【正文】 養(yǎng)時(shí)間至 5～ 7 天進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)報(bào)告。菌落蔓延生長(zhǎng)成片的平板不宜計(jì)數(shù)。點(diǎn)計(jì)菌落數(shù)后，計(jì)算各稀釋級(jí)供試液的平均菌落數(shù)，按菌數(shù)報(bào)告規(guī)則報(bào)告菌數(shù)。若同稀釋級(jí)別兩個(gè)平板的菌落平均數(shù)不小于 15，則兩個(gè)平板的菌落數(shù)不能相差 1 倍或以上。 一般營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基用于細(xì)菌計(jì)數(shù)，玫瑰紅鈉培養(yǎng)基用于霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)。在特 殊情況下，若營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上長(zhǎng)有霉菌和酵母菌，玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基上長(zhǎng)有細(xì)菌，則應(yīng)分別點(diǎn)計(jì)霉菌和酵母菌，細(xì)菌菌落數(shù)。然后將營(yíng)養(yǎng)瓊脂上的霉菌和酵母菌或玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基上細(xì)菌數(shù)與玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基上的霉菌和酵母菌或營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上的細(xì)菌數(shù)進(jìn)行比較，以菌落數(shù)高的培養(yǎng)基中的菌落數(shù)為計(jì)數(shù)結(jié)果。 菌數(shù)報(bào)告規(guī)則 若濾膜上無菌落生長(zhǎng)，以 1 報(bào)告菌數(shù)，或 1 乘以稀釋倍數(shù)的值報(bào)告菌落數(shù)。 計(jì)算回收率： 試驗(yàn)組的菌數(shù)回收率（ %）＝（實(shí)驗(yàn)組的平均菌落數(shù) — 供試品對(duì)照組的平均菌落數(shù)） /菌液組的平均菌落數(shù) 100% 稀釋劑對(duì)照組的回收率（ %）＝ (稀釋劑對(duì)照組平均菌落 /菌液組平均菌落數(shù)數(shù) ) 100% 判斷標(biāo)準(zhǔn)： 本次試驗(yàn)各試驗(yàn)組的菌回收率和各稀釋劑對(duì)照組的菌回收率均應(yīng)不低于 70%。 七 異常情況處理 嚴(yán)格按照《微生物限度檢查法 SOP》操作，如在檢測(cè)中有不符合要求的情況出現(xiàn)，分析問題原因后，決定是否需對(duì)本方案中設(shè)定的微生物限度檢查方法進(jìn)行修改，并重新進(jìn)行驗(yàn)證。 八 測(cè)試結(jié)果 細(xì)菌、霉菌 及酵母菌計(jì)數(shù)方法驗(yàn)證結(jié)果見附表 1，此表三份次數(shù)分別為 3次。 九 結(jié)論 ： 十 再驗(yàn)證周期 國(guó)家相關(guān)微 生物限度檢查標(biāo)準(zhǔn)修改后需要對(duì)本方法重新進(jìn)行再驗(yàn)證。 附表一 題目 微生物限度檢查法純化水驗(yàn)證 報(bào)告 編號(hào) 起草人 審核人 批準(zhǔn)人 日期 日期 日期 頒發(fā)部門 質(zhì)量管理部 生效日期 制作備份 分發(fā)部門 質(zhì)量保證 室、 質(zhì)量控制 室 版本： 1 一 概述 本驗(yàn)證是對(duì)細(xì)菌，霉菌酵母菌 計(jì)數(shù)項(xiàng)下檢查法 2 薄膜過濾法進(jìn)行細(xì)菌，霉菌及酵母菌的計(jì)數(shù)方法驗(yàn)證。細(xì)菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證至少應(yīng)進(jìn)行 3 次獨(dú)立的平行試驗(yàn)，并分別計(jì)算各試驗(yàn)菌每次試驗(yàn)的回收率。 二 目的 建立該純化水的微生物限度檢查方法 ，并對(duì)其有效性進(jìn)行評(píng)價(jià)，確保試驗(yàn)方法的完整性，保證檢驗(yàn)結(jié)果的可靠性。 三 范圍 ：純化水 四 參加人員 驗(yàn)證委員會(huì)負(fù)責(zé)驗(yàn)證項(xiàng)目的確定； 質(zhì)控部負(fù)責(zé)該驗(yàn)證方案的起草及組織實(shí)施；驗(yàn)證小組負(fù)責(zé)驗(yàn)證方案的審批； 質(zhì)控部參與驗(yàn)證的實(shí)施及監(jiān)督 崗位職務(wù) 簽 名 組 長(zhǎng) 質(zhì)量控制 室主任 成 員 質(zhì)量 保證室 成員 質(zhì)量控制 室 成員 質(zhì)量控制室 五 內(nèi)容 驗(yàn)證需用儀器設(shè)備： 電熱恒溫培養(yǎng)箱、生化培養(yǎng)箱、 純化水微生物限度檢查質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 項(xiàng)目 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定 細(xì)菌 總數(shù)≤ 100 個(gè) /ml 霉菌、酵母菌 細(xì)菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)方法驗(yàn)證結(jié)果判斷 在 3 次獨(dú)立的平行試驗(yàn)中，稀釋劑對(duì)照組的 菌回收率應(yīng) 不低于 70%。若試驗(yàn)組的 菌回收率均不低于 70%，照該供試液制備方法和計(jì)數(shù)法測(cè)定供試品的細(xì)菌、霉菌及酵母菌；若任一次試驗(yàn)中實(shí)驗(yàn)組的菌回收率低于 70%，應(yīng)采用其他方法消除供試品的抑菌活性，并重新進(jìn)行方法驗(yàn)證。 6 測(cè)試方 法 供試品：制水間送水口 1 純化水 《中國(guó)藥典》 2020 年版二部微生物限度檢查 —— 薄膜過濾法 培養(yǎng)基及菌種 經(jīng)適用性檢查符合規(guī)定的培養(yǎng)基。 枯草芽孢桿菌 CMCC(B) 6350金黃色葡萄球菌 CMCC(B) 2600大腸埃希菌 CMCC（ B） 4410白色念珠菌 CMCC (F) 9800 黑曲霉 CMCC(F)98003。 菌液制備 取新鮮的金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌的培養(yǎng)物至營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基 或營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中， 經(jīng) ℃培養(yǎng) h，用 ％無菌氯化鈉溶液10 倍稀釋 106制成每 1ml 含菌數(shù)為 50～ 100cfu 的菌懸液，做活菌計(jì)數(shù)備用。 取新鮮的白色念珠菌的培養(yǎng)物至改良馬丁培養(yǎng)基或改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基中， 經(jīng)