感染性疾病病原體快速診斷-在線瀏覽
2025-02-05 12:19本頁面
【正文】 ，該點在反應曲線上的位置為濁度開始快速變化的時期，該取值能夠快速、穩(wěn)定的獲得反應時間，從而判斷內毒素的含量 動態(tài)濁度法 28 Wenen LIU 儀器和試劑 ? BET24A細菌內毒素分析儀 ? MB80微生物快速動態(tài)監(jiān)測系統 29 Wenen LIU 標本要求 患者早上尚未進行藥物靜脈治療時 : ? MB80： “ 無熱源真空采血管 ”, 靜脈抗凝血 ，采血量 24ml ， 30min內送檢 ? BET24A：抽取 1mL靜脈抗凝血，配 1mL1號處理液 ? 其它體液如腦脊液 ﹑ 胸腹水與血標本要求相同。其中前者主要包括 MOX、 CMY、 DHA、 ACC、 ACT、 FOX等亞型，后者主要包括： ADC。 33 Wenen LIU 16S rRNA具有多拷貝多信息的特點 34 Wenen LIU 結核分枝桿菌的快速診斷 ? 是引起結核病的病原菌。 ? 結核病至今仍為重要的傳染病。 ? 結核分枝桿菌 生長緩慢 ，一般需 24周長成肉眼可見的落菌。 35 Wenen LIU 結核感染現狀 全球范圍內結核病疫情急劇惡化 ? 結核病與艾滋病同時流行 ? 結核菌耐藥現象益發(fā)嚴重 ? 人口大規(guī)模流動 我國是世界上僅低于印度的第二結核病大國 ? 結核菌感染率 % ? 新發(fā)活動性結核患者 130萬 /年 ? 死亡 13萬 /年 早期快速診斷與治療成為制約結核病控制的關鍵 ? 常規(guī)實驗室診斷結核病方法陽性率不到60% 36 Wenen LIU 全球結核疫情 37 Wenen LIU 結核檢測方法 一、現有實驗室常規(guī)檢測技術 細菌學診斷 ─ 涂片、培養(yǎng) 免疫學診斷 ─ 抗原、抗體膠體金 分子生物學診斷 ─ PCR 二、其它檢測技術 PPD（ TST）實驗 影像學檢查 38 Wenen LIU 結核夾層杯技術 結核感染 T細胞檢測技術 分子生物學技術 結核分枝桿菌的快速診斷 39 Wenen LIU 結核夾層杯技術 ? 原理 ：通過專用消化滅活液消化組織細胞和粘蛋白等，將結核桿菌裸露出來，并結合高速震蕩，使痰標本充分液化而有利于其中的抗酸桿菌沉淀于特制彭氏杯底部的菌膜上，在夾層杯中直接抗酸染色、干燥，并用取片針頂出內底，經封片等步驟后，鏡下檢測抗酸桿菌。 臨床應用：用于結核分枝桿菌的初篩 44 Wenen LIU 結核感染 T細胞檢測技術 ? 是以 ELISPOT技術 檢測結核感染的新方法 ， ELISPOT是近 20 年發(fā)展起來的檢測抗原特異性 T細胞的技術，是目前最敏感的檢測抗原特異性 T細胞的方法之一。 ? 結核桿菌感染者外周血單核細胞中存在結核特異的活化 T淋巴細胞，這些淋巴細胞在體外再次受到結核桿菌特異抗原刺激后分泌 γ 干擾素， 通過 檢測 體外分泌的 IFNγ 來診斷是否存在結核感染 。因此，檢測效應 T淋巴細胞可用于結核病或結核潛伏感染者的診斷。 ? 基于 IGRA原理的檢測項目目前已被美國、加拿大、英國、德國、意大利、瑞士、法國、荷蘭、日本等二十余個國家寫入本國的結核診療指南中 γ 干擾素釋放實驗（ IGRA） 51 Wenen LIU 酶聯免疫斑點技術（ ELISPOT） 52 Wenen LIU 酶聯免疫斑點技術（ ELISPOT） ? 近二十多年來，隨著技術改良， ELISPOT 分析技術已經是當世公認的 最靈敏 的抗原特定T細胞的體外檢測技術 ? 結合了細胞培養(yǎng)技術與酶聯免疫吸附技術（即 ELISA 技術），能夠在單細胞水平檢測細胞因子的分泌情況， 靈敏度高 。 53 Wenen LIU 結核桿菌特異抗原 ESAT6與 CFP10抗原 由結核桿菌基因組 RD1區(qū)相同的操縱子編碼的蛋白 所有的卡介苗（ BCG）均丟失該基因序列 絕大多數的環(huán)境分枝桿菌也不存在 RD1區(qū) 54 Wenen LIU 操作步驟 ① ② 55 Wenen LIU 操作步驟 ⑤ ⑥ ④ 孵育 1小時 56 Wenen LIU 實 際 效 果 圖 陰性結果 陽性結果 空白對照 抗原 A ESAT6 抗原 B CFP10 陽性對照 （ PHA） 57 Wenen LIU 特點 ? 特異性好，不受卡介苗（ BCG）接種和環(huán)境分枝桿菌影響 ? 靈敏度高，在免疫力低下 /受抑制人群中有很高的檢出率 ? 快速， 24小時報告結果 58 Wenen LIU 寫入診療指南的國家（ Guidelines） ? 美國（ CDC和兒科學會）；加拿大 （加拿大結核病委員會）；巴西（衛(wèi)生部） ? 英國（國家衛(wèi)生和臨床協會）；法國（國家衛(wèi)生局）；西班牙（西班牙肺病和胸部手術協會）；德國（德國抗結核病中央委員會）； 意大利；瑞士（瑞士肺科協會）；荷蘭（實用結核病控制委員會）；丹麥（丹麥肺部醫(yī)學會）；挪威（挪威公共衛(wèi)生協會）；芬蘭（國家衛(wèi)生和福利協會）；愛爾蘭（國家結核病咨詢委員會）；葡萄牙；捷克共和國； 斯洛伐克；波蘭；保加利亞；克羅地亞 ? 澳大利亞（國家結核病咨詢委員會、傳染病協會和澳大利亞風濕病協會）；沙特阿拉伯；南朝鮮；日本（日本結核病預防協會） ? WHO和 ECDC ? 中國（專家組推薦） 59 Wenen LIU 結核病輔助診斷 /療效評價 ? “菌陰”結核病患者的輔助診斷 ? 肺外結核的鑒別診斷 ? 抗癆治療的療效評價 免疫力低下 /受抑制患者的結核診斷 /感染篩查 ? 使用生物制劑 /免疫抑制劑患者的結核感染篩查 ? HIV感染者 /腎透析患者 /器官移植患者 兒童結核病的輔助診斷 結核密切接觸者 /高危人群的結核感染篩查 ? 結核病患者的家屬 /醫(yī)務工作者 /監(jiān)獄囚犯 接觸追蹤 臨床應用 60 Wenen LIU 結核相關疾病 ? 肺結核 – 菌陽（痰涂片、痰培養(yǎng)） 結核?？漆t(yī)院 – 菌陰 感染科、呼吸科、胸外科、結核科 ? 肺外結核 –
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