【正文】 紅細(xì)胞血型檢測 1 第二章 紅細(xì)胞血型檢測 江西醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校 11級檢驗班 01 紅細(xì)胞血型檢測 2 目錄 第一節(jié) 輸血前免疫學(xué)檢查 第二節(jié) 鹽水介質(zhì)試驗技術(shù) 第三節(jié) 酶處理試驗技術(shù) 第四節(jié) 抗球蛋白試驗技術(shù) 第五節(jié) 聚凝胺介質(zhì)試驗技術(shù) 第六節(jié) 微柱凝集試驗技術(shù) 第七節(jié) 吸收放散技術(shù) 第八節(jié) 凝集試驗技術(shù) 第九節(jié) 紅細(xì)胞血型分子生物學(xué)檢測技術(shù) 紅細(xì)胞血型檢測 3 學(xué)習(xí)要求： ? ？ ? ？ ? RhD血型鑒定時的注意事項有哪些？ ? ？ ? ？ ? ？ 紅細(xì)胞血型檢測 4 第一節(jié) 輸血前免疫學(xué)檢查 目的：是輸入的血液成分在受血者的體內(nèi)發(fā)揮其有效作用 . 在正常情況下，輸入的紅細(xì)胞在受血者體內(nèi)不溶血，輸入的的血漿成分不破壞受血者的紅細(xì)胞 。 主要程序： 患者的病史和標(biāo)本等的檢查、核對及處理 。ABO血型和 RhD血型定型；紅細(xì)胞同種抗體篩查和堅定；交叉配血試驗；血小板輸注前的抗體檢查和配合試驗；不規(guī)則抗體的篩選和鑒定；交叉配血結(jié)果的報告和發(fā)血等。 紅細(xì)胞血型檢測 5 一、受血者標(biāo)本的處理 （一） 標(biāo)本的采集 輸血除了需要達(dá)到預(yù)期的治療效果外，必須確保輸血安全。 血樣由臨床護(hù)士完成，因嚴(yán)格遵守一次只能為一位受血抽取標(biāo)本， 標(biāo)本不得從輸液管或輸液側(cè)筋脈中抽取 。 （二）標(biāo)本的接收 輸血科技師接收血樣標(biāo)本時，應(yīng)認(rèn)真核對受血者的相關(guān)信息，盡可能了解受血者有無輸血史、藥物史、妊娠史等情況。 如果有輸血史，這有必要進(jìn)一步了解最后一次輸血的日期，若 3個月內(nèi)輸過血，那么供血者的紅細(xì)胞沒有完全代謝消失，可能依然存在于血液循環(huán)中，導(dǎo)致血型定型試驗中出現(xiàn)混合凝集的結(jié)果。 紅細(xì)胞血型檢測 6 （三）標(biāo)本的要求 1. 對輸血前檢查的血液標(biāo)本應(yīng)嚴(yán)格要求能代表受血者當(dāng)前的免疫學(xué)狀況，標(biāo)本還需經(jīng)鑒定和標(biāo)記，保證其準(zhǔn)確無誤地來自受血者和供血者，應(yīng)和血液申請單上的內(nèi)容一致。 2. 防止受血者血液標(biāo)本稀釋和（或）溶血，若采集過程中發(fā)生溶血則不能使用。 3. 受血者配血試驗對的血液標(biāo)本必須是輸血前 3天采集的。 4. 若受血者使用右旋糖酐、 PVP等治療，應(yīng)注意洗滌被檢紅細(xì)胞。 5. 每次輸血后，受血者和供血者的標(biāo)本必須保存于2~8℃ 至少 7天。 紅細(xì)胞血型檢測 7 二、受血者和供血者 ABO和 Rh定型 （一）、原理 根據(jù)紅細(xì)胞膜表面上有無 A 抗原或 B抗原，將血型分為 A型、B型、 AB型、 O型 4種。 A型人血清中含有抗 B抗體， B型人血清中含有抗 A抗體， O型人血清中含有抗 A抗體和抗 B抗體， AB型人血清中不含 ABO抗體。 正定型 ：用抗 A及抗 B試劑與被檢紅細(xì)胞反應(yīng)，檢測紅細(xì)胞 表面是否存在 A抗原或 B抗原。 反定型 ：用標(biāo)準(zhǔn) A細(xì)胞及 B細(xì)胞與被檢血清反應(yīng)，檢測血清中是否存在抗體。 由于 ABO血型系統(tǒng)抗體多數(shù)為 IgM類，在室溫鹽水介質(zhì)中就能出現(xiàn)明顯的凝集反應(yīng)。 紅細(xì)胞血型檢測 8 二、受血者和供血者 ABO和 Rh定型 紅細(xì)胞血型檢測 9 二、受血者和供血者 ABO和 Rh定型 最適的反應(yīng)溫度為 4℃ ，但在室溫反應(yīng)良好，所以常規(guī)的 ABO定型試驗僅在室溫進(jìn)行。 (1)定型方法：正、反定型的試管離心方法目前仍被認(rèn)為是最可信賴的 ABO定型方法 。 1)定型試劑：有些 ABO血型診斷試劑是以人的血清匯聚而制成的，但必須具備以下條件： 第一，高效價 (1： 128)的 IgM抗 A或抗 B。 第二，具較好的親和性并不含冷凝集素。 第三，必需具有檢測 A2， A2B血型的能力。 第四，血清必須通過 HIV， HCV， HBV等檢查或經(jīng)病毒滅活。另外一些 ABO定型試劑是由來自培養(yǎng)細(xì)胞株的單克隆抗體所制成。 紅細(xì)胞血型檢測 10 二、受血者和供血者 ABO和 Rh定型 2)ABO亞型的鑒定： ABO亞型的鑒定通常使用下列試劑：抗 A、抗 B、抗 A抗 H、抗 AIA1紅細(xì)胞、 A2紅細(xì)胞、 B型紅細(xì)胞和 O型紅細(xì)胞。有些工作者在定型試驗中，常規(guī)地選擇應(yīng)用抗 AB抗血清，以避免錯誤地把弱反應(yīng)性 A或 B型紅細(xì)胞分類為 O型。一般抗 AB試劑對 Ax型紅細(xì)胞可增加凝集反應(yīng)的強(qiáng)度。 紅細(xì)胞血型檢測 11 二、受血者和供血者 ABO和 Rh定型 (一 )ABO定型試驗中的常見問題：造成這種正反定型不一致的原因主要有： 1)技術(shù)和管理錯誤：這是 ABO定型中產(chǎn)生異常結(jié)果的主要原因，包括：標(biāo)本或試劑搞錯；器材不潔；試劑污染或失效；離心過度或不足；陽性反應(yīng)產(chǎn)生溶血現(xiàn)象未能識別；漏加試劑；結(jié)果記錄或判斷錯誤；細(xì)胞與血清間比例不適當(dāng)。 2)血清異常： 血清蛋白引起緡錢狀形成，影響反定型結(jié)果。 3)紅細(xì)胞致敏 ：受免疫球蛋白致敏的紅細(xì)胞，在含高蛋白介質(zhì)的試劑中，可發(fā)生凝集。 4)異?；蛐停?ABO亞型的檢查中， A、 B抗原可能為弱抗原，難以檢出。 紅細(xì)胞血型檢測 12 二、受血者和供血者 ABO和 Rh定型 5)近期輸血： 試驗前曾輸入過其它 ABO血型不一致的血液，使血液標(biāo)本成為混合血型的紅細(xì)胞懸液，定型時顯示“混合外觀凝集”現(xiàn)象。 6)嵌合體血型：這種血型者體內(nèi)有兩類血型紅細(xì)胞群體，定型時可以出現(xiàn)“混合外觀凝集”現(xiàn)象。 7)疾病因素導(dǎo)致抗原減弱：某些白血病患者和難治性貧血患者中， ABO血型系統(tǒng)的抗原性可受到抑制，檢出困難。 8)紅細(xì)胞多凝集現(xiàn)象：紅細(xì)胞因遺傳或獲得性的表面異常，發(fā)生多凝集現(xiàn)象。 9)獲得性 B：由于革蘭陰性桿菌的作用，紅細(xì)胞可獲得“類B”的活性。 紅細(xì)胞血型檢測 13 二、受血者和供血者 ABO和 Rh定型 10)血型特異性物質(zhì)過高：一些卵巢囊腫病例，血型物質(zhì)的濃度很高，可中和抗 A和抗 B定型試劑，要得到正確的正定型結(jié)果，必須洗滌紅細(xì)胞多次。 11)近期內(nèi)進(jìn)行大量的血漿置換治療： 由于使用大量的非同型的血漿作置換治療，標(biāo)本血清中含有所輸供體提供的抗A或抗 B抗體，造成反定型錯誤。 12)異常的血漿蛋白：受檢者血漿中異常的白蛋白、球蛋白比例和高濃度的纖維蛋白原等導(dǎo)致緡錢狀形成，造成假凝集現(xiàn)象。 13)不規(guī)則抗體的存在：受檢者血漿中，含有 ABO血型抗體以外的不規(guī)則抗體，與試劑紅細(xì)胞上其他血型抗原系統(tǒng)的抗原起反應(yīng)。 紅細(xì)胞血型檢測 14 二、受血者和供血者 ABO和 Rh定型 ? 14)低丙種球蛋白血癥：低丙種球蛋白血癥 (丙種球蛋白量減低 )病例，可能會因免疫球蛋白水平下降而使血清定型時不凝集或弱凝集反應(yīng)。 ? 15)藥物等因素：藥物、右旋糖醉及靜脈注射某些造影劑可引起紅細(xì)胞凝集