分子標(biāo)記ssr標(biāo)記ppt課件-閱讀頁(yè)
2025-05-21 08:13本頁(yè)面
【正文】 記。錨定微衛(wèi)星引物的組合進(jìn)行 PCR擴(kuò)增 ，通過(guò) 電泳 獲得多位點(diǎn)的微衛(wèi)星圖，通過(guò)不同的 A FLP引物和 539。TP摻入 DNA中而不會(huì)被修復(fù)系統(tǒng)修復(fù)，因此可以積累含 (IUTP的 DNA. ? （ 2）用 M13輔助 }I體超感染初級(jí)文庫(kù)，產(chǎn)生富含 (IUTP的單鏈環(huán)狀 DNA，并分離出這種單鏈環(huán)狀 DNA. ? （ 3）以單鏈環(huán)狀 DNA為模板，以微衛(wèi)星序列為引物用 PCR方法對(duì)含微衛(wèi)星序列的 DNA進(jìn)行延仲，這樣雙鏈 DNA大多數(shù)是含微衛(wèi)星序列的 . ? （ 4）轉(zhuǎn)化這種反應(yīng)產(chǎn)物到 (dut ung的野生型菌株，由于單鏈 DNA的轉(zhuǎn)化率低，轉(zhuǎn)化得到的克隆大部分為雙鏈 (IUTPase和 U DG,可以利用自身的修復(fù)系統(tǒng)以雙鏈 DNA n1:39。TP,可以得到復(fù)制 .而經(jīng)轉(zhuǎn)化而來(lái)的少量的單鏈環(huán)狀 DNA由于尿哈陡一 DNA糖基化酶降解 cIUTP的作用，得不到有效的復(fù)制 .這樣構(gòu)建出的文庫(kù)中就富集了很高比率的含微衛(wèi)星序列的克隆 . ? 選擇雜交法富集微衛(wèi)星序列 ? 這是現(xiàn)在很多研究人員采用的方法 .它 在傳統(tǒng)構(gòu)建基因組文庫(kù)的基礎(chǔ)上加上了選擇雜交富集含微衛(wèi)星序列的片段、 PCR擴(kuò)增的過(guò)程 .雜交的方法有兩種 :1)把含有核有酸重復(fù)的探釗‘或寡核有酸重復(fù)序固定在尼龍膜 }‘9].2)把核有酸重復(fù)的探針 寡核有酸重復(fù)序列的 5’端生物素化，然后固定在帶有鏈霉親和素的磁珠上 .通過(guò)雜交、洗脫非特異雜交 DNA片段后，再用 PCR擴(kuò)增富集洗脫的特異雜交的片段，然后轉(zhuǎn)化大腸桿菌，構(gòu)建富集微衛(wèi)星序列的基因組文庫(kù)。一端加上 B sgl接頭并擴(kuò)增、用單酶切 (EcoRl)在標(biāo)簽兩端產(chǎn)生粘端、連接標(biāo)簽形成串聯(lián)序列、克隆及測(cè)序 . 前景 — 計(jì)算機(jī)自動(dòng)化 ? 以前尋找 SSR的方法是通過(guò)構(gòu)建文庫(kù)，合成短重復(fù)序列分子標(biāo)記做 Southem雜交，然后將 SSR兩端序列測(cè)出來(lái)，再設(shè)計(jì)引物，篩選多態(tài)性，將分子標(biāo)記整合到遺傳圖譜上 .周期長(zhǎng) ， 費(fèi)用大 ，所以有必要在以后基因組時(shí)代使用基于全基因組的 計(jì)算機(jī)自動(dòng)化SSR標(biāo)記篩選方法 。通過(guò)這個(gè)項(xiàng)目能夠建立一整套的 SSR分析方法及軟件開(kāi)發(fā)的流程，并且繪制出水稻全基因組的遺傳圖譜。這樣就可以在進(jìn)行 SSR在基因組中的分布及其與基因組結(jié)構(gòu)進(jìn)化關(guān)系的研究的同時(shí)，得到一套反映等位基因片段多態(tài)性極高的 SSR標(biāo)記 :從另一個(gè)角度，這又為其他特異 PCR標(biāo)記的研究和開(kāi)發(fā)提供了許多借鑒和有價(jià)值的參考。而 SSR在具有一個(gè)全基因組時(shí)，就可以著手進(jìn)行全面的研究了。 ? 由于目前對(duì)這方面的研究基于傳統(tǒng)的方法比較多，積累起了很多資料，但基于全基因組的 SSR自動(dòng)化尋找只在國(guó)外有所報(bào)道。 THANK YOU ~~ 作物 081 班
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