【正文】 ROMagar O157顯色瓊脂平板表面水分過多時，應(yīng)在 37℃ 下干燥 10～ 20min，涂布時避免將免疫磁珠涂布到平板的邊緣。不同培養(yǎng)基分離效果不同培養(yǎng)基分離效果n CTSMAC：菌落較大，存在較多的山梨醇發(fā)酵陰性的細菌菌落生長，干擾 O157的檢出 。副溶血弧菌檢驗概況副溶血性弧菌于 1950年從日本一次暴發(fā)性食物中毒中分離發(fā)現(xiàn)。在 37℃ 、含氯化鈉 3～ 4%的環(huán)境中生長最好。本菌嗜鹽畏酸，在無鹽培養(yǎng)基上，不能生長，3%～ 6%食鹽水繁殖迅速，每 8～ 9分鐘為 1周期，低于 %或高于 8%鹽水中停止生長。不耐熱， 56℃ 、 5分鐘即可殺死，90℃ 、 1分鐘滅活。主要修改n 將選擇性增菌液由氯化鈉結(jié)晶紫增菌液改為 3n ％氯化鈉堿性蛋白胨水；n 將選擇性分離培養(yǎng)基由氯化鈉蔗糖瓊脂和嗜鹽n 菌選擇性瓊脂改為硫代硫酸鹽－檸檬酸鹽－膽n 鹽－蔗糖瓊脂和科瑪嘉弧菌顯色培養(yǎng)基；n 增加 API 20E診斷試劑條及全自動細菌生化鑒n 定儀 VITEK；n 增加血清學(xué)分型；n 將動物試驗改為神奈川試驗；n 增加最可能數(shù)檢索表。n 魚類和頭足類動物取表面組織、腸或鰓。n 如為帶殼貝類或甲殼類，則應(yīng)先在符合生活飲用水衛(wèi)生標準的流水中洗刷外殼并甩干表面水分，然后以無菌操作打開外殼，按上述要求取相應(yīng)部分。如無均質(zhì)器，則將樣品放入無菌乳缽中磨碎，然后放在500 mL的滅菌容器內(nèi)，加 225 mL 3％氯化鈉堿性蛋白胨水，并充分振蕩。1 ℃ 培養(yǎng) 8 h～ 18 h。n 另取 1 mL滅菌吸管，按上條操作依次制備 10倍遞增稀釋液，每遞增稀釋一次，換用 1支 1mL滅菌吸管。置 36 ℃ 177。分離n 在所有顯示生長的試管或增菌液中用接種環(huán)沾取一環(huán)，于 TCBS平板或科瑪嘉弧菌顯色培養(yǎng)基平板上劃線分離。于 36 ℃ 177。n 典型的副溶血性弧菌在 TCBS上呈現(xiàn)為圓的、半透明的、表面光滑的綠色菌落，用接種環(huán)輕觸，有類似口香糖的質(zhì)感，直徑 2 mm～ 3 mm。典型的副溶血性弧菌在科瑪嘉弧菌顯色培養(yǎng)基上 呈現(xiàn)為圓的、半透明的、表面光滑的粉紫色菌落，直徑 2 mm～ 3 mm。1 ℃ 培養(yǎng) 18 h～ 24 h。n 涂片鏡檢：將可疑菌落涂片，進行革蘭氏染色，鏡檢觀察形態(tài)。n 挑取純培養(yǎng)的單個可疑菌落，轉(zhuǎn)種 3％氯化鈉三糖鐵瓊脂斜面并穿刺底層， 36 ℃ 177。副溶血性弧菌在 3％氯化鈉三糖鐵瓊脂中的反應(yīng)為底層變黃不變黑，無氣泡，斜面顏色不變或紅色加深，有動力。1 ℃ 培養(yǎng) 24 h，觀察液體混濁情況。確定鑒定n 生化試驗：分別接種含 3％氯化鈉的甘露醇、賴氨酸、 MRVP培養(yǎng)基， 36 ℃ 177。隔夜培養(yǎng)物進行 ONPG試驗。生化特性n 分解葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，不分解乳糖、 、蔗糖。如 果進行定量檢測，根據(jù)證實為副溶血性 弧菌陽性的試管管數(shù)，查 MPN檢索表， 報告每 g（ mL）副溶血性弧菌的 MPN值。無芽孢、無莢膜，有鞭毛，運動活潑，似飛箭樣、穿梭樣翻滾運動。生化特性n 不酵解不氧化碳水化合物；n 氧化酶、觸酶陽性； 抗原結(jié)構(gòu)和血清分型n 菌體抗原（ O）抗原：可分成 45個以上血清型， 第 1 12和 18血清型最為常見 ；n 鞭毛抗原（ H)抗原；n 包膜抗原（ K）抗原。實驗室需具備的條件n 冰箱n 恒溫培養(yǎng)箱： 25℃ 、 36℃ 、 42℃n 恒溫振蕩培養(yǎng)箱n 微需氧培養(yǎng)裝置n 顯微鏡：有相差功能n 高速離心機n 均質(zhì)器n 電子天平空腸彎曲菌檢驗程序24 h～ 48 h圖 1 空腸彎曲菌檢驗程序樣品處理預(yù)增菌 接種 Skirrow 與 mCCDA瓊脂平板增 菌鏡 檢 動力試驗 微需氧 25℃ 177。 1 ℃生長試驗氧化酶試驗彎曲菌屬過氧化氫酶試驗 萘啶酮酸敏感試驗馬尿酸鈉水解試驗 吲哚乙酸脂水解試驗空腸彎曲菌報 告挑取可疑菌落，接種哥倫比亞瓊脂平板頭孢菌素敏感試驗36 ℃ 177。 1 ℃42 ℃ 177。 1 ℃ 24 h～ 48 h樣品處理n 25g+100ml Bolton，均質(zhì) 1～ 2min，取濾液進行培養(yǎng)；空腸彎曲菌對下列因素非常敏感n 在空氣中的暴露；n 干燥；n 低 pH；n 加熱；n 冷凍；n 鹽；n 長期的貯存。1 ℃ 、 24～ 48h平板上雜菌較少繼續(xù)培養(yǎng)100 r/min微需氧振蕩， 42 ℃ 177。 1 ℃ 、 4 h接種 mCCDA和 Skirrow平板或 CFA顯色平板100 r/min振蕩微需氧， 42℃ 177。1℃ 培養(yǎng) 24 h，觀察菌落生長情況48h增菌液與 1:50稀釋液劃線接種 mCCDA和Skirrow平板或 CFA顯色平板48h增菌液劃線接種 mCCDA和Skirrow平板或 CFA顯色平板轉(zhuǎn)種挑取 mCCDA和 Skirrow平板或 CFA顯色平板上的可疑菌落哥倫比亞血平板或 Skirrow無抗生素血平板樣品處理培養(yǎng)條件n 培養(yǎng)溫度 42177。n 如果振蕩培養(yǎng) 24小時即可；n 如果靜置培養(yǎng)需 48小時；n 振蕩幅度 100rpm。預(yù)增菌n 起始培養(yǎng)溫度要低一些n 對于一些細菌細胞受到損傷的n冷凍n長期貯存 (≥10天 )n 36177。鑒定革蘭氏染色形態(tài)觀察 直接相差鏡檢有氧 42 ℃ 177。1 ℃生長實驗吲哚乙酸脂水解試驗彎曲菌屬的鑒定項目 彎曲菌屬特征形態(tài)觀察 陰性彎曲小桿菌，多種形態(tài)，有螺旋形、彎曲桿狀、 S形、逗點狀、飛翔的海鷗形 a。b 海鷗彎曲菌的不同菌株，分別表現(xiàn)為敏感或抗性。結(jié)果報告n 檢樣單位 中檢出或未檢出空腸彎曲菌。1℃ ， 24 h177?！?， 24 h177。1℃ ， 18 h177。1℃ ， 48 h177。n 研究證明與其他腸桿菌科細菌（如沙門菌屬、大腸埃希氏菌等）相比， ES具有較高的耐滲透壓能力。n Vm可有效地抑制 G+菌的生長。分離顯色培養(yǎng)基的基本原理相似，二者都是根據(jù) ES能產(chǎn)生 α 葡萄糖苷酶，分解底物XaGlc產(chǎn)生有色菌落。2. ES都可以在該平板上生長并產(chǎn)生藍綠色菌落3. 其他常見菌在 DFI平板的菌落顏色a. 白色菌落：肺炎克雷伯氏菌、陰溝腸桿菌、大腸埃希氏菌、泛菌屬的多種菌等b. 黃色菌落：赫氏埃希氏菌c. 黑褐色、粉色或中心藍綠菌落：少量菌種n ESIA:藍色， 13mmn 國產(chǎn)顯色培養(yǎng)基36℃177。2h TSA： 25℃ 培養(yǎng)后 典型 ES：黃色陰性對照 E. coli ATCC 25922：白色菌落鑒定（生化反應(yīng)） 生化 試驗 特征黃色素 產(chǎn) 生 ＋氧化 酶 －L賴 氨酸脫 羧 酶 －L鳥 氨酸脫 羧 酶 （＋）L精氨酸雙水解 酶 ＋檸 檬酸水解 (＋ )發(fā) 酵：D山梨醇 （－）L鼠李糖 ＋D蔗糖 ＋D蜜二糖 ＋苦杏仁 甙 ＋注：＋＞ 99%陽性；－＞ 99%陰性；（＋） 90%－ 99%陽性；（－） 90%99%陰性。n 上述方法都比較成熟，穩(wěn)定性較好，已被許多國家和組織的標準采用。質(zhì)量控制n 參加衛(wèi)生部及有關(guān)部門組織的實驗室檢測能力培訓(xùn)、驗證、比對及考核n 接受衛(wèi)生部及有關(guān)部門對我省監(jiān)測工作的督導(dǎo)檢查n 衛(wèi)生廳制定我省質(zhì)量控制考核辦法，并組織實施n 省疾病預(yù)防控制中心負責進行檢驗技術(shù)和數(shù)據(jù)上報的培訓(xùn)質(zhì)控考核n 發(fā)給未知樣品，在規(guī)定的時間內(nèi)，在室內(nèi)質(zhì)控的基礎(chǔ)上，考核實驗室真實的技術(shù)水平和熟練程度，按時上報結(jié)果。背景n 為了保證全國食源性致病菌監(jiān)測檢驗結(jié)果的可靠性，提高監(jiān)測工作質(zhì)量，設(shè)計此次質(zhì)量控制考核。此次考核由中國 CDC營養(yǎng)食品所組織并制訂考核實施方案，通過發(fā)放統(tǒng)一制備的質(zhì)控樣品進行考核，由中國 CDC營養(yǎng)食品所負責對檢驗結(jié)果進行統(tǒng)一評價。n 2. 細菌純培養(yǎng)物為常見食源性致病菌的標準菌株，其背景信息清楚，并檢驗確認。n 4. 15種質(zhì)控樣品應(yīng)盡量覆蓋各個省，省內(nèi)各個檢驗機構(gòu)的質(zhì)控樣品應(yīng)盡量做到互不相同。n 5. 中國 CDC營養(yǎng)食品所應(yīng)于質(zhì)控樣品發(fā)送后一個月，隨機抽取 5份樣品進行檢驗以確認樣品質(zhì)量。n 2. 質(zhì)控樣品在運輸過程中應(yīng)保持 2℃8℃，確保溫度不會超出其范圍。質(zhì)控樣品檢驗n 1. 檢驗機構(gòu)收到質(zhì)控樣品后應(yīng)檢查包裝的完整性，檢驗前應(yīng)放置于 2 ℃5 ℃ 保存。n 3. 檢驗機構(gòu)應(yīng)做好實驗室內(nèi)質(zhì)量控制，并參照中華人民共和國國家標準食品衛(wèi)生檢驗微生物學(xué)部分（ GB/T 47892023）相關(guān)章節(jié)對質(zhì)控樣品進行檢驗，按照相應(yīng)的標準方法進行增菌培養(yǎng)，將增菌培養(yǎng)物劃線接種于相應(yīng)的平板上分離，挑取單個菌落進行生化鑒定等。質(zhì)控結(jié)果報告n 1. 32家省級檢驗機構(gòu)匯總省內(nèi)質(zhì)控結(jié)果，于 2023年 7月 15日前（以郵戳為準）報中國 CDC營養(yǎng)食品所。 n 2. 質(zhì)控樣品中的細菌鑒定到屬，并報告其學(xué)名。將考核結(jié)果反饋被考核單位，并上