【正文】 養(yǎng)時間至 5～ 7 天進行菌落計數報告。菌落蔓延生長成片的平板不宜計數。點計菌落數后，計算各稀釋級供試液的平均菌落數，按菌數報告規(guī)則報告菌數。若同稀釋級別兩個平板的菌落平均數不小于 15，則兩個平板的菌落數不能相差 1 倍或以上。 一般營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基用于細菌計數，玫瑰紅鈉培養(yǎng)基用于霉菌及酵母菌計數。在特 殊情況下，若營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上長有霉菌和酵母菌，玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基上長有細菌，則應分別點計霉菌和酵母菌，細菌菌落數。然后將營養(yǎng)瓊脂上的霉菌和酵母菌或玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基上細菌數與玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基上的霉菌和酵母菌或營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上的細菌數進行比較，以菌落數高的培養(yǎng)基中的菌落數為計數結果。 菌數報告規(guī)則 若濾膜上無菌落生長，以 1 報告菌數，或 1 乘以稀釋倍數的值報告菌落數。 計算回收率： 試驗組的菌數回收率（ %）＝（實驗組的平均菌落數 — 供試品對照組的平均菌落數） /菌液組的平均菌落數 100% 稀釋劑對照組的回收率（ %）＝ (稀釋劑對照組平均菌落 /菌液組平均菌落數數 ) 100% 判斷標準： 本次試驗各試驗組的菌回收率和各稀釋劑對照組的菌回收率均應不低于 70%。 七 異常情況處理 嚴格按照《微生物限度檢查法 SOP》操作，如在檢測中有不符合要求的情況出現，分析問題原因后，決定是否需對本方案中設定的微生物限度檢查方法進行修改，并重新進行驗證。 八 測試結果 細菌、霉菌 及酵母菌計數方法驗證結果見附表 1，此表三份次數分別為 3次。 九 結論 ： 十 再驗證周期 國家相關微 生物限度檢查標準修改后需要對本方法重新進行再驗證。 附表一 題目 微生物限度檢查法純化水驗證 報告 編號 起草人 審核人 批準人 日期 日期 日期 頒發(fā)部門 質量管理部 生效日期 制作備份 分發(fā)部門 質量保證 室、 質量控制 室 版本： 1 一 概述 本驗證是對細菌，霉菌酵母菌 計數項下檢查法 2 薄膜過濾法進行細菌，霉菌及酵母菌的計數方法驗證。細菌、霉菌及酵母菌計數方法的驗證至少應進行 3 次獨立的平行試驗，并分別計算各試驗菌每次試驗的回收率。 二 目的 建立該純化水的微生物限度檢查方法 ，并對其有效性進行評價，確保試驗方法的完整性，保證檢驗結果的可靠性。 三 范圍 ：純化水 四 參加人員 驗證委員會負責驗證項目的確定； 質控部負責該驗證方案的起草及組織實施；驗證小組負責驗證方案的審批； 質控部參與驗證的實施及監(jiān)督 崗位職務 簽 名 組 長 質量控制 室主任 成 員 質量 保證室 成員 質量控制 室 成員 質量控制室 五 內容 驗證需用儀器設備： 電熱恒溫培養(yǎng)箱、生化培養(yǎng)箱、 純化水微生物限度檢查質量標準 項目 標準規(guī)定 細菌 總數≤ 100 個 /ml 霉菌、酵母菌 細菌、霉菌及酵母菌計數方法驗證結果判斷 在 3 次獨立的平行試驗中，稀釋劑對照組的 菌回收率應 不低于 70%。若試驗組的 菌回收率均不低于 70%，照該供試液制備方法和計數法測定供試品的細菌、霉菌及酵母菌；若任一次試驗中實驗組的菌回收率低于 70%，應采用其他方法消除供試品的抑菌活性，并重新進行方法驗證。 6 測試方 法 供試品：制水間送水口 1 純化水 《中國藥典》 2020 年版二部微生物限度檢查 —— 薄膜過濾法 培養(yǎng)基及菌種 經適用性檢查符合規(guī)定的培養(yǎng)基。 枯草芽孢桿菌 CMCC(B) 6350金黃色葡萄球菌 CMCC(B) 2600大腸埃希菌 CMCC（ B） 4410白色念珠菌 CMCC (F) 9800 黑曲霉 CMCC(F)98003。 菌液制備 取新鮮的金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌的培養(yǎng)物至營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基 或營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中， 經 ℃培養(yǎng) h，用 ％無菌氯化鈉溶液10 倍稀釋 106制成每 1ml 含菌數為 50～ 100cfu 的菌懸液，做活菌計數備用。 取新鮮的白色念珠菌的培養(yǎng)物至改良馬丁培養(yǎng)基或改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基中， 經