【正文】 G41 4 G O H 5 ’ CU CU C U 5 ’ CU CU CU G G G G A G G G G G A G G 第二次轉(zhuǎn)移： G4 1 4 位于 G －結(jié)合位點(diǎn)， 5 ’ 外顯子位于底物結(jié)合位點(diǎn) 5 ’ CU CU CU 3 ’ 3 ’ G G 5 ’ CU CU C U G G G G G A G G G G G A G G 第三次轉(zhuǎn)移： G4 1 4 位于 G －結(jié)合位點(diǎn)，內(nèi)含子的 5 ’ 端位于底物結(jié)合位點(diǎn) G GG U U U A CC U G G G A G G G G G A G G G U U U A C CU 圖 1 3 四膜蟲 I 類內(nèi)含子剪接的機(jī)制 3 ’ G O H H O CC CCC Cp 3 ’ G CO H 5 ’ p CCC CC O H 3 ’ 5 ’ p CCC CC O H 3 ’ G G G A G G 5 ’ G G G A G G 5 ’ C 5 與 I G S 位點(diǎn)附近的 RN A 5 ’ 端配對(duì) 另一輪 C 5 轉(zhuǎn)移反應(yīng)開始 , 釋放 C 6 3 ’ G O H 3 ’ G CO H 5 ’ p CCC CC O H 3 ’ G G G A G G 5 ’ G G G A G G 5 ’ H O CC CCp G O H 攻擊 Cp C 鍵 C 被轉(zhuǎn)移到 3 ’－ G 上； C4 被釋放 圖 1 3 L 1 9 RN A 具有催化 C 6 合成的能力（三） I型內(nèi)含子與 核酶 核酶 （ Ribozyme） 提出 1981年 在研究四膜蟲rRNA時(shí)發(fā)現(xiàn)的； （ ribonucleic acid） 和酶（ enzyme） 這兩個(gè)詞 “ 重組 ” 成一個(gè)新的詞： 核酶 是指本質(zhì)為 RNA或以 RNA為主含有蛋白質(zhì)輔基的一類具有催化功能的物質(zhì) 。 核酶發(fā)現(xiàn)的意義 ? （ 1）突破了酶的概念 . 是一種自體催化； ? （ 2）揭示了內(nèi)含子自我剪接的奧秘；促進(jìn)了 RNA的研究。 Ⅱ 型內(nèi)含子的剪接 (一 )結(jié)構(gòu)特點(diǎn) (1) 邊界序列為5′↓GUGCG……YnAG↓ ； (2) 有 6個(gè)莖環(huán)結(jié)構(gòu)； 有分支點(diǎn)順序。 ? 分枝點(diǎn) A的 2′OH對(duì) 5′端交界處的磷酸二酯鍵發(fā)動(dòng)親核進(jìn)攻 ， 產(chǎn)生了套索 （ lariat）結(jié)構(gòu)； ? 切下的外顯子 1其 3′OH繼續(xù)對(duì)內(nèi)含子 3′端的交界序列進(jìn)行親核進(jìn)攻 ， 同時(shí)釋放出套索狀的內(nèi)含子 。 真核 tRNA內(nèi)含子切除的特點(diǎn) (1)沒有交界序列 ， 也沒有內(nèi)部引導(dǎo)序列； (2)剪切反應(yīng)信號(hào) 是二級(jí)結(jié)構(gòu) ， 而不是 一級(jí)結(jié)構(gòu)； (3)是依賴于蛋白質(zhì)性的 RNase， 而不是核 糖擬酶或 snRNP； (4)反應(yīng)的本質(zhì)不是轉(zhuǎn)酯反應(yīng) 。 tRNA內(nèi)含子切除過程 真核 mRNA前體內(nèi)含子的 剪接反應(yīng) (一 ) 結(jié)構(gòu)特點(diǎn)： 1. 邊界順序 :符合 GUAG法則 。 5′端有一保守序列可以和 U1 snRNA的5′端的保守順序互補(bǔ) 內(nèi)含子剪接位點(diǎn) 及保守序列 （二）參與剪接的加工因子 ? 剪接體 ： 由 snRNA和蛋白質(zhì)因子組成 ? 核小分子 RNA（ snRNA）至少有 ： ? U1 ： 5/剪切點(diǎn)結(jié)合 ? U2 ： ? U4 /U5 ： ? U6： ? 蛋白質(zhì)因子：有 20余種 ? ? (三 )剪接機(jī)制 剪接因子 snRNPs U1,U2,U5和 U4/U6。 5/剪接點(diǎn)磷酸基轉(zhuǎn)移到分支點(diǎn)A 的 2/ OH上，形成 2/，5/轉(zhuǎn)酯化合物（套索 RNA結(jié)構(gòu)） 第二步： 剪接反應(yīng)。 ? 1986年 錐蟲線粒體 mRNA轉(zhuǎn)錄加工時(shí)發(fā)現(xiàn) m RNA的多個(gè)編碼位置上加入或丟失尿苷酸； 1990年在 高等動(dòng)物和病毒 中也發(fā)現(xiàn)了編輯現(xiàn)象 。 ( 參考 B . L e w i n : 《 G E N E S 》Ⅵ , 1 9 9 7 ， F i g 3 1 . 1 4 ) 線蟲 coxII 基因的編輯 TU A U A U G U U U U G UU G U U U A UU A U G U GA UU A U GG U U U U G U U U U U U A UU GG U A U U U U U U A U A UUU AUUU AA U U U G UU GA U A A A U A C A U U U U A U U U G UU UG UU AA U U U U U U U G U U U U G U G U U U U U GG UU TT TTTTU A GG U U U U U U U G UU G U U G UU G U U U U G U A UU A U GA UU GA G UUU G UU G U U U GG U U U U U U G U U U U TT TTTTUU G U G A A A C C A G UU A U G A GA G U U U GC A UU G UU A UUU A UU ACA UU A A G UU GG U G U U U U U GG UU C 圖 1 3 4 4 錐蟲 ( T . b r u ce i ) c o x Ⅱ 基因的部分 R N A 順序。 ( 參考 B. L ew i n : 《 G E N E S 》 Ⅵ , 1 9 9 7 ， Fi g 3 1 . 1 6 ) RNA編輯的方式 ? （ 1）單堿基突變 ? （ 2） U的缺失和添加 編輯的可能機(jī)制 ? 1990年 指導(dǎo) RNA（ guide gRNA）。 5. 堿基的化學(xué)修飾 方式： 甲基化 去氨基化 硫化 同分異構(gòu)化 二價(jià)健的飽和化 核苷酸替代 核酶 ? 核酶概念 ? 核酶結(jié)構(gòu)類型 ? 核酶催化功能 RNA在生物進(jìn)化中的地位 ? RNA比相應(yīng) DNA序列含有更多信息； ? RNA是獲得性遺傳的分子基礎(chǔ)； ? RNA在生物進(jìn)化中的地位 ? DNA是信息分子； ? 蛋白質(zhì)是功能分子； ? RNA既是信息分子，又是功能