獸藥殘留量的檢驗要點-在線瀏覽
2025-02-02 02:44本頁面
【正文】 LISA法檢測 酶聯(lián)免疫吸附試驗（ ELISA） 對蝦中氯霉素含量的競爭性 ELISA法檢測 ? 免疫檢測技術 是以抗原抗體的特異性 、 可逆性結合反應為基礎 ， 結合一些生化或物理方法作為信號顯示或放大系統(tǒng)而建立的測定方法 。 酶聯(lián)免疫吸附試驗（ ELISA） ? 基本原理： ① 使 抗原或抗體 結合到某種 固相載體 表面 ， 并保持其 免疫活性 ； ② 使抗原或抗體與某種酶連接成酶標抗原或抗體 ， 這種 酶標抗原或抗體 既保留其 免疫活性 ， 又保留 酶活性 ； ③ 結合物與相應的抗原或抗體反應后 ， 結合的酶仍能催化底物生產 有色物質 生成 ， 而顏色的深淺可定量抗體或抗原的含量 。 洗滌多余的酶標抗原 ， 加酶反應的底物顯色后根據(jù)顏色的深淺進行定量 。 反之 ， 樣品中氯霉素含量越少 ， 則顯色越深 。 競爭性 ELISA檢測對蝦中氯霉素含量的實驗設計 對蝦中氯霉素含量的競爭性 ELISA法檢測 1） 實驗目的： 進一步學習酶聯(lián)免疫試驗法的基本原理和實驗方法 ， 確實掌握酶聯(lián)免疫吸附試驗法測定蝦肉中氯霉素含量的基本原理 、 實驗方法和結果的分析 。 競爭性 ELISA檢測對蝦中氯霉素含量的實驗設計 3） 主要試劑： 氯霉素酶聯(lián)免疫檢測試劑盒 。 競爭性 ELISA檢測對蝦中氯霉素含量的實驗設計 對蝦中氯霉素含量的競爭性 ELISA法檢測 圖 42 酶標儀 實驗步驟 （ 1） 實驗準備 ① 從冰箱取出試劑盒 ， 將氯霉素標準溶液 、 濃縮萃取稀釋液 、 濃縮洗滌液 、 酶標記物 、 底物溶液及微量測試孔條置于室溫下回溫 30 min。 對蝦中氯霉素含量的競爭性 ELISA法檢測 （ 2） 樣品制備 ① 將 3g蝦肉剪碎后放入 50mL帶塞離心管中 ， 加入 6mL乙酸乙酯 ， 用均質機均質約 1min， 再震蕩約 30s。 ③ 于上述玻璃管中加入正己烷 2mL， 先將殘余物完全溶解后 ，再加入 1mL原倍萃取稀釋液 ， 震蕩約 30s。 ⑤ 若乳化現(xiàn)象較嚴重 ， 則先將大部分上層液取出后 ， 再將玻璃管置入 80℃ 水中 ， 隔水加熱約 5～ 10min。 ② 在另外的微孔中加入 100μL已完成前處理的樣品溶液 。 ④ 輕敲盤子四周 ， 使其充分混合后室溫下避光靜置溫育 1h。 ⑥ 最后一次甩掉洗液后 ， 在吸水紙上拍干 。 ⑧ 于室溫下避光靜置溫育 20min。 對蝦中氯霉素含量的競爭性 ELISA法檢測 結果處理 ① 所測得的標準吸光值和樣品吸光值 （ B） 除以第一個標準 （ 零標準 ） 的吸光值 （ B0） 再乘以 100。 ③ 根據(jù)每個樣品的 B/B0的百分數(shù)值就可從曲線上讀出相對應樣品的濃度 （ ppb） 。 對蝦中氯霉素含量的競爭性 ELISA法檢測 注意事項 ? 使用前先將取出置于室溫下 ， 回溫 30min。 ? 濃縮萃取稀釋液和濃縮洗滌液使用前必須稀釋 。 ? 加樣時必須小心勿濺出微孔外 ， 以免造成其他微孔的污染 ，加樣品或試劑時槍頭請勿接觸微孔 ， 不可產生氣泡 。 ? 溫育時 ， 要蓋上塑料片或標簽紙 ， 置于暗處 ， 溫
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