【正文】 合成的延伸 終止和抗終止 RNA合成的延伸 酶的后端移 酶的前端動(dòng) 1 b p 3 5 b p 不移動(dòng) RN A 上加 1 N t酶的合端繼續(xù)移動(dòng) , 酶的前端每移動(dòng) 1 b p RN A 就 不移動(dòng)增加 1 N t , 目前已增 3 4 bp加了 8 N t . 酶的前端把連續(xù)地 向前移動(dòng)數(shù)個(gè) bp酶的合端繼續(xù)移 2 7 bp動(dòng) 1 b p , RN A 已增加 9 N t 3 5 bp 圖 1 2 1 1 在延伸時(shí) RN A p o l 的移動(dòng)特點(diǎn) 延伸速度快慢和 轉(zhuǎn)錄暫停 延伸速度 ? 延伸速度快慢與 DNA模板含 G、 C的區(qū)域有關(guān)； ? 在富含 G、 C區(qū)慢或暫停。 轉(zhuǎn)錄暫停 當(dāng) RNA聚合酶轉(zhuǎn)錄過程遇到特殊序列，轉(zhuǎn)錄速度變慢為 ； 這段序列稱為 暫停信號(hào) . RNA合成的終止 一旦 RNA聚合酶啟動(dòng)了基因轉(zhuǎn)錄，它就會(huì)沿著模板5‘→ 3’方向不停地移動(dòng)合成 RNA鏈，直到遇到 終止信號(hào) 時(shí)才釋放新生的 RNA鏈，并與模板 DNA脫離。 模板 DNA上都有終止轉(zhuǎn)錄的特殊信號(hào) 終止子 ，每個(gè)基因或操縱子都有一個(gè)啟動(dòng)子，一個(gè)終止子。 在新生 RNA中出現(xiàn) 發(fā)卡式結(jié)構(gòu) 會(huì)導(dǎo)致 RNA聚合酶的暫停，破壞 RNADNA雜合鏈 539。端的正常結(jié)構(gòu)。寡聚 U的存在使雜合鏈的 339。端部分出現(xiàn)不穩(wěn)定的 rUdA區(qū)域。 原核轉(zhuǎn)錄的終止 以大腸桿菌為例 （ 體外實(shí)驗(yàn) ） 終止子 （ terminator,t） ? 弱終止子－需要 ρ 因子 （ rho factor） 又稱為 依賴 ρ 因子終止子 ? 強(qiáng)終止子－內(nèi)在終止子 （ intrinsic terminators） 又稱為 不依賴 ρ 因子終止子 a. 依賴于 ρ因子的終止 ρ因子 是一個(gè)相對(duì)分子質(zhì)量為 105的六聚體蛋白。它能水解各種核苷三磷酸，實(shí)際上是一種 NTP酶。由于催化了 NTP的水解， ρ因子能促使新生的 RNA鏈從三元轉(zhuǎn)錄復(fù)合物中解離出來，從而終止轉(zhuǎn)錄。 作用： ρ因子即附著在新生的 RNA鏈上，靠ATP水解產(chǎn)生的能量，沿著 5‘→ 3’方向朝 RNA聚合酶移動(dòng)，到達(dá) RNA的 3‘OH端后取代了暫停在終止位點(diǎn)上的 RNA聚合酶，并從模板和酶上釋放RNA，完成轉(zhuǎn)錄過程。終止過程需要消耗能量，所以， ρ因子具有終止轉(zhuǎn)錄和核苷三磷酸酶兩種功能。 b、不依賴于 ρ 因子的終止 若終止點(diǎn)上游存在一個(gè)富含 GC堿基的二重對(duì)稱區(qū)，由這段 DNA轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的 RNA容易形成 發(fā)卡式結(jié)構(gòu) ；在終止點(diǎn)前面有一段由 48個(gè) A組成的序列，導(dǎo)致 轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物 的 3‘端為寡聚U。這兩種結(jié)構(gòu)特征的存在同樣決定了轉(zhuǎn)錄的終止。 在新生 RNA中出現(xiàn) 發(fā)卡式結(jié)構(gòu) 會(huì)導(dǎo)致 RNA聚合酶的暫停，破壞 RNADNA雜合鏈 539。端的正常結(jié)構(gòu)。寡聚 U的存在使雜合鏈的 339。端部分出現(xiàn)不穩(wěn)定的 rUdA區(qū)域。 強(qiáng)終止子的結(jié)構(gòu) ? … NNAAGCGCCGNNNCCGGCGCTTTTTTNNN… ? … NNTTCGCGGCNNNGGCCGCGAAAAAANNN… DNA ? … NNAAGCGCCGNNNCCGGCGCUUUUUUNNN… RNA 強(qiáng)終止子的結(jié)構(gòu)特點(diǎn) ? (1) 有回文結(jié)構(gòu)存在； ? （ 2） 莖的區(qū)域富內(nèi)含 GC； ? (3) 強(qiáng)終止子 3′ 端上有 6個(gè) U； ? N ? N N ? ? N N ? G C ? C G ? C G ? G C ? C G ? G C ? C U ? … NNNNC U UUUU… OH 3’ ? 強(qiáng)終止子結(jié)構(gòu)的模式圖 抗終止 ? 主要有兩種方式： ? 破壞 終止位點(diǎn) RNA的莖環(huán)結(jié)構(gòu)； ? 例如：色氨酸操縱子結(jié)構(gòu)基因前的一段序列 衰減子 ? 依賴于蛋白質(zhì)因子的轉(zhuǎn)錄 抗終止 ； ? 例如： λ噬菌體中的 N基因 N蛋白具有抗終止作用 內(nèi)含子的剪接、編輯 及化學(xué)修飾 轉(zhuǎn)錄后 RNA的加工成熟 ?RNA加工成熟主要包括 ： ?5’加帽子結(jié)構(gòu)； 3’加多聚 A；切除內(nèi)含子 。 RNA中的內(nèi)含子 ? 三類轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物加工的重要內(nèi)容 切除內(nèi)含子 ? 內(nèi)含子概念和功能：被受關(guān)注，功能不清 ? 內(nèi)含子剪切信號(hào) GUAG法則 ? 既內(nèi)含子的 5/邊界序列為 GU， 3/邊界序列為AG又稱 chambon法則。 剪切位點(diǎn)交界順序 8 左 (5 39。 ) 位點(diǎn) 右 (3 39。 ) 位點(diǎn) 外顯子 A64G7 3 G10 0 T100A62AG8G84T63… 1 2 P y N C65A1 00G100 N 外顯子 內(nèi)含子 圖 1 3 2 1 內(nèi)含子和外顯子的交界順序 G T A G 法則 ( 仿 B. L e w i n : 《 G E N E S 》Ⅵ , 1 9 9 7 ， Fi g 3 0 . 3 ) RNA內(nèi)含子的 3種剪接方式 ? 第一類：自我剪接內(nèi)含子（ Ⅰ 型、 Ⅱ 型） ? 第二類：蛋白質(zhì)（酶）參與剪接內(nèi)含子 ? 第三類： snRNP參與剪接內(nèi)含子 三類內(nèi)含子的分布 I型內(nèi)含子的剪接 Cech等 1981年 用四膜蟲分離得到了 35S的前體rRNA， 它含有一個(gè)長(zhǎng) 413bp的內(nèi)含子 。 此 35S rRNA要加入一價(jià)或二價(jià)陽離子及 GTP就可以在體外釋放出 413b的線性的內(nèi)含子 ， 若繼續(xù)保溫 ， 那么線形內(nèi)含子又可形成環(huán)狀的RNA。 這就意味著 35S RNA在 GTP的作用下可以自我剪接 。 外顯子 1 內(nèi)含子 外顯子 2 轉(zhuǎn)錄 剪接 + 凝膠電泳 凝膠電泳 凝膠電泳 3 5 SRN A 環(huán)狀內(nèi)含子 線型內(nèi)含子圖 1 3 2 2 四膜蟲 3 5 S RN A 保溫前后的電泳結(jié)果 ( 仿 B. L ew i n : 《 G E N E S 》Ⅵ , 1 9 9 7 ， Fi g 3 1 . 1 ) 內(nèi)含子插入 β 半乳糖苷酶基因的第 10 個(gè)密碼子中 轉(zhuǎn)錄