【正文】 試驗 1. 抗球蛋白血清應按說明書使用最適稀釋度，避免出現(xiàn)前帶現(xiàn)象而誤判為陰性。 3. 被檢標本需用 EDTA抗凝，避免出現(xiàn)假陽性；標本不宜久置，防止紅細胞上已致敏的抗體游離到血漿中，造成假陰性或陽性程度降低。因此受檢紅細胞一定要充分洗滌，除去血清蛋白，避免假陰性的產生。 紅細胞血型檢測 48 第四節(jié)抗球蛋白實驗技術 （二）間 接抗球蛋白試驗 1. 紅細胞洗滌過程中不宜中途停止，每次加生理鹽水前要是紅細胞完全懸浮；洗滌過程中防止交叉污染；應充分洗滌，避免殘留抗體部分中和抗球蛋白試劑而產生假陰性。 3. 離心后應立即看結果，不宜久置。 六、體外補體致敏 七、紅細胞自身凝集 紅細胞血型檢測 50 第五節(jié) 聚凝胺介質實驗技術 聚凝胺實驗技術是一種快速、簡便檢測紅細胞不完全抗體的方法，可用來檢測 IgG抗體，但 IgG抗體的抗 K抗體除外。加入中和液后，僅由凝聚胺引起的非特異性聚集，會因電荷中和而分散，而由抗體介導的特異性凝集則不會分散 紅細胞血型檢測 51 第五節(jié) 聚凝胺介質實驗技術 ? 聚凝胺 (Polybrene)配血方法 患者 獻血者 主側 次側 ? 室溫放置 1 分鐘 主次側均 加聚凝胺 紅細胞血型檢測 52 第五節(jié) 聚凝胺介質實驗技術 ? 聚凝胺 (Polybrene)配血方法 離心 聚凝胺引起紅細胞非特異性凝集 主次側均 加重懸液 看結果 陽性 陰性 紅細胞血型檢測 53 第五節(jié) 聚凝胺介質實驗技術 二、 應用范圍 血型鑒定、抗體篩查及交叉配血試驗 三、特點 靈敏、速度快、準確、操作要求高。 ，對缺乏唾液酸的細胞 （如： T細胞及 B細胞）無作用。 紅細胞血型檢測 55 第六節(jié) 微柱凝集試驗技術 一、微柱凝膠試驗原理 將紅細胞和抗血清加在凝膠上部反應，離心后觀察凝集的紅細胞，被阻擋在小柱中凝膠的上部或中央，證明發(fā)生凝集反應，判斷凝集反應陽性 ,游離的紅細胞，被擠過裝有過濾介質的小柱，而到達小柱的底部，證明未發(fā)生凝集判斷陰性 . 操作及結果的判定 紅細胞血型檢測 56 第六節(jié) 微柱凝集試驗技術 二、應用 直接抗球蛋白試驗和 間接抗球蛋白試驗。 如 Rh其他抗原（ CcEe）定型 三、特征及優(yōu)點 結果清晰明確 ，可重復性強。 2. 實驗室溫度較低時，易出現(xiàn)假陽性結果。 4. 離心力過大時，容易使弱陽性成為陰性格局。 微柱凝集試驗技術獎在臨床各個領域有更為廣闊的發(fā)展。 ，在物理條件改變時，抗體又會從抗原抗體復合物上分離下來，將抗體由抗原抗體復合物上分離下來的試驗稱為放散試驗 紅細胞血型檢測 60 第七節(jié) 吸收放射試驗 （一）相關的概念 抗體可與相應的抗原在適當條件下可發(fā)生凝集或致敏，這種結合是可逆的，如改變某些實驗條件，抗體可從紅細胞解離下來，然后檢測解離下來的抗體。 ※ 冷自身抗體 ： 理論上講凡是 37℃ 與自身紅細胞不反應，而只有在低于37℃ 環(huán)境下才能和自身紅細胞反應的抗體均可稱為冷自身抗體。 ※ 溫自身抗體 ： 溫自身抗體是指在 37℃ 條件下能和自身紅細胞反應的抗體。溫自身抗體可分為兩類 :大多數(shù)情況下為 lgG類溫自身抗體，極少數(shù)情況下也會存在 IgM性質的溫自身抗體 。 IgM抗體通常在 4℃ 條件下比 22℃ 或 37℃ 更容易吸收，且容易完全吸收。 應用范圍： ① 自身冷抗體的吸收②其他冷抗體的吸收 應用范圍： ① 自身冷抗體的吸收②其他冷抗體的吸收 紅細胞血型檢測 62 第七節(jié) 吸收放射試驗 （三）放散實驗 放散實驗是把結合到紅細胞膜上的抗體解離下來，用于其他目的。 ※ 放散的目的： 得到紅細胞上致敏的抗體或沒有抗體吸附的紅細胞，前者得到的是自身抗體，用于自身吸收；后者得到的是紅細胞，用于血型鑒定和交叉配血 。 紅細胞血型檢測 63 第七節(jié) 吸收放射試驗 167。 注意事項 溫度過高，抗體可能變性；溫度過低，容易使 抗體從紅細胞上解離不完全 167。 167。 167。此方法不能將補體從紅細 胞膜上解離下來。 適用范圍 ABO抗體的放散，如新生兒溶血病的相關檢測實驗。 適用范圍 用于解離紅細胞膜上致敏的 IgG抗體對紅細胞進行抗原 的鑒定，但 Kell系統(tǒng)的鑒定除外。 注意事項 該方法可破壞 Kell系統(tǒng)抗原，特別是 K抗原，因此本方法 放散后的細胞不能進行 Kll系統(tǒng)定型試驗。用這種可溶性物質來抑制抗體與紅細胞凝集的試驗，稱為凝集抑制試驗。 紅細胞血型檢測 67 第八節(jié) 凝集抑制試驗 二、抑制物處理及抗體標化 ☆收集液體 唾液標本作為抑制物，煮沸使酶失活。 紅細胞血型檢測 68 第八節(jié) 凝集抑制試驗 三、唾液中可溶性 ABH血型物質的檢測 （一）結果分析 ☆ 陰性對照管的凝集強度一般為 ﹢﹢﹢ ～ ﹢﹢﹢ ，陽性 對照管的凝集強度應為 ﹣ ，鹽水對照管凝集強度硬度 與相應的唾液測定管。 ☆ 稀釋后的效價管可導致紅細胞凝集，最高稀釋倍數(shù)的倒 數(shù)即為唾液中血型物質的效價。尤其是 PCR技術問世后，各種與 PCR相結合的檢測技術進一步推動了基因研究的發(fā)展。 紅細胞血型分子生物學檢測的的方法有 ： PCRSSP技術、 PCRSSOP技術、 PCRRFLP技術、 PCRRDB技術、 PCRDNA測序、基因芯片、 PCR指紋圖等。 紅細胞血型檢測 72 第九節(jié) 紅細胞血型分子生物學檢測 二、應用 ★ ABO疑難血型的鑒定 ★發(fā)現(xiàn) ABO血型新等位基因 ★對于 ABO基因突變的研究 ★新生兒溶血病（ HDN）的輔助診斷 ★某些疾病的病理研究 ★法醫(yī)個體識別 紅細胞血型檢測 73 第九節(jié) 紅細胞血型分子生物學檢測 分子生物學檢測血型技術的應用，使血型分析達到了更精細的水平，并因此發(fā)現(xiàn)了更多的血型的多的血型的多態(tài)性。 對小量含 DNA的任何組織樣品，用分子生物學分型技術對紅細胞抗原 den基因型做鑒定，不受血清中自身抗體、不規(guī)則抗體以及疾病和假、弱凝集的影響，對保證安全輸血有著重要意