第二章基因工程制藥(二)-在線瀏覽
2024-11-19 22:12本頁面
【正文】 內(nèi)蛋白酶加工切斷表達(dá)產(chǎn)物與前導(dǎo)肽之間的肽鍵，產(chǎn)生正確的表達(dá)產(chǎn)物。,17,第二章 基因工程制藥,外源蛋白的糖基化,外源蛋白在酵母細(xì)胞中可發(fā)生N糖苷鍵和O糖苷鍵連接的兩種不同的糖基化。 某些蛋白質(zhì)糖基化后更加穩(wěn)定，便于分離精制。 基因產(chǎn)物糖基化接近天然產(chǎn)物。 分裂不穩(wěn)定：是指工程菌分裂時(shí)出現(xiàn)一定比例不含質(zhì)粒子代菌的現(xiàn)象； 結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定：是指外源基因從質(zhì)粒上丟失或堿基重排、缺失所致工程菌性能的改變。,24,第二章 基因工程制藥,質(zhì)粒不穩(wěn)定產(chǎn)生的原因,對同一工程菌控制不同的比生長數(shù)率可改變質(zhì)粒的拷貝數(shù)： 低拷貝質(zhì)粒工程菌產(chǎn)生不含質(zhì)粒子代菌頻率高如增加工程菌質(zhì)粒拷貝數(shù)可提高穩(wěn)定性； 高拷貝質(zhì)粒工程菌產(chǎn)生不含質(zhì)粒子代菌頻率低但對穩(wěn)定性不利。 在培養(yǎng)基中加入抗菌素抑制質(zhì)粒丟失菌的生長，提高質(zhì)粒穩(wěn)定性。,28,第二章 基因工程制藥,提高質(zhì)粒穩(wěn)定性的方法,有些含質(zhì)粒菌對發(fā)酵環(huán)境的改變比不含質(zhì)粒菌反應(yīng)慢，間歇改變培養(yǎng)條件以改變兩種菌比生長速率，可改善質(zhì)粒穩(wěn)定性。,29,第二章 基因工程制藥,六、基因工程菌生長代謝的特點(diǎn),菌體的生長通常用比生長速率來表示。 控制菌體的生長對提高質(zhì)粒的穩(wěn)定性、減少代謝副產(chǎn)物積累、提高外源蛋白產(chǎn)率有重要意義。 培養(yǎng)條件的改變，都會(huì)改變菌體的能量代謝和小分子前體的供應(yīng)，影響生物大分子的和成和菌體的生長。 碳源物質(zhì)為細(xì)胞提供能量，當(dāng)菌體生長所需能量大于菌體有氧代謝提供的能量時(shí)，菌體會(huì)產(chǎn)生乙酸，導(dǎo)致培養(yǎng)基的pH值下降，從而影響菌體的生長。,32,第二章 基因工程制藥,菌體的生長與能量的關(guān)系,分批培養(yǎng)中選擇不同的碳源，連續(xù)培養(yǎng)中控制稀釋速率等都能一定范圍內(nèi)控制菌體的生長，從而控制乙酸的產(chǎn)生，減少它的抑制作用。,33,第二章 基因工程制藥,菌體的生長與能量的關(guān)系,大腸桿菌中克隆攜帶氧能力的VHB蛋白的基因可提高菌體生長速率。,34,第二章 基因工程制藥,菌體生長與前體供應(yīng)的關(guān)系,在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入氨基酸能使菌體比生長速率提高，使蛋白質(zhì)合成增加。 中等拷貝質(zhì)粒（56拷貝）的工程菌中與前體合成有關(guān)的酶增加，這些酶的基因大多受終產(chǎn)物的反饋調(diào)節(jié)。,36,第二章 基因工程制藥,七、基因工程菌發(fā)酵,基因工程菌的培養(yǎng)過程包括: 通過搖瓶操作基因工程菌生長的基礎(chǔ)條件,如溫度、pH、培養(yǎng)基各種組分、碳氧比，分析表達(dá)產(chǎn)物的合成、積累對受體細(xì)胞的影響。,37,第二章 基因工程制藥,微生物工業(yè)發(fā)酵過程圖解,菌種,原種,一級(jí)種子搖 瓶擴(kuò)大培養(yǎng),發(fā)酵培 養(yǎng)基配制,二級(jí)種子罐 培養(yǎng),滅菌,發(fā)酵 生產(chǎn),代謝產(chǎn)物 分離,38,第二章 基因工程制藥,基因工程菌的培養(yǎng)方式,補(bǔ)料分批培養(yǎng) 連續(xù)培養(yǎng) 透析培養(yǎng) 固定化培養(yǎng),39,第二章 基因工程制藥,補(bǔ)料分批培養(yǎng),將種子接入反應(yīng)器中后，培養(yǎng)一段時(shí)間，然后間歇或連續(xù)補(bǔ)加新鮮培養(yǎng)基，使菌體進(jìn)一步生長。,40,第二章 基因工程制藥,連續(xù)培養(yǎng),將種子接入反應(yīng)器后，培養(yǎng)一段時(shí)間，到一定菌濃，開動(dòng)蠕動(dòng)泵，同時(shí)進(jìn)料和出料，控制一定稀釋速率。 關(guān)鍵的控制參數(shù)是誘導(dǎo)水平、稀釋率、細(xì)胞比生長速率 。 通過去除培養(yǎng)液中的代謝產(chǎn)物來解除其對生產(chǎn)菌的不利影響,42,第二章 基因工程制藥,固定化培養(yǎng),基因工程菌固定化后，質(zhì)粒的穩(wěn)定性大大提高。,43,第二章 基因工程制藥,基因工程菌的發(fā)酵工藝,基因工程菌的發(fā)酵與傳統(tǒng)的微生物發(fā)酵不同,基因工程菌帶外源基因,發(fā)酵的目的是使外源基因高效表達(dá)。 工藝要求：外源基因既高效表達(dá)，又有利于產(chǎn)品分離純化,44,第二
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