呼吸道病原體檢測 四、性病病原體檢測 129例 HBV定量檢測結(jié)果 ELISA 總數(shù) 陽性例數(shù) 陽性率 平均數(shù)量 范圍 大三陽 81 81 100% ?108/ml ?107~?1010/ml 小三陽 48 39 81% ?106/ml ?103~ ?106/ml HBV病毒載量與乙肝感染各期 平均拷貝
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