【正文】 對小量含 DNA的任何組織樣品，用分子生物學(xué)分型技術(shù)對紅細胞抗原 den基因型做鑒定，不受血清中自身抗體、不規(guī)則抗體以及疾病和假、弱凝集的影響，對保證安全輸血有著重要意義。 紅細胞血型分子生物學(xué)檢測的的方法有 ： PCRSSP技術(shù)、 PCRSSOP技術(shù)、 PCRRFLP技術(shù)、 PCRRDB技術(shù)、 PCRDNA測序、基因芯片、 PCR指紋圖等。 ☆ 稀釋后的效價管可導(dǎo)致紅細胞凝集，最高稀釋倍數(shù)的倒 數(shù)即為唾液中血型物質(zhì)的效價。 紅細胞血型檢測 67 第八節(jié) 凝集抑制試驗 二、抑制物處理及抗體標(biāo)化 ☆收集液體 唾液標(biāo)本作為抑制物，煮沸使酶失活。 注意事項 該方法可破壞 Kell系統(tǒng)抗原，特別是 K抗原，因此本方法 放散后的細胞不能進行 Kll系統(tǒng)定型試驗。 適用范圍 ABO抗體的放散，如新生兒溶血病的相關(guān)檢測實驗。 167。 注意事項 溫度過高，抗體可能變性；溫度過低，容易使 抗體從紅細胞上解離不完全 167。 ※ 放散的目的： 得到紅細胞上致敏的抗體或沒有抗體吸附的紅細胞，前者得到的是自身抗體，用于自身吸收；后者得到的是紅細胞，用于血型鑒定和交叉配血 。 IgM抗體通常在 4℃ 條件下比 22℃ 或 37℃ 更容易吸收，且容易完全吸收。 ※ 溫自身抗體 ： 溫自身抗體是指在 37℃ 條件下能和自身紅細胞反應(yīng)的抗體。 ，在物理條件改變時，抗體又會從抗原抗體復(fù)合物上分離下來，將抗體由抗原抗體復(fù)合物上分離下來的試驗稱為放散試驗 紅細胞血型檢測 60 第七節(jié) 吸收放射試驗 （一）相關(guān)的概念 抗體可與相應(yīng)的抗原在適當(dāng)條件下可發(fā)生凝集或致敏，這種結(jié)合是可逆的，如改變某些實驗條件，抗體可從紅細胞解離下來，然后檢測解離下來的抗體。 4. 離心力過大時，容易使弱陽性成為陰性格局。 如 Rh其他抗原（ CcEe）定型 三、特征及優(yōu)點 結(jié)果清晰明確 ，可重復(fù)性強。 ，對缺乏唾液酸的細胞 （如： T細胞及 B細胞）無作用。 六、體外補體致敏 七、紅細胞自身凝集 紅細胞血型檢測 50 第五節(jié) 聚凝胺介質(zhì)實驗技術(shù) 聚凝胺實驗技術(shù)是一種快速、簡便檢測紅細胞不完全抗體的方法，可用來檢測 IgG抗體，但 IgG抗體的抗 K抗體除外。 紅細胞血型檢測 48 第四節(jié)抗球蛋白實驗技術(shù) （二）間 接抗球蛋白試驗 1. 紅細胞洗滌過程中不宜中途停止，每次加生理鹽水前要是紅細胞完全懸??；洗滌過程中防止交叉污染；應(yīng)充分洗滌，避免殘留抗體部分中和抗球蛋白試劑而產(chǎn)生假陰性。 3. 被檢標(biāo)本需用 EDTA抗凝，避免出現(xiàn)假陽性；標(biāo)本不宜久置，防止紅細胞上已致敏的抗體游離到血漿中，造成假陰性或陽性程度降低。 紅細胞血型檢測 46 第四節(jié)抗球蛋白實驗技術(shù) 間接抗球蛋白試驗： （ 1）陽性對照管呈現(xiàn)凝集反應(yīng)，陰性對照管不呈現(xiàn)凝集反應(yīng)，被檢管呈現(xiàn)凝集反應(yīng)為陽性結(jié)果，表示被檢者血 清中含有抗體。 ? 在鹽水介質(zhì)中，不完全抗體只能致敏紅細胞，而不能使紅細胞出現(xiàn)可見的凝集反應(yīng)，加入抗球蛋白試劑后，抗球蛋白分子的 Fab片段與紅細胞表面的受體結(jié)合，而產(chǎn)生紅細胞凝集，因此采用此方法可以檢測出血清中是否存在不完全抗體。增強 IgG抗體對紅細胞的凝集。是輸血 前檢驗最常用的試驗方法。 （ 2）自身對照試驗陽性：受血者血清內(nèi)可能有自身抗體或 同時存在不規(guī)則抗體。主要目的是為了防止輸血后產(chǎn)生溶血性反應(yīng)。 IgM抗體在 4℃ ，凝集強度明顯大于室溫， 37℃ 會有減弱 ? 抗體篩查試驗為陰性，并不意味著被檢血清中一定沒有抗體 ?篩查細胞漏檢 ABO亞型抗體（如抗 A?） 紅細胞血型檢測 27 三、不規(guī)則抗體篩選和鑒定 五 不規(guī)則抗體鑒定時遇見的的問題 ，輸血后發(fā)現(xiàn)溶血 （ 1）交叉配血假陰性 （ 2）抗球蛋白試驗不規(guī)則抗體篩查假陰性 ?試劑保存不當(dāng) ?洗滌不充分 ?實驗操作 ④紅細胞濃度過高造成凝集減弱或紅 細胞濃度過低造成凝集不易被觀察到 ，抗體特異性難以鑒定 （ 1）抗體篩查假陽性： ①離心不當(dāng)②試管污染 ③硅膠管引起的凝集 （ 2）譜細胞單一：應(yīng)采用 3個以上不同供應(yīng)商的譜細胞系，排查抗體的特異性。 紅細胞血型檢測 23 三、不規(guī)則抗體篩選和鑒定 抗體鑒定試驗結(jié)果的解釋及處理： ，確定為單一抗體或無法確定為單一抗體，應(yīng)加以鑒別。 紅細胞血型檢測 22 三、不規(guī)則抗體篩選和鑒定 5. 微柱凝膠卡式檢測法 三、不規(guī)則抗體的鑒定 抗體篩選試驗用的試劑篩選紅細胞，通常是 2或 3個人份的O型紅細胞成為一套試劑，每套試劑篩選紅細胞中至少有以下常見的抗原： D、 C、 E、 c、 e、 M、 N，條件不足的實驗室不一定具備 Lua、 V、 Cw、 Kpa、 Jsa 類的抗原。 3. 抗球蛋白試驗：缺點：操作繁瑣、工作量大、耗時等。 同種抗體：不只針對自身抗原，也會同種異型抗原發(fā)生反 應(yīng)。 ? 若 D人群作為獻血者按照 RhD陽性對待，其血液只能給 Rh陽性受血者輸注；作為受血者按照 RhD陰性對待，只能接受 RhD陰性血液。 ? 4)離心后重懸細胞扣時，搖動用力過度，搖散微弱的凝集。 ? 6)鑒定用器材或抗血清被污染，造成假陽性。 ? 2)受檢細胞與抗血清孵育的時間過長，含高蛋白的定型試劑會引起緡錢狀形成。 Rh系統(tǒng)是最為復(fù)雜得多一個系統(tǒng)，涉及臨床的主要有 D、C、 c、 E、 e五個抗原，其中 D抗原的免疫原性最強 ，僅次于 A或 B抗原。 ? 15)藥物等因素：藥物、右旋糖醉及靜脈注射某些造影劑可引起紅細胞凝集或類似凝集。 11)近期內(nèi)進行大量的血漿置換治療： 由于使用大量的非同型的血漿作置換治療，標(biāo)本血清中含有所輸供體提供的抗A或抗 B抗體，造成反定型錯誤。 7)疾病因素導(dǎo)致抗原減弱：某些白血病患者和難治性貧血患者中， ABO血型系統(tǒng)的抗原性可受到抑制，檢出困難。 3)紅細胞致敏 ：受免疫球蛋白致敏的紅細胞，在含高蛋白介質(zhì)的試劑中，可發(fā)生凝集。有些工作者在定型試驗中，常規(guī)地選擇應(yīng)用抗 AB抗血清，以避免錯誤地把弱反應(yīng)性 A或 B型紅細胞分類為 O型。 第三，必需具有檢測 A2， A2B血型的能力。 紅細胞血型檢測 8 二、受血者和供血者 ABO和 Rh定型 紅細胞血型檢測 9 二、受血者和供血者 ABO和 Rh定