酶組織化學(xué)ppt課件-閱讀頁
2025-01-20 20:14本頁面
【正文】 1分鐘。 ④ 流水沖洗 3～ 5分鐘后，換蒸餾水。 結(jié)果 酶活性部位 → 棕黑色 硫化鉛沉淀。 ② 孵育時間不可過長，否則染色擴(kuò)散或核染色。 膜 ATPase、 Mito— ATPase、 TTPase（硫胺素焦磷酸酶） 顯示酶的組織化學(xué)方法 二、偶聯(lián)偶氮色素法 （偶氮色素法） 指用人工合成的酶底物，在酶的作用下，產(chǎn)生分解產(chǎn)物，后者與 重氮鹽 結(jié)合，引起 偶聯(lián)偶氮反應(yīng) ，使其形成 不溶性的偶氮色素 ，以此證明酶的定位。 常用底物 萘酚 ASBI 萘酚 ASD 萘酚 ASMX 萘酚 ASTR 常用重氮鹽 堅牢蘭 RR 堅牢蘭 B 堅牢紅 RC 堅牢紅 TR 堅牢紫 B 六偶氮副品紅 六偶氮新品紅 應(yīng)用： 可顯示 ALPase, ACPase, 酯酶 , 轉(zhuǎn)肽酶 , 肽酶 , β 葡糖苷酶等 偶氮色素法分類 （一）同時偶聯(lián)法 ? 在底物混合液中，通過酶的分解作用所得到的沉積物，立即形成重氮化合物和偶氮色素。 偶氮偶聯(lián)法顯示 ACP ［原理］ 以 奈酚的衍生物磷酸酯 為底物，在酸性 PH（ ）下，經(jīng)酸性磷酸酶水解釋放出 萘酚 AS— BI，立即與 六氮化對品紅 偶聯(lián)，生成 紅色 偶氮染料，用以代表酸性磷酸酶活性。不固定或固定于丙酮 ∶ 氯仿（ 1∶1 ）混合液內(nèi)， 4℃ ， 2～ 5min ① 標(biāo)本入下列孵育液 ， 37℃ ， 30～ 60分鐘。 ④ 流水沖 5分鐘后入蒸餾水。 ［結(jié)果］ 酶的活性部位呈 紅色 ，核蘭色。 涂片 腹腔巨噬細(xì)胞酸性磷酸酶 X400 ［對照］ 用抑制劑 NaF濃度為 10mmol/L ［注意事項］ ①六氮鹽濃度不能太高 ②背景會略帶黃色 顯示酶的組織化學(xué)方法 三、 色素形成法 在酶作用下使無色化學(xué)物質(zhì)在局部形成色素沉著 四唑鹽法 聯(lián)苯胺色素法 靛酚藍(lán)法（吲哚酚法） 顯示酶的組織化學(xué)方法 （一）四唑鹽法 含有四唑鹽或雙四唑鹽的底物混合液，在 脫氫酶 的作用下，從底物分離出來的 氫原子 與 無色的四唑鹽 或雙四唑鹽相結(jié)合，形成 紅色或藍(lán)色 的甲臢或二甲臢色素。 四唑鹽法顯示琥珀酸脫氫酶 ※ 琥珀酸脫氫酶是線粒體的標(biāo)志酶之一。 ? 【 結(jié)果 】 酶活性處呈棕色 過氧化物酶 ? 催化各種物質(zhì)被過氧化氫（ H2O2）所氧化 ? 見于乳腺、甲狀腺、唾液腺、肥大細(xì)胞等 ? 髓過氧化物酶 見于中性和嗜酸性白細(xì)胞及其前體細(xì)胞中，對造血系統(tǒng)疾病的鑒別診斷極為重要 ? 免疫組化中常用 辣根過氧化物酶 （ HRP）作為大分子示蹤劑 ? 【 顯示方法 】 二氨基聯(lián)苯胺法 示過氧化物酶 ? 【 基本原理 】 過氧化物酶作用于底物（ 3，3二氨基聯(lián)苯胺， DAB），催化底物被 H2O2氧化，生成棕色的沉淀 ? 【 作用液 】 DAB， TrisHcl緩沖液， H2O2 ? 【 結(jié)果 】 酶活性處呈棕色 小鼠腹腔巨噬細(xì)胞 過氧化物酶 *400 白血病涂片 過氧化物酶 X400 顯示酶的組織化學(xué)方法 （三）靛酚藍(lán)法（吲哚酚法） ? 用于檢測 氧化酶 ，也可用于細(xì)胞色素氧化酶和過氧化物酶等。 如細(xì)胞色素氧化酶 顯示酶的組織化學(xué)的其他方法 ? 色素底物法 —— 是將有的色素鹽類作為酶的底物，它本身不染組織細(xì)胞，但在酶的作用下分解出來的色素卻能沉著于酶所在部位。 酶組織化學(xué)的應(yīng)用 1. 了解組織、細(xì)胞的代謝活動 2. 細(xì)胞類型的判斷 3. 了解細(xì)胞定位 4. 用于腫瘤的研究 5. 用于免疫組化和雜交組化的顯示手段 要求掌握的酶 ? 堿性磷酸酶 ? 酸性磷酸酶 ? 葡萄糖－ 6－磷酸酶 ? 三磷酸腺苷酶 ? 乳酸脫氫酶 ? 琥珀酸脫氫酶 ? 過氧化物酶法
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1