【正文】 局限， O157菌落特征性明顯。副溶血弧菌檢驗(yàn)概況副溶血性弧菌于 1950年從日本一次暴發(fā)性食物中毒中分離發(fā)現(xiàn)。該菌存在于近海的海水、海底沉積物和魚(yú)類、貝殼等海產(chǎn)品中。在 37℃ 、含氯化鈉 3～ 4%的環(huán)境中生長(zhǎng)最好。主要引起食物中毒，尤以日本、東南亞、美國(guó)及我國(guó)臺(tái)北地區(qū)多見(jiàn)，也是我國(guó)大陸沿海地區(qū)食物中毒中最常見(jiàn)的一種病原菌。本菌嗜鹽畏酸，在無(wú)鹽培養(yǎng)基上，不能生長(zhǎng)，3%～ 6%食鹽水繁殖迅速，每 8～ 9分鐘為 1周期，低于 %或高于 8%鹽水中停止生長(zhǎng)。對(duì)酸敏感，在 2%醋酸中或 50%的食醋中 1分鐘即可死亡。不耐熱， 56℃ 、 5分鐘即可殺死，90℃ 、 1分鐘滅活。對(duì)低溫及高濃度氯代鈉抵抗力甚強(qiáng)。主要修改n 將選擇性增菌液由氯化鈉結(jié)晶紫增菌液改為 3n ％氯化鈉堿性蛋白胨水；n 將選擇性分離培養(yǎng)基由氯化鈉蔗糖瓊脂和嗜鹽n 菌選擇性瓊脂改為硫代硫酸鹽－檸檬酸鹽－膽n 鹽－蔗糖瓊脂和科瑪嘉弧菌顯色培養(yǎng)基；n 增加 API 20E診斷試劑條及全自動(dòng)細(xì)菌生化鑒n 定儀 VITEK；n 增加血清學(xué)分型；n 將動(dòng)物試驗(yàn)改為神奈川試驗(yàn)；n 增加最可能數(shù)檢索表。樣品制備n 冷凍樣品應(yīng)在 45 ℃ 以下不超過(guò) 15min或在 2 ℃ ～ 5 ℃ 不超過(guò) 18 h解凍，若不能及時(shí)檢驗(yàn)，應(yīng)放于－ 15 ℃ 左右保存；非冷凍而易腐的樣品應(yīng)盡可能及時(shí)檢驗(yàn)，若不能及時(shí)檢驗(yàn)，應(yīng)置 2 ℃ ～ 5 ℃ 冰箱保存，在 24 h內(nèi)檢驗(yàn)。n 魚(yú)類和頭足類動(dòng)物取表面組織、腸或鰓。貝類取全部?jī)?nèi)容物，包括貝肉和體液；n 甲殼類取整個(gè)動(dòng)物，或者動(dòng)物的中心部分，包括腸和鰓。n 如為帶殼貝類或甲殼類，則應(yīng)先在符合生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的流水中洗刷外殼并甩干表面水分，然后以無(wú)菌操作打開(kāi)外殼，按上述要求取相應(yīng)部分。n 以無(wú)菌操作取檢樣 25 g（ mL），加入 3％氯化鈉堿性蛋白胨水 225 mL，用旋轉(zhuǎn)刀片式均質(zhì)器以 8 000 r/min均質(zhì) 1 min，或拍擊式均質(zhì)器拍擊 2 min，制備成 1:10的均勻稀釋液。如無(wú)均質(zhì)器，則將樣品放入無(wú)菌乳缽中磨碎，然后放在500 mL的滅菌容器內(nèi)，加 225 mL 3％氯化鈉堿性蛋白胨水，并充分振蕩。增菌n 定性檢測(cè)n 將上述 1:10稀釋液于 36 ℃ 177。1 ℃ 培養(yǎng) 8 h～ 18 h。n 定量檢測(cè)n 用滅菌吸管吸取 1:10稀釋液 1 mL，注入含有 9 mL 3％氯化鈉堿性蛋白胨水的試管內(nèi)，振搖試管混勻，制備 1:100的稀釋液。n 另取 1 mL滅菌吸管，按上條操作依次制備 10倍遞增稀釋液，每遞增稀釋一次，換用 1支 1mL滅菌吸管。n 根據(jù)食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)要求或?qū)z樣污染情況的估計(jì)，選擇三個(gè)連續(xù)的適宜稀釋度，每個(gè)稀釋度接種 3支含有 9 mL 3％氯化鈉堿性蛋白胨水的試管，每管接種 1 mL。置 36 ℃ 177。1 ℃ 恒溫箱內(nèi)，培養(yǎng) 8 h～ 18 h。分離n 在所有顯示生長(zhǎng)的試管或增菌液中用接種環(huán)沾取一環(huán)，于 TCBS平板或科瑪嘉弧菌顯色培養(yǎng)基平板上劃線分離。一支試管劃線一塊平板。于 36 ℃ 177。1 ℃ 培養(yǎng) 18 h～ 24 h。n 典型的副溶血性弧菌在 TCBS上呈現(xiàn)為圓的、半透明的、表面光滑的綠色菌落，用接種環(huán)輕觸，有類似口香糖的質(zhì)感，直徑 2 mm～ 3 mm。從培養(yǎng)箱取 TCBS平板后，應(yīng)盡快（不超過(guò) 1 h）挑取菌落或標(biāo)記要挑取的菌落。典型的副溶血性弧菌在科瑪嘉弧菌顯色培養(yǎng)基上 呈現(xiàn)為圓的、半透明的、表面光滑的粉紫色菌落，直徑 2 mm～ 3 mm。TCBS瓊脂上面的副溶血性弧菌TCBS瓊脂上面的副溶血性弧菌可以直接計(jì)數(shù)的副溶血性弧菌顯色培養(yǎng)基n 純培養(yǎng)n 挑取 3個(gè)或 以上的可疑 菌落，劃線 3％氯化鈉 胰蛋白胨大 豆瓊脂平板， 36 ℃ 177。1 ℃ 培養(yǎng) 18 h～ 24 h。初步鑒定n 氧化酶試驗(yàn)：挑選純培養(yǎng)的單個(gè)菌落進(jìn) 行氧化酶試驗(yàn)，副溶血性弧菌為氧化酶陽(yáng)性。n 涂片鏡檢：將可疑菌落涂片，進(jìn)行革蘭氏染色，鏡檢觀察形態(tài)。副溶血性弧菌為革蘭氏陰性，呈棒狀、弧狀、卵圓狀等多形態(tài)，無(wú)芽胞，有鞭毛。n 挑取純培養(yǎng)的單個(gè)可疑菌落，轉(zhuǎn)種 3％氯化鈉三糖鐵瓊脂斜面并穿刺底層， 36 ℃ 177。1 ℃ 培養(yǎng) 24h觀察結(jié)果。副溶血性弧菌在 3％氯化鈉三糖鐵瓊脂中的反應(yīng)為底層變黃不變黑，無(wú)氣泡，斜面顏色不變或紅色加深，有動(dòng)力。n 嗜鹽性試驗(yàn)：挑取純培養(yǎng)的單個(gè)可疑菌落，分別接種于不同氯化鈉濃度的胰胨水， 36℃ 177。1 ℃ 培養(yǎng) 24 h，觀察液體混濁情況。副溶血性弧菌在無(wú)氯化鈉和 10％氯化鈉的胰胨水中不生長(zhǎng)或微弱生長(zhǎng)，在 7％氯化鈉的胰胨水中生長(zhǎng)旺盛。確定鑒定n 生化試驗(yàn)：分別接種含 3％氯化鈉的甘露醇、賴氨酸、 MRVP培養(yǎng)基， 36 ℃ 177。1 ℃ 培養(yǎng) 24 h～ 48 h后觀察結(jié)果。隔夜培養(yǎng)物進(jìn)行 ONPG試驗(yàn)。n API 20E生化鑒定試劑盒或 VITEK：刮取 3％ 氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂平板上的單個(gè)菌落，用生理鹽水制備成濁度適當(dāng)?shù)募?xì)胞懸浮液，使用 API 20E生化鑒定試劑盒或 VITEK鑒定。生化特性n 分解葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，不分解乳糖、 、蔗糖。n H２ S（－）、 VP（－）、動(dòng)力（ ＋ ）n 甘露醇（＋）、賴氨酸（＋）、ONPG （－）報(bào)告n 當(dāng)檢出的可疑菌落生化學(xué)性狀符合表 1要 求時(shí)，可以報(bào)告檢出副溶血性弧菌。如 果進(jìn)行定量檢測(cè)，根據(jù)證實(shí)為副溶血性 弧菌陽(yáng)性的試管管數(shù)，查 MPN檢索表， 報(bào)告每 g（ mL）副溶血性弧菌的 MPN值?？漳c彎曲菌檢驗(yàn)空腸彎曲菌分類地位螺菌科彎曲菌屬空腸彎曲菌芬奈爾彎曲菌豬彎曲菌結(jié)腸彎曲菌同性戀?gòu)澢虝簭澢簭澢ｚt彎曲菌胎兒亞種 口腔亞種等等13個(gè)種形態(tài)與染色n 革蘭陰性彎曲小桿菌，多種形態(tài)，有螺旋形、彎曲桿狀、 S形、逗點(diǎn)狀、飛翔的海鷗形，陳舊培養(yǎng)物中可變成球形。無(wú)芽孢、無(wú)莢膜，有鞭毛，運(yùn)動(dòng)活潑，似飛箭樣、穿梭樣翻滾運(yùn)動(dòng)。 培養(yǎng)特性n 微需氧： 5％氧氣、 10％二氧化碳、85％氮?dú)猓籲 最適生長(zhǎng)溫度： 42～ 43℃ ；n 營(yíng)養(yǎng)要求高，含血液和血清的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好，液體培養(yǎng)基混濁生長(zhǎng)。生化特性n 不酵解不氧化碳水化合物；n 氧化酶、觸酶陽(yáng)性； 抗原結(jié)構(gòu)和血清分型n 菌體抗原（ O）抗原：可分成 45個(gè)以上血清型， 第 1 12和 18血清型最為常見(jiàn) ；n 鞭毛抗原（ H)抗原；n 包膜抗原（ K）抗原。 抵抗力n 不強(qiáng)，直射陽(yáng)光、干燥可殺滅；n 60℃ 5min 滅活；n 紫外線照射 5min可滅活；n 一般消毒劑均可殺滅。實(shí)驗(yàn)室需具備的條件n 冰箱n 恒溫培養(yǎng)箱： 25℃ 、 36℃ 、 42℃n 恒溫振蕩培養(yǎng)箱n 微需氧培養(yǎng)裝置n 顯微鏡：有相差功能n 高速離心機(jī)n 均質(zhì)器n 電子天平空腸彎曲菌檢驗(yàn)程序24 h～ 48 h圖 1 空腸彎曲菌檢驗(yàn)程序樣品處理預(yù)增菌 接種 Skirrow 與 mCCDA瓊脂平板增 菌鏡 檢 動(dòng)力試驗(yàn) 微需氧 25℃ 177。 1 ℃生長(zhǎng)試驗(yàn)有氧 42 ℃ 177。 1 ℃生長(zhǎng)試驗(yàn)氧化酶試驗(yàn)彎曲菌屬過(guò)氧化氫酶試驗(yàn) 萘啶酮酸敏感試驗(yàn)馬尿酸鈉水解試驗(yàn) 吲哚乙酸脂水解試驗(yàn)空腸彎曲菌報(bào) 告挑取可疑菌落，接種哥倫比亞瓊脂平板頭孢菌素敏感試驗(yàn)36 ℃ 177。 1 ℃ 4 h42 ℃ 177。 1 ℃42 ℃ 177。 1 ℃ 24 h～ 48 h42 ℃ 177。 1 ℃ 24 h～ 48 h樣品處理n 25g+100ml Bolton，均質(zhì) 1～ 2min，取濾液進(jìn)行培養(yǎng)；空腸彎曲菌對(duì)下列因素非常敏感n 在空氣中的暴露；n 干燥；n 低 pH；n 加熱；n 冷凍；n 鹽；n 長(zhǎng)期的貯存。預(yù)增菌、增菌和分離程序平板上雜菌較多微需氧 42 ℃ 177。1 ℃ 、 24～ 48h平板上雜菌較少繼續(xù)培養(yǎng)100 r/min微需氧振蕩， 42 ℃ 177。1 ℃ 、 24 h100 r/min微需氧振蕩， 36 ℃ 177。 1 ℃ 、 4 h接種 mCCDA和 Skirrow平板或 CFA顯色平板100 r/min振蕩微需氧， 42℃ 177。1℃ 、 24 h微需氧 42 ℃ 177。1℃ 培養(yǎng) 24 h，觀察菌落生長(zhǎng)情況48h增菌液與 1:50稀釋液劃線接種 mCCDA和Skirrow平板或 CFA顯色平板48h增菌液劃線接種 mCCDA和Skirrow平板或 CFA顯色平板轉(zhuǎn)種挑取 mCCDA和 Skirrow平板或 CFA顯色平板上的可疑菌落哥倫比亞血平板或 Skirrow無(wú)抗生素血平板樣品處理培養(yǎng)條件n 培養(yǎng)溫度 42177