體內(nèi)藥物分析教程-文庫吧
2025-07-21 02:31 本頁面
【正文】 也應(yīng)考慮使用全血樣品。如：氯噻酮可與紅細(xì)胞結(jié)合，在血細(xì)胞中的藥物濃度比血漿中藥物濃度大50~100倍，且其動力學(xué)行為亦與在血漿中不同，因此宜用全血樣品測定。（二）尿樣體內(nèi)藥物清除主要通過腎臟排泄，經(jīng)尿液排出。尿藥測定主要用于藥物的劑量回收、尿清除率研究。同時，當(dāng)藥物在血中濃度過低難以準(zhǔn)確測定時，尿藥測定亦用于藥物制劑的生物利用度研究，以及根據(jù)藥物劑量回收研究可以預(yù)測藥物的代謝過程及測定藥物的代謝類型等。尿樣包括隨時尿、晨尿、白天尿、夜間尿及時間尿幾種。健康人排出的尿液是淡黃色或黃褐色的，~。放置后會析出鹽類，并有細(xì)菌繁殖、固體成分的崩解使尿液變混濁。因此，尿液采集后如不能立即測定，需低溫冰凍保存或加入防腐劑后冷藏保存。常用的防腐劑有二甲苯、三氯甲烷、醋酸、鹽酸等。保存時間為24~36小時，可置冰箱（4℃）中；長時間保存時，應(yīng)冰凍（?20℃或?80~?70℃）。體內(nèi)藥物的清除可能以原形（母體藥物）或代謝物及其綴合物等形式排出。尿液中藥物濃度大都較高，收集量可以很大（成人一日排尿量為1~5L）。但由于易受食物種類、飲水多少、排汗情況等影響，常使尿藥濃度變化較大，故測定尿液中藥物濃度時，一般采用時間尿（一定時間區(qū)間的尿液），以某一時間段或單位時間內(nèi)尿中藥物的總量（排泄量或排泄率）表示。測定尿液中藥物的總量時，應(yīng)收集服藥后一定時間內(nèi)（如24小時）各時間段排泄的全部尿液，記錄體積；量取一部分測定尿液藥物濃度，乘以尿液量，計算尿藥排泄總量。（三）唾液一些藥物的唾液濃度與血漿游離濃度呈現(xiàn)密切相關(guān)，因此在TDM工作中有可能利用測定唾液中藥物濃度進(jìn)行臨床監(jiān)測。另外，唾液樣品也可用于藥物動力學(xué)的研究。唾液是由腮腺、舌下腺和頜下腺三個主要的唾液腺分泌匯集而成的混合液體。正常成年人唾液分泌量每天約為1～。~，當(dāng)分泌增加時，pH會更高。唾液的采集一般在漱口后約15分鐘進(jìn)行，應(yīng)盡可能在刺激少的安靜狀態(tài)下收集口腔內(nèi)自然流出的唾液。唾液樣品采集后，應(yīng)立即測量其除去泡沫部分的體積。放置后分成泡沫部分、透明部分及乳白色沉淀部分三層。以3000r/min離心10分鐘，取上清液作為藥物濃度測定的樣品。唾液應(yīng)在4℃以下保存，冷凍保存唾液時，解凍后有必要將容器內(nèi)唾液充分?jǐn)噭蚝笤儆?，否則測定結(jié)果會產(chǎn)生誤差。（四）組織在藥物的動物試驗(yàn)及臨床上由于過量服用藥物而引起的中毒死亡時，藥物在臟器組織中的分布情況可為藥物的體內(nèi)動力學(xué)過程提供重要信息。常用的臟器組織有：胃、肝、腎、肺、心、腦等臟器及其他組織。體內(nèi)各種臟器組織樣品在測定之前，首先需均勻化制成水性基質(zhì)勻漿溶液，然后再用適當(dāng)方法萃取藥物。勻漿化操作系將組織樣品中加入一定量的水或緩沖液，在刀片式勻漿機(jī)中勻漿，使待測藥物釋放、溶解，分取上清液測定。第三部分 體內(nèi)樣品的前處理去除蛋白和液液萃取法在測定體內(nèi)藥物及其代謝物時，除少數(shù)情況將體液作簡單處理后直接測定外，一般在測定之前要對樣品進(jìn)行適當(dāng)?shù)念A(yù)處理，為藥物的測定創(chuàng)造良好條件。樣品的預(yù)處理是體內(nèi)藥物分析中極為重要的環(huán)節(jié)，也是分析中最困難，最繁復(fù)的工作。由于藥物自身的理化特性和存在形式以及生物介質(zhì)的差異，對于體內(nèi)樣品的預(yù)處理很難規(guī)定統(tǒng)一方法和固定的程序，而必須結(jié)合后續(xù)的測定方法對分析樣品的要求，采取恰當(dāng)?shù)念A(yù)處理步驟。一、體內(nèi)樣品預(yù)處理的目的使待測藥物游離藥物進(jìn)入體內(nèi)后，即與血漿蛋白結(jié)合，同時部分經(jīng)生物轉(zhuǎn)化生成代謝物及綴合物。通過預(yù)處理，使待測藥物或代謝物從結(jié)合物或綴合物中釋放出來，以便測定藥物或代謝物的總濃度。滿足測定方法的要求體內(nèi)樣品介質(zhì)組成復(fù)雜、干擾多，而待測藥物組分濃度低。因此，需將樣品進(jìn)行適當(dāng)處理，使組分得到凈化和富集，以滿足測定方法對分析樣品的要求。為了防止分析儀器的污染、劣化，提高測定靈敏度和選擇性等。如采用HPLC法測定，為防止蛋白質(zhì)在色譜柱上的沉積、堵塞，需要除去血漿蛋白質(zhì)。預(yù)處理不僅可以延長色譜柱的壽命，也可以改善方法的選擇性（排除生物介質(zhì)的干擾）和組分的可測性或組分的色譜行為。二、常用體內(nèi)樣品預(yù)處理方法常用體內(nèi)樣品的預(yù)處理方法一般有蛋白沉淀法、液液萃取法、液固萃取法。特殊情況下需進(jìn)行綴合物水解、化學(xué)衍生化等。（一）蛋白沉淀法在測定血樣時，首先應(yīng)去除蛋白質(zhì)。去除蛋白質(zhì)可使結(jié)合型的藥物釋放出來，以便測定藥物的總濃度。去除蛋白法有以下幾種方法。溶劑沉淀法加入與水相混溶的有機(jī)溶劑（親水性有機(jī)溶劑），蛋白質(zhì)分子間的靜電引力增加而聚集。常用的水溶性有機(jī)溶劑有乙腈、甲醇、丙酮、四氫呋喃等。含藥物的血漿或血清與水溶性有機(jī)溶劑的體積比為1:（2~3）時，可以將90%以上的蛋白質(zhì)除去。上清液偏堿性，~。操作時，將水溶性有機(jī)溶劑與血漿或血清混合后離心分離，取上清液作為供試溶液。通常用于分離血漿或血清的離心力（約1000180。g）不能將蛋白質(zhì)沉淀完全，而采用高速離心（離心力約15000180。g）約5分鐘便可將析出的蛋白質(zhì)沉淀完全。中性鹽析法加入中性鹽，溶液的離子強(qiáng)度發(fā)生變化，部分蛋白質(zhì)的電性被中和，蛋白質(zhì)因分子間電排斥作用減弱而凝聚。常用的中性鹽有飽和硫酸銨、硫酸鈉、硫酸鎂、氯化鈉、磷酸鈉等。操作時，按血清與飽和鹽溶液的比例為1:（2~3）混合，高速離心約2分鐘，即可除去90%以上的蛋白質(zhì)。所得上清液近中性，~。強(qiáng)酸沉淀法當(dāng)溶液pH低于蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)時，蛋白質(zhì)以陽離子形式存在，可與酸根陰離子形成不溶性鹽而沉淀。常用的強(qiáng)酸有10%三氯醋酸或6%高氯酸溶液。含藥物血清與強(qiáng)酸的比例為1∶，高速離心約2分鐘，就可以除去90%以上的蛋白質(zhì)。因加入了強(qiáng)酸，上清液呈強(qiáng)酸性（pH0~4），在酸性下分解的藥物不宜用本法除蛋白。熱凝固法當(dāng)待測物熱穩(wěn)定性好時，可采用加熱的方法將一些熱變性蛋白質(zhì)沉淀。
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