【正文】 謝謝大家！謝謝觀看 /歡迎下載BY FAITH I MEAN A VISION OF GOOD ONE CHERISHES AND THE ENTHUSIASM THAT PUSHES ONE TO SEEK ITS FULFILLMENT REGARDLESS OF OBSTACLES. BY FAITH I BY FAITH。質(zhì)控結(jié)果的評價n 中國 CDC營養(yǎng)食品所負責將各檢驗機構的上報數(shù)據(jù)進行綜合統(tǒng)計處理，對質(zhì)控結(jié)果作出分析評價。質(zhì)控結(jié)果報告內(nèi)容應包括細菌檢驗結(jié)果（附表一）和檢驗記錄及詳細數(shù)據(jù)等。n 4. 檢驗過程中應注意生物安全防護，實驗完成后應對質(zhì)控樣品進行無害化處理。n 2. 檢驗機構應在收到質(zhì)控樣品后 30天內(nèi)進行檢驗。n 菌株運送應按照國際民航組織《危險物品航空安全運輸技術細則》規(guī)定的生物材料等級 B即 UN3373的要求執(zhí)行。質(zhì)控樣品運輸n 1. 質(zhì)控樣品應密封完整，確保其在運輸過程中不會受到外來污染。每個檢驗機構一個編號，編號由省市代碼加阿拉伯數(shù)字組成，每個檢驗機構兩支平行質(zhì)控樣品，每支 5 g，一支用于檢驗，一支為備份。n 3. 質(zhì)控樣品應經(jīng)過穩(wěn)定性測試，于 2 ℃5 ℃ 放置，分別于 1周、 2周、 1個月后，隨機抽取 5種質(zhì)控樣品檢驗確認，經(jīng)驗證樣品中所含食源性致病菌種類在放置前后沒有變化才可作為質(zhì)控樣品。質(zhì)控樣品制備n 1. 質(zhì)控樣品是用經(jīng)輻照滅菌的奶粉（需經(jīng)檢驗確認奶粉中無本底細菌）做原料，再混合足量的 14種細菌純培養(yǎng)物。n 本次質(zhì)控范圍為承擔 2023年全國食源性致病菌監(jiān)測工作任務的全國 31個省、直轄市、自治區(qū)以及新疆生產(chǎn)建設兵團的檢驗機構。總結(jié)分析檢測結(jié)果，以達到促進提高檢驗人員的理論和檢驗技術水平，并對實驗室進行綜和評價的目的。n 在腸桿菌的生化鑒定中使用最廣泛的是API 20E和 Vitek GNI+。商業(yè)生化鑒定系統(tǒng)的應用n 推薦使用的 ES生化鑒定方法有很多，主要有 API 20E， ID 32E， Biolog GN2 MicroPlate， VITEK GNI+等。1℃ 24 h177。n 顯色培養(yǎng)基對 ES的選擇性較好， ES形成的特征性菌落易于辨認，以 DFI為例：1. 硫化氫指示劑可以區(qū)分 ES和產(chǎn)生少量 α 葡萄糖苷酶但 H2S陽性菌株（如普通變形桿菌）。而較高的生長溫度可以進一步抑制其他細菌的生長。加入 M 的 NaCl在保證 ES良好生長的同時，可以有效地抑制上述其他細菌的生長。4h阪崎腸桿菌檢驗程序前增菌和增菌mLSTVm，即在大腸菌群增菌肉湯 LST中另加入適量的NaCl和 Vm 。2h前增菌選擇性增菌選擇性分離生化鑒定TSA25℃ 177。2h檢樣100 g/mL+稀釋液 900 mL36℃ 177。2h挑取 藍綠色菌落1mL + mLSTVm 10mL44℃ 177。阪崎腸桿菌檢驗程序阪崎腸桿菌檢驗阪崎腸桿菌檢驗程序報 告生化鑒定挑取黃色菌落DFI瓊脂36℃ 177。空彎菌株的保存n 分離已經(jīng)鑒定的菌株應在血平板上經(jīng) 2次純化，立即保存于 20％甘油的 布氏肉湯菌種保存管中，置于－ 80 ℃ 保存；n 冷凍干燥保存。動力觀察 螺旋狀運動 b氧化酶試驗 陽性微需氧 25℃ 生長試驗不生長有氧 42℃ 生長試驗 不生長a 有些菌株形態(tài)不典型； b 有些菌株運動不明顯空腸彎曲菌的鑒定 特征 空腸彎曲菌結(jié)腸彎曲菌紅嘴鷗彎曲菌烏普薩拉彎曲菌過氧化氫酶試驗 ＋ ＋ ＋ －或微弱馬尿酸鈉水解試驗 ＋ － － －吲哚乙酸酯水解試驗 ＋ ＋ － +頭孢菌素敏感試驗 R R R S萘啶酮酸敏感試驗 Sa Sa R/ Sb S注：＋ 陽性；－陰性； R抗性； S敏感a 空腸彎曲菌和結(jié)腸彎曲菌對萘啶酮酸的耐藥性呈現(xiàn)增長趨勢。1 ℃生長實驗氧化酶試驗 結(jié)果相符合者，確定為彎曲菌屬過氧化氫酶試驗萘啶酮酸敏感試驗頭孢菌素敏感試驗馬尿酸鹽水解試驗結(jié)果相符者為空腸彎曲菌報 告 可疑菌落微需氧 25 ℃ 177。1℃n 4～ 5h分離 mCCDAn 基礎培養(yǎng)基n 營養(yǎng)成分；n 中和代謝產(chǎn)物，維持生長環(huán)境的成分；n 木炭n 抗生素n 頭孢哌酮鈉 32mg 3代頭孢，廣泛抗菌n 兩性霉素 B 10mg 抑制霉菌、酵母菌n 利福平 10mg 廣譜抗菌藥 主要用于抗結(jié)核分離 Skirrown 基礎培養(yǎng)基n FBP溶液n 丙酮酸鈉n 焦亞硫酸鈉n 硫酸鈉鐵n 抗生素溶液n 頭孢哌酮n 兩性霉素Ｂn 利福平n 無菌脫纖維綿羊血分離培養(yǎng)基 CFA瓊脂n 為法國梅里埃產(chǎn)品n 僅有成品平板出售n 購買周期太長（下訂單現(xiàn)做，然后發(fā)貨，一般要 2個月）n 保質(zhì)期短，一般收到平板就快過期了。n 微需氧條件：n 5% O2 10%CO2 85N2彎曲菌在 Bolton肉湯中培養(yǎng)n 均勻混濁，微紅，不臭。1℃ ；n 時間 24, 48h。1℃ 、 24 h微需氧 42 ℃ 177。1 ℃ 、 24 h100 r/min微需氧振蕩， 36 ℃ 177。預增菌、增菌和分離程序平板上雜菌較多微需氧 42 ℃ 177。 1 ℃ 24 h～ 48 h42 ℃ 177。 1 ℃ 4 h42 ℃ 177。 1 ℃生長試驗有氧 42 ℃ 177。 抵抗力n 不強，直射陽光、干燥可殺滅；n 60℃ 5min 滅活；n 紫外線照射 5min可滅活；n 一般消毒劑均可殺滅。 培養(yǎng)特性n 微需氧： 5％氧氣、 10％二氧化碳、85％氮氣；n 最適生長溫度： 42～ 43℃ ；n 營養(yǎng)要求高，含血液和血清的培養(yǎng)基上生長良好，液體培養(yǎng)基混濁生長。空腸彎曲菌檢驗空腸彎曲菌分類地位螺菌科彎曲菌屬空腸彎曲菌芬奈爾彎曲菌豬彎曲菌結(jié)腸彎曲菌同性戀彎曲菌短暫彎曲菌胎兒彎曲菌海鷗彎曲菌胎兒亞種 口腔亞種等等13個種形態(tài)與染色n 革蘭陰性彎曲小桿菌，多種形態(tài)，有螺旋形、彎曲桿狀、 S形、逗點狀、飛翔的海鷗形，陳舊培養(yǎng)物中可變成球形。n H２ S（－）、 VP（－）、動力（ ＋ ）n 甘露醇（＋）、賴氨酸（＋）、ONPG （－）報告n 當檢出的可疑菌落生化學性狀符合表 1要 求時，可以報告檢出副溶血性弧菌。n API 20E生化鑒定試劑盒或 VITEK：刮取 3％ 氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂平板上的單個菌落，用生理鹽水制備成濁度適當?shù)募毎麘腋∫?，使?API 20E生化鑒定試劑盒或 VITEK鑒定。1 ℃ 培養(yǎng) 24 h～ 48 h后觀察結(jié)果。副溶血性弧菌在無氯化鈉和 10％氯化鈉的胰胨水中不生長或微弱生長，在 7％氯化鈉的胰胨水中生長旺盛。n 嗜鹽性試驗：挑取純培養(yǎng)的單個可疑菌落，分別接種于不同氯化鈉濃度的胰胨水， 36℃ 177。1 ℃ 培養(yǎng) 24h觀察結(jié)果。副溶血性弧菌為革蘭氏陰性，呈棒狀、弧狀、卵圓狀等多形態(tài)，無芽胞，有鞭毛。初步鑒定n 氧化酶試驗：挑選純培養(yǎng)的單個菌落進 行氧化酶試驗，副溶血性弧菌為氧化酶陽性。TCBS瓊脂上面的副溶血性弧菌TCBS瓊脂上面的副溶血性弧菌可以直接計數(shù)的副溶血性弧菌顯色培養(yǎng)基n 純培養(yǎng)n 挑取 3個或 以上的可疑 菌落，劃線 3％氯化鈉 胰蛋白胨大 豆瓊脂平板， 36 ℃ 177。從培養(yǎng)箱取 TCBS平板后，應盡快（不超過 1 h）挑取菌落或標記要挑取的菌落。1 ℃ 培養(yǎng) 18 h～ 24 h。一支試管劃線一塊平板。1 ℃ 恒溫箱內(nèi)，培養(yǎng) 8 h～ 18 h。n 根據(jù)食品衛(wèi)生標準要求或?qū)z樣污染情況的估計，選擇三個連續(xù)的適宜稀釋度，每個稀釋度接種 3支含有 9 mL 3％氯化鈉堿性蛋白胨水的試管，每管接種 1 mL。n 定量檢測n 用滅菌吸管吸取 1:10稀釋液 1 mL，注入含有 9 mL 3％氯化鈉堿性蛋白胨水的試管內(nèi)，振搖試管混勻，制備 1:100的稀釋液。增菌n 定性檢測n 將上述 1:10稀釋液于 36 ℃ 177。n 以無菌操作取檢樣 25 g（ mL），加入 3％氯化鈉堿性蛋白胨水 225 mL，用旋轉(zhuǎn)刀片式均質(zhì)器以 8 000 r/min均質(zhì) 1 min，或拍擊式均質(zhì)器拍擊 2 min，制備成 1:10的均勻稀釋液。貝類取全部內(nèi)容物，包括貝肉和體液；n 甲殼類取整個動物，或者動物的中心部分，包括腸和鰓。樣品制備n 冷凍樣品應在 45 ℃ 以下不超過 15min或在 2 ℃ ～ 5 ℃ 不超過 18 h解凍，若不能及時檢驗，應放于－ 15 ℃ 左右保存；非冷凍而易腐的樣品應盡可能及時檢驗，若不能及時檢驗，應置 2 ℃ ～ 5 ℃ 冰箱保存，在 24 h內(nèi)檢驗。對低溫及高濃度氯代鈉抵抗力甚強。對酸敏