微生物原生質(zhì)體融合育種-文庫(kù)吧
2024-12-29 23:11 本頁(yè)面
【正文】 純化 活性鑒定 保存 制 備 流 程 Here es your footer ? Page 7 ?制備原生質(zhì)體 ， 是原生質(zhì)體技術(shù)的前提和基礎(chǔ) ， 但是不同微生物的細(xì)胞壁組成各不相同 ， 所以制備其原生質(zhì)體的最佳條件也存在著很大差異 。 ?早期人們?cè)剿魇褂醚心サ葯C(jī)械方法和超聲波等物理方法來(lái)制備原生質(zhì) ， 制備效果都不理想 ， 目前人們主要運(yùn)用酶法來(lái)制備原生質(zhì)體 。 人們多傾向于使用復(fù)合酶進(jìn)行處理 ， 常用的酶有纖維素酶 、 蝸牛酶和幾丁質(zhì)酶等 ? 不同微生物在制備原生質(zhì)體時(shí)所需酶和種類不同， 而且所需酶量也存在著差異。 適宜的酶濃度是影響原生質(zhì)體制備的重要因素 ， 酶濃度過(guò)大時(shí)，酶中往往含有對(duì)原生質(zhì)體有害的酶類 ( 如過(guò)氧化物酶、 核糖核酸酶等 ) ，隨著酶量的增加， 雜酶的濃度也會(huì)隨之增加， 當(dāng)達(dá)到一定濃度時(shí)，必然會(huì)影響原生質(zhì)體的活性；酶濃度過(guò)大，易使菌體凝集， 難于原生質(zhì)體化；而且， 細(xì)胞脫壁太徹底， 必然降低原生質(zhì)體的再生率。 原生質(zhì)體制備 Here es your footer ? Page 8 ?菌齡：在菌齡的選擇上， 多采用對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期或生長(zhǎng)中后期的菌， 這是因?yàn)椋? 菌體的不同生理狀態(tài)直接影響到細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)， 對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)菌的細(xì)胞壁中膚聚糖含量最低， 細(xì)胞壁對(duì)酶的作用最敏感， 但是對(duì)數(shù)生長(zhǎng)早期的菌相對(duì)較為脆弱，受酶的過(guò)度作用會(huì)影響原生質(zhì)體的再生率。 ?酶解時(shí)間在原生質(zhì)體制備過(guò)程中也是一個(gè)非常重要的因素。 ?原生質(zhì)體制備液的 p H值， 也可以直接影響到原生質(zhì)體的制備。因?yàn)橹挥性谧钸m p H值時(shí)， 酶的活性才最高， 酶促反應(yīng)速率才最大 影響原生質(zhì)體形成的因素： Here es your footer ? Page 9 ?滲透壓穩(wěn)定劑：由于原生質(zhì)體對(duì)滲透壓非常敏感， 滲透壓穩(wěn)定劑對(duì)于原生質(zhì)體的制備起著重要作用。常用的滲透壓穩(wěn)定劑有 KCl , NaCl , CaCl2 , Mg SO4， 等無(wú)機(jī)鹽和蔗糖、 甘露糖、 山梨醇等， 一般說(shuō)來(lái)， 絲狀真菌以無(wú)機(jī)鹽作為穩(wěn)定劑比較適宜， 而酵母菌則使用糖或醇做穩(wěn)定劑比較好。 Here es you
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