《谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶》ppt課件-文庫(kù)吧
2024-12-21 19:45 本頁(yè)面
【正文】 差異，香菇和杏鮑菇的谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶酶活性較強(qiáng)，平菇、金針菇的谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶的酶活性較弱，從它們的比活性來(lái)看，杏鮑菇最高，但市場(chǎng)上杏鮑菇的價(jià)格遠(yuǎn)遠(yuǎn)比香菇貴，且香菇容易獲得，所以選用香菇作為以后的試驗(yàn)材料。 超濾方法 采用 WB3 型的中空纖維膜， 截留分子量為 30 000 u，在加冰冷卻的條件下，保持泵出水壓為 ，對(duì)粗酶濾液進(jìn)行超濾循環(huán)，直到達(dá)到相應(yīng)的濃縮倍數(shù)，收集濃縮液。 乙醇沉淀 取粗提取液 100 mL，按 V（提取液） ∶ V（乙醇）=1∶1 ； V（提取液） ∶ V （乙醇） =1∶ ； V（提取液） ∶ V（乙醇） =1∶2 體積分?jǐn)?shù)比分別加入經(jīng)預(yù)冷至 0 ℃的 95 ％乙醇，迅速攪拌，將混和液離心（ 3 ℃ ， 10 000 r/min， 10 min），所得沉淀用 mol/L TrisHCl 緩沖液（ ）溶解，再次以相同的條件離心，取上清液定容于 100 mL，測(cè)定酶活，計(jì)算酶活收率。 （酶活收率分別為 40 ％、 38． 7 ％、 40． 8 ％） 丙酮沉淀法 實(shí)驗(yàn)方法與乙醇相同。 （酶活收率為 ％） 飽和硫酸銨沉淀 室溫下， 加不同量的硫酸銨到 100 mL 經(jīng)超濾后的提取液（預(yù)冷至 0℃ ）中，形成濃度為 20％、 40％、 60％、80％的硫酸銨溶液，保持 6 h 后，離心（ 10 000 r/min、3℃ 、 5 min）， 將所得沉淀用 mol/L Tris HCl 緩沖液（ ）溶解，再次以相同的條件離心，取上清液定容于 100mL，測(cè)定酶活，計(jì)算酶活收率。（在 60%時(shí)酶活最高，達(dá)到 %） 不同沉淀法對(duì)酶收率的影響 分別采用 60 %飽和硫酸銨沉淀、 95 %乙醇與丙酮沉淀法對(duì)粗酶進(jìn)行沉淀分離， 3 種沉淀法的酶活收率分別為56． 9 %、 43． 6 %、 %。
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