【正文】 養(yǎng)基 加凝固劑，如瓊脂 微生物分離、鑒定、活菌計(jì)數(shù) 選擇培養(yǎng)基 培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，以抑制或阻止不需要的微生物的生長，促進(jìn)所需要的微生物的生長 培養(yǎng)、分離出特定 微生物 鑒別培養(yǎng)基 根據(jù)微生物的代謝特點(diǎn)，在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品 鑒別不同種類的微 生物 2. 方法與原理 返回目錄 核心考點(diǎn)整合 專題十五 生物技術(shù)實(shí)踐 內(nèi)容 方法技術(shù) 實(shí)驗(yàn)原理 大腸桿菌 的培養(yǎng)和 分離 無菌技術(shù) 針對不同對象采用不同的消毒和滅菌的方法，在高溫、高壓、化學(xué)藥劑、強(qiáng)酸和強(qiáng)堿作用下，使微生物蛋白質(zhì)凝固變性，從而達(dá)到殺菌的目的。常采用酒精對實(shí)驗(yàn)者雙手消毒，紫外線對操作環(huán)境照射消毒，對培養(yǎng)基采用高壓蒸汽滅菌法滅菌，對玻璃器皿進(jìn)行干熱滅菌和接種環(huán)灼燒滅菌等 返回目錄 核心考點(diǎn)整合 專題十五 生物技術(shù)實(shí)踐 大腸桿菌 的培養(yǎng)和 分離 平板劃線法 將微生物樣品在固體培養(yǎng)基表面多次做“由點(diǎn)到線”稀釋而達(dá)到分離目的 稀釋涂 布分離法 將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋程度的菌液分別涂布到固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)，以形成標(biāo)準(zhǔn)菌落 分離以尿 素為氮源 的微生物 選擇培養(yǎng)法 以尿素作為培養(yǎng)基的唯一氮源，能合成脲酶的細(xì)菌才能分解尿素 例 1 微生物的分離、培養(yǎng)和計(jì)數(shù)是現(xiàn)代生物工程應(yīng)用中的重要環(huán)節(jié)。如圖 8－ 15－ 3所示為大腸桿菌分離和培養(yǎng)過程中部分操作示意圖。請據(jù)圖分析回答下列問題： 返回目錄 核心考點(diǎn)整合 專題十五 生物技術(shù)實(shí)踐 圖 8－ 15－ 3 (1)實(shí)驗(yàn)過程中對培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、實(shí)驗(yàn)操作者的雙手所采用的滅菌或消毒方法依次是 __________、 ________、________。 (2)培養(yǎng)大腸桿菌時(shí)，在接種前需要檢測培養(yǎng)基是否被污染。對于固體培養(yǎng)基應(yīng)采用的檢測方法是 ____________ ____________________________________________。 (3)圖示是利用 ________法進(jìn)行微生物接種，把聚集的菌種逐步 ________分散到培養(yǎng)基的表面。在灼燒接種環(huán)之后，要等其冷卻后再進(jìn)行劃線的原因是 ______________。 返回目錄 核心考點(diǎn)整合 專題十五 生物技術(shù)實(shí)踐 (4)下列關(guān)于圖示的操作方法和結(jié)果，敘述正確的是 ( ) A．操作前要將接種環(huán)放在火焰邊灼燒滅菌 B．劃線操作須在火焰上進(jìn)行 C．在 5區(qū)域中才可以找到所需菌落 D．在 5區(qū)域中劃線前后都要對接種環(huán)滅菌 (5)若要培養(yǎng)具有耐高糖和耐酸特性的酵母菌，制備選擇培養(yǎng)基時(shí)在基本培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，注意 ________________和 ________________，其目的是 ___________________。 返回目錄 核心考點(diǎn)整合 專題十五 生物技術(shù)實(shí)踐 [答案 ](1)高壓蒸汽滅菌 干熱滅菌 化學(xué)消毒 (2)將未接種的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置適宜的時(shí)間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生 (3)平板劃線 稀釋 以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種 (4)D (5)添加高濃度蔗糖 (葡萄糖 ) 調(diào)低 pH 提供高糖和酸性的篩選環(huán)境 [解析 ] (1)實(shí)驗(yàn)過程中對培養(yǎng)基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌；對培養(yǎng)皿進(jìn)行干熱滅菌；實(shí)驗(yàn)操作者的雙手進(jìn)行化學(xué)消毒。 (2)在培養(yǎng)微生物時(shí)，接種前需要檢測培養(yǎng)基是否被污染。對于固體培養(yǎng)基應(yīng)采用的檢測方法是將未接種的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置適宜的時(shí)間，觀察培養(yǎng)基上是否有 返回目錄 核心考點(diǎn)整合 專題十五 生物技術(shù)實(shí)踐 菌落產(chǎn)生。 (3)題圖所示的接種方法為平板劃線法，把聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面；在灼燒接種環(huán)之后要等其冷卻后才能進(jìn)行操作，以避免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。 (4)在利用平板劃線法接種微生物的實(shí)驗(yàn)中，在圖示的 5區(qū)域中劃線前后都要對接種環(huán)進(jìn)行灼燒滅菌。 (5)在基本培養(yǎng)基上添加高濃度蔗糖 (葡萄糖 )和調(diào)低 pH，可培養(yǎng)出具有耐高糖和耐酸特性的酵母菌。 [點(diǎn)評(píng) ] ① 間接計(jì)數(shù)法中最常用的是稀釋涂布平板計(jì)數(shù)法，它應(yīng)用于統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目，采用的原理是當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長的一個(gè)菌落來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌，通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。②操作方法需要設(shè)置 返回目錄 核心考點(diǎn)整合 專題十五 生物技術(shù)實(shí)踐 重復(fù)組，以增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說服力和準(zhǔn)確性。將待測樣品經(jīng)過一系列的稀釋，然后選擇三個(gè)稀釋度的菌液均勻涂布在平板上，然后培養(yǎng)。需要注意的是為了使結(jié)果接近真實(shí)值，可將同一稀釋度的菌液涂布到 3個(gè)或 3個(gè)以上的平板上，經(jīng)培養(yǎng)，計(jì)算出菌落的平均數(shù)。③實(shí)驗(yàn)要采用對照原則。判斷培養(yǎng)基中是否有雜菌污染，可將未接種的培養(yǎng)基同時(shí)進(jìn)行培養(yǎng)。 判斷選擇培養(yǎng)基是否具有篩選作用，可將對照培養(yǎng)基接種后培養(yǎng)并觀察菌落數(shù)目。 返回目錄 核心考點(diǎn)整合 專題十五 生物技術(shù)實(shí)踐 變式 1 尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)肥料，但若不經(jīng)細(xì)菌的分解，就不能更好地被植物利用。生活在土壤中的微生物種類和數(shù)量繁多，某同學(xué)試圖從土壤中篩選出能高效降解尿素的細(xì)菌 (目的菌 )，下表是該同學(xué)配制的培養(yǎng)基成分： (1)該培養(yǎng)基中的主要營養(yǎng)物質(zhì)包括氮源、碳源、 ______和水。從功能上看，該培養(yǎng)基屬于 ________培養(yǎng)基。 返回目錄 核心考點(diǎn)整合 專題十五 生物技術(shù)實(shí)踐 KH2PO4 Na2HPO4 MgSO47H 2O 葡萄糖 (NH4)2SO4 瓊脂 蒸餾水 g g g g g g 定容到 1000 mL (2)在微生物的培養(yǎng)中，一般要對配制的培養(yǎng)基采用高壓滅菌，其中“高壓”是為了 ________________________ _____________________________________________。 (3)若要培養(yǎng)從土壤中分離出來的目的菌，則該培養(yǎng)基成分應(yīng)如何調(diào)整？ ________，依據(jù)是 _________________。該目的菌的同化作用類型是 ________。 (4)在純化土壤中的目的菌時(shí)，最常用的接種方法是____________。在純化土壤中的該目的菌時(shí)，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上的菌落連成一片，最可能的原因是 ________________。 返回目錄 核心考點(diǎn)整合 專題十五 生物技術(shù)實(shí)踐 [答案 ](1)無機(jī)鹽 選擇 (2)殺死培養(yǎng)基中的細(xì)菌芽孢 (3)將 (NH4)2SO4 換成尿素 要篩選出能降解尿素的細(xì)菌，只能是以尿素作為唯一的氮源 異養(yǎng)型 (4)涂布分離法和劃線分離法 菌液濃度過高 (或培養(yǎng)過程被雜菌污染，或用接種環(huán)劃下一區(qū)域前接種環(huán)沒有滅菌導(dǎo)致菌液沒有稀釋開，言之有理即可 ) [解析 ] (1)微生物培養(yǎng)基的配方中一般包括碳源、氮源、水、無機(jī)鹽等。從培養(yǎng)目的看，本培養(yǎng)基要選擇能分解尿素的微生物，抑制其他微生物生長，因此屬于選擇培養(yǎng)基。(2)對培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌的方法是高壓蒸汽滅菌法，“高壓”是為了殺死培養(yǎng)基中所有的微生物，包括細(xì)菌的 返回目錄 核心考點(diǎn)整合 專題十五 生物技術(shù)實(shí)踐 芽孢，達(dá)到徹底滅菌的目的。 (3)此培養(yǎng)基應(yīng)以尿素為唯一氮源，以達(dá)到抑制或阻止不能利用此氮源的微生物生長的目的。該目的菌使用的碳源是葡萄糖，其同化作用的類型是異養(yǎng)型。 (4)純化目的菌常用的方法是涂布分離法和劃線分離法。涂布分離法的稀釋倍數(shù)一般以平板上菌落數(shù)在 30～ 300個(gè)為宜。劃線分離時(shí)，每次劃線前均要灼燒接種環(huán)，除第一次灼燒是為了滅菌的目的外，以后每次劃線前的灼燒均是為了達(dá)到不斷稀釋菌液的目的。如果發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上的菌落連成一片，那么可能的原因是菌液稀釋倍數(shù)不夠或培養(yǎng)過程被雜菌污染。 返回目錄 核心考點(diǎn)整合 專題十五 生物技術(shù)實(shí)踐 考點(diǎn)二 酶的應(yīng)用 1．方法與原理 返回目錄 核心考點(diǎn)整合 專題十