【正文】 某些有機酸沉淀蛋白質(zhì) 取1支試管，加入蛋白質(zhì)溶液2mL，再加入1mL5%三氯乙酸溶液，振蕩試管，觀察沉淀的生成。放置片刻傾出清液，向沉淀中加入少量水，觀察沉淀是否溶解。有機溶劑沉淀蛋白質(zhì) 取1支試管，加入2mL蛋白質(zhì)溶液，再加入2mL95%乙醇。觀察沉淀的生成（如果沉淀不明顯，加點NaCl，混勻。 乙醇引起的變性與沉淀 取3支試管，編號。依下表順序加入試劑： 試劑（mL）管號蛋白質(zhì)溶液95%乙醇123111—1———11111—— 振搖混勻后，觀察各管有何變化。放置片刻向各管內(nèi)加入水8mL，然后在第2，3號管中各加一滴甲基紅。觀察各管顏色的變化和沉淀的生成。，觀察沉淀的再溶解。解釋各管發(fā)生的全部現(xiàn)象。教學過程中師生活動設(shè)計 蛋白質(zhì)沉淀原理，什么是蛋白質(zhì)變性？根據(jù)性質(zhì)推測其應(yīng)用提綱、板書設(shè)計 原理及簡要操作步驟作業(yè) ？？主要參考資料[1] 《生物化學實驗》，何幼鸞、湯文浩，華師出版社，2013[2]《生物化學實驗教程》，王金亭，方俊主編，華中科技大學出版社，2010總結(jié)分析 通過原理分析，幫助學生理解“沉淀的蛋白質(zhì)不一定表現(xiàn)為變性；變性的蛋白質(zhì)不一定表現(xiàn)為沉淀”； 重點區(qū)別：“可逆沉淀”與“不可逆沉淀”《醫(yī)學生物化學實驗》教案 第 4 次課 2學時實驗項目 蛋白質(zhì)和氨基酸顯色反應(yīng) 實驗性質(zhì)基礎(chǔ)性實驗 教學目的和要求。教學重 點與難點重點：蛋白質(zhì)與氨基酸的顯色反應(yīng)原理。難點：鑒定蛋白質(zhì)與氨基酸的方法。實驗材料試劑：%醋酸鉛1mL、10%NaOH、1%CuSO4器具：水浴鍋、溫度計、200mL錐形瓶、100mL容量瓶、吸管、試管及試管架 實驗內(nèi)容一、實驗原理★：(biuret reaction) 蛋白質(zhì)和多肽分子中肽鍵在稀堿溶液中與硫酸銅共熱，呈現(xiàn)紫色或紅色，此反應(yīng)稱為雙縮脲反應(yīng)，雙縮脲反應(yīng)可用來檢測蛋白質(zhì)水解程度。 Tyr（Trp）+濃硝酸黃色 Phe+少量濃硫酸+濃硝酸黃色 （半胱氨酸和胱氨酸） RSH+2NaOHROH+Na2S+H2ONa2S +Pb2+PbS+2Na+PbS+2HCl PbCl2+H2S二、實驗步驟▲：(biuret reaction) 取1支試管，加乳蛋白溶液（蛋清:水=1:9）約1mL和10%NaOH約2mL，搖勻，再加1%CuSO4溶液2滴，隨加隨搖。觀察現(xiàn)象，記錄。 向6個試管中按下表加試劑，觀察現(xiàn)象并記錄。雞蛋清溶液（蛋清:水=1:9）管號123456材料雞蛋清液指甲頭發(fā)%苯酚%色氨酸%酪氨酸（滴）4少許少許444濃硝酸（滴）22020444現(xiàn)象逐滴加10% NaOH后現(xiàn)象變化%醋酸鉛1mL、10%NaOH1mL、卵清蛋白1mL三樣試劑混勻加熱，觀察現(xiàn)象。然后冷卻至20~30℃，加10滴濃HCL，再將濕潤的醋酸鉛試紙放于管口，加熱，嗅其氣味同時觀察試紙顏色變化。教學過程中師生活動設(shè)計 含苯環(huán)的氨基酸有哪些？雙縮脲反應(yīng)顏色與什么相關(guān)？提綱、板書設(shè)計 原理及簡要操作步驟作業(yè) ？？主要參考資料[1]《生物化學實驗》，何幼鸞、湯文浩，華師出版社，2013[2]《生物化學實驗教程》，王金亭，方俊主編，華中科技大學出版社，2010總結(jié)分析 實驗過程中讓學生重點觀察顏色變化的過程； 醋酸鉛反應(yīng)的每一步都要記錄現(xiàn)象《醫(yī)學生物化學實驗》教案 第 5次課 2學時實驗項目 糖的薄層層析 實驗性質(zhì)基礎(chǔ)性實驗 教學目的和要求。教學重 點與難點重點：掌握薄層層析的吸附原理。難點：掌握分配系數(shù)，Rf值。實驗材料四種糖樣品、染色液、擴展劑、層析缸、層析板等實驗內(nèi)容一、實驗原理★：薄層層析(簡稱TLC)是在吸附層析基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種微量而快速的層析法，它是在吸附劑或支持劑均勻涂布的薄層上進行的，故稱薄層層析。為了使所要分析的樣品各組分得到分離，必須選擇合適的吸附劑。硅膠、氧化鋁和聚酰胺是廣泛采用的吸附劑，在吸附劑或支持劑中添加合適的粘合劑后再涂布，可使薄層緊貼在玻璃板上。糖是多羥基化合物在硅膠G薄層上展層時，被吸附的強弱有差異，同時在展開劑中溶解性質(zhì)也有差異。吸附力主要與糖的相對分子質(zhì)量和羥基數(shù)有關(guān)，一般為三糖〉二糖〉單糖，醛糖〉酮糖〉脫氧糖。經(jīng)過適當?shù)娜軇┱归_后，糖在薄板上的移動速度是戊糖＞己糖＞雙糖＞三糖。薄層層析與其他方法比有明顯的優(yōu)點：層析時間短、樣品用量范圍大()、觀察結(jié)果方便、可以分離多種化合物等，其靈敏度比紙層析高10100倍，顯色方法甚至可以用腐蝕性顯色劑。而且薄層層析法操作方便，設(shè)備簡單，所以薄層層析法目前應(yīng)用范圍相當廣泛。二、實驗步驟▲：1．點樣 選取制備好的薄板一塊， 的直線上均勻選4個點。用毛細管分別點上不同的糖樣品于4個點，樣品量控制在510μg，斑點直徑不超過3mm。點樣完畢，立即用電熱吹風機吹干樣點。2．展層 將薄板置于盛有層析溶劑的層折缸中，自下向上展層，當展層溶劑到達離薄板頂端約1cm 處時取出薄板，在溶劑前沿處作一記號，于80℃下烘干5min。3．顯色 除盡溶劑后，向薄層板上噴霧糖顯色劑，于80℃下烘干10min，則各種糖分別顯出不同的顏色。三、實驗結(jié)果▲：（1）記下各斑點的位置、顏色，計算Rf值。（2）鑒定混合糖中糖的種類，并繪出層析圖譜。教學過程中師生活動設(shè)計 還有哪些層板方法？提綱、板書設(shè)計 原理及簡要操作步驟作業(yè) 何謂Rf值？Rf值與什么因素有關(guān)？主要參考資料[1]《生物化學實驗》，董曉燕主編，化學工業(yè)出版社，2010[2]《生物化學實驗教程》，王金亭，方俊主編，華中科技大學出版社，2010總結(jié)分析 點樣是本實驗的關(guān)鍵，教師在指導(dǎo)學生操作時，強調(diào)點樣要輕、快，穩(wěn)、小并且點樣點要集中； 放展板時，點樣點不要浸如展層溶液中《醫(yī)學生物化學實驗》教案 第 6次課 2學時實驗項目 酶的特性 實驗性質(zhì)基礎(chǔ)性實驗 教學目的和要求掌握酶促反應(yīng)速度的幾個主要影響因素了解淀粉水解程度的鑒定。教學重 點與難點重點：唾液淀粉酶催化的酶促反應(yīng)；淀粉水解程度的判斷。難點：酶活性的影響因素。實驗材料儀器：水浴鍋、電爐、白瓷板、試管、量筒、漏斗、脫脂棉。試劑：%、%淀粉液、%NaCl、%NaCl溶液、1%CuSO4溶液、1%Na2SOpH=、pH=、pH=。實驗內(nèi)容一、實驗原理★：溫度與酶促反應(yīng)速度關(guān)系密切。溫度降低時，酶促反應(yīng)速度降低以至完全停止；隨著溫度升高，反應(yīng)速度逐漸加快。在某一溫度時反應(yīng)速度達到最大值，此溫度稱酶作用的最適溫度。溫度繼續(xù)升高，反應(yīng)速度反而下降。人體內(nèi)大多數(shù)酶的最適溫度在37℃左右。 pH值也會影響酶促反應(yīng)速度。因為酶本身是蛋白質(zhì)，pH不僅影響酶蛋白分子某些基團的解離，也影響底物的解離程度，從而影響酶與底物的結(jié)合。當酶促反應(yīng)速度達到最大值時的溶液pH值，稱為該酶的最適pH。不同的酶最適pH值不盡相同。 凡是能夠提高酶活性，加快酶促反應(yīng)速度的物質(zhì)都稱為酶的激活劑。例如Cl是唾液淀粉酶的激活劑。 凡是能夠降低酶的活性，使酶促反應(yīng)速度減慢，又不使酶變性的物質(zhì)稱為酶的抑制劑。例如Cu2+是唾液淀粉酶的抑制劑。 在不同溫度下，淀粉被唾液淀粉酶水解的程度不同，可由水解混合物遇碘顯現(xiàn)的顏色不同來判斷：淀粉(藍色)紅色糊精(紅色)無色糊精(不顯色)麥芽糖(不顯色)葡萄糖(不顯色) 二、實驗步驟：：用蒸餾水漱口清除食物殘渣，再含一口蒸餾水一分鐘后使其流入量筒并稀釋50倍，混勻備用。 （1）取試管3支，編號，各管按下表依次加入各種試劑。 溫度對酶促反應(yīng)速度影響實驗加樣表管號 1 2 3 ％淀粉溶液（mL） 稀釋唾液 （ml） 1 1 1煮沸唾液 — — 1搖勻水浴溫度 37℃ 0℃ 37℃（2）水浴8min后，向各管中各滴加1滴KII2溶液，混勻，觀察各管顏色并解釋結(jié)果▲