【正文】 某些有機(jī)酸沉淀蛋白質(zhì) 取1支試管，加入蛋白質(zhì)溶液2mL，再加入1mL5%三氯乙酸溶液，振蕩試管，觀察沉淀的生成。放置片刻傾出清液，向沉淀中加入少量水，觀察沉淀是否溶解。有機(jī)溶劑沉淀蛋白質(zhì) 取1支試管，加入2mL蛋白質(zhì)溶液，再加入2mL95%乙醇。觀察沉淀的生成（如果沉淀不明顯，加點(diǎn)NaCl，混勻。 乙醇引起的變性與沉淀 取3支試管，編號(hào)。依下表順序加入試劑： 試劑（mL）管號(hào)蛋白質(zhì)溶液95%乙醇123111—1———11111—— 振搖混勻后，觀察各管有何變化。放置片刻向各管內(nèi)加入水8mL，然后在第2，3號(hào)管中各加一滴甲基紅。觀察各管顏色的變化和沉淀的生成。，觀察沉淀的再溶解。解釋各管發(fā)生的全部現(xiàn)象。教學(xué)過(guò)程中師生活動(dòng)設(shè)計(jì) 蛋白質(zhì)沉淀原理，什么是蛋白質(zhì)變性？根據(jù)性質(zhì)推測(cè)其應(yīng)用提綱、板書設(shè)計(jì) 原理及簡(jiǎn)要操作步驟作業(yè) ？？主要參考資料[1] 《生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)》，何幼鸞、湯文浩，華師出版社，2013[2]《生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)教程》，王金亭，方俊主編，華中科技大學(xué)出版社，2010總結(jié)分析 通過(guò)原理分析，幫助學(xué)生理解“沉淀的蛋白質(zhì)不一定表現(xiàn)為變性；變性的蛋白質(zhì)不一定表現(xiàn)為沉淀”； 重點(diǎn)區(qū)別：“可逆沉淀”與“不可逆沉淀”《醫(yī)學(xué)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)》教案 第 4 次課 2學(xué)時(shí)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目 蛋白質(zhì)和氨基酸顯色反應(yīng) 實(shí)驗(yàn)性質(zhì)基礎(chǔ)性實(shí)驗(yàn) 教學(xué)目的和要求。教學(xué)重 點(diǎn)與難點(diǎn)重點(diǎn)：蛋白質(zhì)與氨基酸的顯色反應(yīng)原理。難點(diǎn)：鑒定蛋白質(zhì)與氨基酸的方法。實(shí)驗(yàn)材料試劑：%醋酸鉛1mL、10%NaOH、1%CuSO4器具：水浴鍋、溫度計(jì)、200mL錐形瓶、100mL容量瓶、吸管、試管及試管架 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容一、實(shí)驗(yàn)原理★：(biuret reaction) 蛋白質(zhì)和多肽分子中肽鍵在稀堿溶液中與硫酸銅共熱，呈現(xiàn)紫色或紅色，此反應(yīng)稱為雙縮脲反應(yīng)，雙縮脲反應(yīng)可用來(lái)檢測(cè)蛋白質(zhì)水解程度。 Tyr（Trp）+濃硝酸黃色 Phe+少量濃硫酸+濃硝酸黃色 （半胱氨酸和胱氨酸） RSH+2NaOHROH+Na2S+H2ONa2S +Pb2+PbS+2Na+PbS+2HCl PbCl2+H2S二、實(shí)驗(yàn)步驟▲：(biuret reaction) 取1支試管，加乳蛋白溶液（蛋清:水=1:9）約1mL和10%NaOH約2mL，搖勻，再加1%CuSO4溶液2滴，隨加隨搖。觀察現(xiàn)象，記錄。 向6個(gè)試管中按下表加試劑，觀察現(xiàn)象并記錄。雞蛋清溶液（蛋清:水=1:9）管號(hào)123456材料雞蛋清液指甲頭發(fā)%苯酚%色氨酸%酪氨酸（滴）4少許少許444濃硝酸（滴）22020444現(xiàn)象逐滴加10% NaOH后現(xiàn)象變化%醋酸鉛1mL、10%NaOH1mL、卵清蛋白1mL三樣試劑混勻加熱，觀察現(xiàn)象。然后冷卻至20~30℃，加10滴濃HCL，再將濕潤(rùn)的醋酸鉛試紙放于管口，加熱，嗅其氣味同時(shí)觀察試紙顏色變化。教學(xué)過(guò)程中師生活動(dòng)設(shè)計(jì) 含苯環(huán)的氨基酸有哪些？雙縮脲反應(yīng)顏色與什么相關(guān)？提綱、板書設(shè)計(jì) 原理及簡(jiǎn)要操作步驟作業(yè) ？？主要參考資料[1]《生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)》，何幼鸞、湯文浩，華師出版社，2013[2]《生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)教程》，王金亭，方俊主編，華中科技大學(xué)出版社，2010總結(jié)分析 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中讓學(xué)生重點(diǎn)觀察顏色變化的過(guò)程； 醋酸鉛反應(yīng)的每一步都要記錄現(xiàn)象《醫(yī)學(xué)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)》教案 第 5次課 2學(xué)時(shí)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目 糖的薄層層析 實(shí)驗(yàn)性質(zhì)基礎(chǔ)性實(shí)驗(yàn) 教學(xué)目的和要求。教學(xué)重 點(diǎn)與難點(diǎn)重點(diǎn)：掌握薄層層析的吸附原理。難點(diǎn)：掌握分配系數(shù)，Rf值。實(shí)驗(yàn)材料四種糖樣品、染色液、擴(kuò)展劑、層析缸、層析板等實(shí)驗(yàn)內(nèi)容一、實(shí)驗(yàn)原理★：薄層層析(簡(jiǎn)稱TLC)是在吸附層析基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種微量而快速的層析法，它是在吸附劑或支持劑均勻涂布的薄層上進(jìn)行的，故稱薄層層析。為了使所要分析的樣品各組分得到分離，必須選擇合適的吸附劑。硅膠、氧化鋁和聚酰胺是廣泛采用的吸附劑，在吸附劑或支持劑中添加合適的粘合劑后再涂布，可使薄層緊貼在玻璃板上。糖是多羥基化合物在硅膠G薄層上展層時(shí)，被吸附的強(qiáng)弱有差異，同時(shí)在展開劑中溶解性質(zhì)也有差異。吸附力主要與糖的相對(duì)分子質(zhì)量和羥基數(shù)有關(guān)，一般為三糖〉二糖〉單糖，醛糖〉酮糖〉脫氧糖。經(jīng)過(guò)適當(dāng)?shù)娜軇┱归_后，糖在薄板上的移動(dòng)速度是戊糖＞己糖＞雙糖＞三糖。薄層層析與其他方法比有明顯的優(yōu)點(diǎn)：層析時(shí)間短、樣品用量范圍大()、觀察結(jié)果方便、可以分離多種化合物等，其靈敏度比紙層析高10100倍，顯色方法甚至可以用腐蝕性顯色劑。而且薄層層析法操作方便，設(shè)備簡(jiǎn)單，所以薄層層析法目前應(yīng)用范圍相當(dāng)廣泛。二、實(shí)驗(yàn)步驟▲：1．點(diǎn)樣 選取制備好的薄板一塊， 的直線上均勻選4個(gè)點(diǎn)。用毛細(xì)管分別點(diǎn)上不同的糖樣品于4個(gè)點(diǎn)，樣品量控制在510μg，斑點(diǎn)直徑不超過(guò)3mm。點(diǎn)樣完畢，立即用電熱吹風(fēng)機(jī)吹干樣點(diǎn)。2．展層 將薄板置于盛有層析溶劑的層折缸中，自下向上展層，當(dāng)展層溶劑到達(dá)離薄板頂端約1cm 處時(shí)取出薄板，在溶劑前沿處作一記號(hào)，于80℃下烘干5min。3．顯色 除盡溶劑后，向薄層板上噴霧糖顯色劑，于80℃下烘干10min，則各種糖分別顯出不同的顏色。三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果▲：（1）記下各斑點(diǎn)的位置、顏色，計(jì)算Rf值。（2）鑒定混合糖中糖的種類，并繪出層析圖譜。教學(xué)過(guò)程中師生活動(dòng)設(shè)計(jì) 還有哪些層板方法？提綱、板書設(shè)計(jì) 原理及簡(jiǎn)要操作步驟作業(yè) 何謂Rf值？Rf值與什么因素有關(guān)？主要參考資料[1]《生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)》，董曉燕主編，化學(xué)工業(yè)出版社，2010[2]《生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)教程》，王金亭，方俊主編，華中科技大學(xué)出版社，2010總結(jié)分析 點(diǎn)樣是本實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵，教師在指導(dǎo)學(xué)生操作時(shí)，強(qiáng)調(diào)點(diǎn)樣要輕、快，穩(wěn)、小并且點(diǎn)樣點(diǎn)要集中； 放展板時(shí)，點(diǎn)樣點(diǎn)不要浸如展層溶液中《醫(yī)學(xué)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)》教案 第 6次課 2學(xué)時(shí)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目 酶的特性 實(shí)驗(yàn)性質(zhì)基礎(chǔ)性實(shí)驗(yàn) 教學(xué)目的和要求掌握酶促反應(yīng)速度的幾個(gè)主要影響因素了解淀粉水解程度的鑒定。教學(xué)重 點(diǎn)與難點(diǎn)重點(diǎn)：唾液淀粉酶催化的酶促反應(yīng)；淀粉水解程度的判斷。難點(diǎn)：酶活性的影響因素。實(shí)驗(yàn)材料儀器：水浴鍋、電爐、白瓷板、試管、量筒、漏斗、脫脂棉。試劑：%、%淀粉液、%NaCl、%NaCl溶液、1%CuSO4溶液、1%Na2SOpH=、pH=、pH=。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容一、實(shí)驗(yàn)原理★：溫度與酶促反應(yīng)速度關(guān)系密切。溫度降低時(shí)，酶促反應(yīng)速度降低以至完全停止；隨著溫度升高，反應(yīng)速度逐漸加快。在某一溫度時(shí)反應(yīng)速度達(dá)到最大值，此溫度稱酶作用的最適溫度。溫度繼續(xù)升高，反應(yīng)速度反而下降。人體內(nèi)大多數(shù)酶的最適溫度在37℃左右。 pH值也會(huì)影響酶促反應(yīng)速度。因?yàn)槊副旧硎堑鞍踪|(zhì)，pH不僅影響酶蛋白分子某些基團(tuán)的解離，也影響底物的解離程度，從而影響酶與底物的結(jié)合。當(dāng)酶促反應(yīng)速度達(dá)到最大值時(shí)的溶液pH值，稱為該酶的最適pH。不同的酶最適pH值不盡相同。 凡是能夠提高酶活性，加快酶促反應(yīng)速度的物質(zhì)都稱為酶的激活劑。例如Cl是唾液淀粉酶的激活劑。 凡是能夠降低酶的活性，使酶促反應(yīng)速度減慢，又不使酶變性的物質(zhì)稱為酶的抑制劑。例如Cu2+是唾液淀粉酶的抑制劑。 在不同溫度下，淀粉被唾液淀粉酶水解的程度不同，可由水解混合物遇碘顯現(xiàn)的顏色不同來(lái)判斷：淀粉(藍(lán)色)紅色糊精(紅色)無(wú)色糊精(不顯色)麥芽糖(不顯色)葡萄糖(不顯色) 二、實(shí)驗(yàn)步驟：：用蒸餾水漱口清除食物殘?jiān)俸豢谡麴s水一分鐘后使其流入量筒并稀釋50倍，混勻備用。 （1）取試管3支，編號(hào)，各管按下表依次加入各種試劑。 溫度對(duì)酶促反應(yīng)速度影響實(shí)驗(yàn)加樣表管號(hào) 1 2 3 ％淀粉溶液（mL） 稀釋唾液 （ml） 1 1 1煮沸唾液 — — 1搖勻水浴溫度 37℃ 0℃ 37℃（2）水浴8min后，向各管中各滴加1滴KII2溶液，混勻，觀察各管顏色并解釋結(jié)果▲