【正文】 ，使其強(qiáng)制受藥。浸洗法用藥量少，時(shí)間可人為控制，一般不污染水體，不影響水體中的其他生物。三、全池潑灑 此法是疾病防治中最常用的一種方法。使用此法，首先應(yīng)準(zhǔn)確地測(cè)量池塘水體，計(jì)算藥量，然后稱取藥物用水溶解后均勻地潑到全池中去。但用藥量大，對(duì)大型水體或價(jià)格昂貴的藥物不適用，并且水體中的有益生物常被殺死，對(duì)水環(huán)境也有一定污染。此法多用于體內(nèi)病原生物感染和病情較輕尚未失去攝食餌料能力的對(duì)蝦或同池中尚未感染的個(gè)體預(yù)防。但口服藥餌法只對(duì)那些還有食欲的個(gè)體有作用，對(duì)病重者或失去食欲的個(gè)體無(wú)效。此法適用于預(yù)防和早期治療。二）發(fā)病現(xiàn)場(chǎng)情況調(diào)查1 調(diào)查發(fā)病養(yǎng)殖水體環(huán)境和發(fā)病史2 了解池塘水質(zhì)狀況需要調(diào)查水溫、酸堿度、溶解氧、氨氮、亞硝酸鹽、磷酸鹽、硬度、化學(xué)耗氧量和有機(jī)耗氧量等。4 及時(shí)發(fā)現(xiàn)對(duì)蝦疾病從對(duì)蝦的攝食、活動(dòng)和體色等及時(shí)發(fā)現(xiàn)對(duì)蝦病害。一）現(xiàn)場(chǎng)快速診斷方法（Rapid detection）對(duì)蝦病毒病具有暴發(fā)性，所以，在生產(chǎn)上需要用簡(jiǎn)單快速的方法來(lái)診斷對(duì)蝦是否帶有病毒。在現(xiàn)場(chǎng)利用這種外觀癥狀作排外診斷（Diagnosis by excusion）和鑒別診斷（Differential diagnosis），可以簡(jiǎn)便和快速地判斷出池蝦群體中有無(wú)病蝦，同時(shí)根據(jù)統(tǒng)計(jì)發(fā)病蝦的概率也可以了解群體的發(fā)病進(jìn)程。例如，患有HPV病的對(duì)蝦，只有在晚期可以出現(xiàn)空胃。根據(jù)病蝦胃的特殊病癥，很容易同健康蝦空胃區(qū)別。這項(xiàng)診斷技術(shù)的局限是僅適用于中國(guó)對(duì)蝦感染“流行病”病原，并已發(fā)?。闯霈F(xiàn)病癥）后的那些個(gè)體，且必需活體觀察，但它的優(yōu)點(diǎn)也是顯而易見(jiàn)，不需復(fù)雜的儀器設(shè)備，也不需要高深的專業(yè)知識(shí)，極易普及應(yīng)用。C染色30min,這個(gè)條件在野外難以保證。這種方法是單一染色，制片的對(duì)比度差，分辨率低。%%伊紅的混合染色液涂染肝胰腺細(xì)小病毒樣病毒感染的對(duì)蝦肝胰腺，觀察到核內(nèi)的病毒包含體。Lightner(1983)和Redman曾經(jīng)報(bào)道檢查草蝦是否感染桿狀病毒的簡(jiǎn)易方法，即直接用肝胰腺涂片，%的孔雀綠染色，若見(jiàn)明亮藍(lán)綠色的圓球形包含體即為陽(yáng)性。Vickers 等(1993)報(bào)道了利用壓片涂抹對(duì)蝦的肝胰腺，分別用H－E染色和Y啶橙染色。經(jīng)Y啶橙染色的細(xì)胞利用熒光顯微鏡，可見(jiàn)黃綠色的桿狀病毒核內(nèi)包含體。熒光顯微鏡也許是在光鏡水平對(duì)特異蛋白質(zhì)等生物大分子定性定位的最有力的工具。這樣沒(méi)有樣品存在時(shí)視野是黑色的，而折射率很大的小顆粒觀察得很清晰。使用熒光顯微鏡和暗場(chǎng)顯微鏡這兩種方法，雖然觀察效果較好，但是對(duì)于一般蝦農(nóng)來(lái)說(shuō)是不切實(shí)際的。不僅如此，在科學(xué)技術(shù)非常先進(jìn)的今天，仍然離不開(kāi)光學(xué)顯微鏡。何建國(guó)等（1992）用常規(guī)的組織切片方法，經(jīng)HE染色在高倍鏡下鏡檢斑節(jié)對(duì)蝦WBV包含體，其仔蝦感染率為100%，%～100%。孫修勤和楠田理一（1996）用HE和Feulgen染色，在中國(guó)對(duì)蝦的肝胰腺細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)了HPV包含體，其大小為22～24nm。Bonami用Eosin染色，在范氏對(duì)蝦的淋巴器官中發(fā)現(xiàn)Lymphoid organ virus（LOVV）病毒形成的細(xì)胞質(zhì)包含體。sAFA固定，按常規(guī)方法進(jìn)行光鏡制片，用Ehrlichi39。1%伊紅酒精（95%）溶液復(fù)染。Brown和Brann39。Giemsa染色應(yīng)用于對(duì)蝦幼體中的HPV診斷可提高檢測(cè)的靈敏度（羅文新，1997）。Couch（1974）首次用電子顯微鏡在桃紅對(duì)蝦（Penaeusduorarum）體內(nèi)，觀察到一種對(duì)蝦桿狀病毒（Baculoviruspenaeid，Couch Bp），其大小為74nm270nm。繼續(xù)在戊二醇固定液中固定。經(jīng)丙銅酸系列脫水。s812液滲透包埋，Epon39。超薄切片在AO超薄機(jī)上進(jìn)行，切片厚度為50～100nm，切片經(jīng)醋酸鈾和檸檬酸鉛雙層染色之后在Philips CM10透射電鏡觀察。Lightner和Redman（1993）在原糙對(duì)蝦（protrachypene precipuca）中發(fā)現(xiàn)一種虹彩病毒（Shrimp iridovirus，IRDO），為6角形，具單位膜構(gòu)成的囊膜。病毒粒子直徑為122177。nm。何建國(guó)等（1995）在患白斑病的斑節(jié)對(duì)蝦鰓上皮細(xì)胞質(zhì)中，發(fā)現(xiàn)直徑約25nm的類微核糖核酸病毒（Picornaviruslike）。陳細(xì)法等（1997）應(yīng)用超薄切片和負(fù)染等技術(shù)，在日本對(duì)蝦、長(zhǎng)毛對(duì)蝦（Penaeus penicillatus）和中國(guó)對(duì)蝦的腸、肝胰腺、淋巴樣器官、鰓和肌肉組織中，發(fā)現(xiàn)一種新桿狀病毒，稱之為淋巴樣細(xì)胞核型桿狀病毒（Lymphoid cell muclear baculovirus，LNBV）。中央是高電子密度的核心，外囊衣殼和囊膜，兩膜之間有寬闊的間隙。純化的病毒核殼衣表面有螺旋排列亞單位，也是該病毒特有的。其大小為80nm左右。薛清剛等（1996）對(duì)該病毒進(jìn)行了系統(tǒng)的研究?，F(xiàn)稱其為中國(guó)對(duì)蝦肝胰腺細(xì)小病毒（Hepatopaneratic Parvovirus of Penaeus chinensis,HPVPC）。有核衣的完整病毒粒子呈橢圓形，有突出的多絨毛狀附屬物，大小為276nm121nm。所以，電鏡技術(shù)主要用于檢測(cè)病毒的有無(wú)及病毒類型的初步鑒定。四）免疫檢測(cè)技術(shù)（Immunoassay）免疫生物技術(shù)是利用特異性抗原抗體反應(yīng)來(lái)研究組織細(xì)胞特定抗原的定位和定量技術(shù)。為了顯示和觀察這種抗原抗體反應(yīng)，需要預(yù)先將某種標(biāo)記物結(jié)合到抗體上。酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（Enzymelinked immunosbent assay,ELISA）利用酶與底物反應(yīng)來(lái)檢測(cè)抗原或抗體的方法。該方法可以檢測(cè)至少10納克的病毒蛋白。這種方法快速簡(jiǎn)單，靈敏度高，且可定量。免疫熒光法（Immunofluorescence assay）是預(yù)先將熒光素標(biāo)記在抗體上，再與涂片、切片上或細(xì)胞懸液中的抗原進(jìn)行反應(yīng)。陳秀男等（1988）用該方法來(lái)檢測(cè)草蝦肝胰腺和排泄物所存在的包含體。免疫熒光法需要特殊設(shè)備，不易作定量分析，而且對(duì)結(jié)果判定有一定的主觀性。且具有特易性強(qiáng)、簡(jiǎn)單、及易觀察等特點(diǎn)，可做定性定量分析，適合于對(duì)蝦病毒的早期診斷（羅文新，1997）。通過(guò)抗體與抗原之間的特異性結(jié)合反應(yīng)介導(dǎo)血細(xì)胞的凝結(jié)，從而達(dá)到檢測(cè)相應(yīng)抗原目的的一種簡(jiǎn)便免疫學(xué)診斷技術(shù)。實(shí)驗(yàn)表明，該方法簡(jiǎn)便，重復(fù)性好， h內(nèi)完成，適合在現(xiàn)場(chǎng)推廣使用。然而甲殼動(dòng)物的組織培養(yǎng)研究工作國(guó)內(nèi)外尚處于初期的實(shí)驗(yàn)性階段。Daig介紹了小龍蝦的上皮細(xì)胞培養(yǎng)。近10多年來(lái)，對(duì)蝦的組織研究工作進(jìn)展較快，取得了一定的成果（王立平等，1995；張曉華等，1995；Luedeman et ；Hsu et al.，1995）。Hsu 等（1995）對(duì)斑節(jié)對(duì)蝦Oka器官（淋巴組織）組織細(xì)胞的各種培養(yǎng)條件進(jìn)行了全面地研究，并建立了世界上第一個(gè)對(duì)蝦細(xì)胞株。發(fā)展對(duì)蝦組織培養(yǎng)技術(shù)，不僅對(duì)深入研究對(duì)蝦病毒提供了方便，而且也為對(duì)蝦免疫學(xué)、遺傳學(xué)、細(xì)胞工程學(xué)等方面研究提供了有利條件。利用對(duì)蝦組織培養(yǎng)還可以制備病毒疫苗及為核酸探針檢測(cè)病毒提供條件。這是首次報(bào)道的測(cè)定蝦病毒濃度的檢測(cè)手段。由于分子生物技術(shù)的不斷發(fā)展和完善，分子生物學(xué)更加迅速?gòu)V泛地滲透到生命科學(xué)的各個(gè)學(xué)科。七）聚合酶鏈反應(yīng)（Polymerase chain reaction，PCR）PCR是1983年由美國(guó)Mullis首先發(fā)現(xiàn)的。Erlich等（1988）和Ost（1988）就把PCR作為診斷病原體最有效的技術(shù)。Chang 等（1993）利用PCR 技術(shù)對(duì)斑節(jié)對(duì)蝦桿狀病毒（MBV）純化和擴(kuò)增。何建國(guó)等（1996）用PCR技術(shù)檢測(cè)斑節(jié)對(duì)蝦的白斑綜合桿狀病毒（WSSV），并結(jié)合電鏡觀察證實(shí)紅體病斑節(jié)對(duì)蝦（不帶白斑者）不是WSSV所致。套式PCR在蟹（Helice tridens）、昆蟲(chóng)（Ephydridae）和橈足類（Schmackeria dubia）檢測(cè)到有WSSV。Wang等（1996）用PCR方法檢測(cè)對(duì)蝦中BP病毒，并獲得了預(yù)計(jì)的擴(kuò)增產(chǎn)物。八）原位雜交（In situ hybridization）原位雜交是利用放射性或非放射性標(biāo)記的已知序列DNA和RNA探針，在細(xì)胞或染色體上與其互補(bǔ)的核酸序列配對(duì)雜交，再經(jīng)放射自顯影或免疫熒光、化學(xué)發(fā)光，在雜交原位上顯示雜交體的技術(shù)。Poulos等（1994）用非放射性標(biāo)記的DNA探針來(lái)檢測(cè)斑節(jié)對(duì)蝦的桿狀病毒（MBV）。探針在細(xì)胞核中產(chǎn)生強(qiáng)烈標(biāo)記。Mari等（1993）抽提Infectious hypodermal and hematopoietic necrosis virus（IHHNV）的核酸而得到少量dsDNA，克隆到Puc18，經(jīng)過(guò)限制性內(nèi)切酶分析。在原位雜交中，探針使靶細(xì)胞形成顯著性標(biāo)記，特別是核內(nèi)Cowdry A型包含體。用P32CTP標(biāo)記制成探針，從而檢測(cè)病蝦的BMNV。Wongteerasupay等（1996）在患有白斑病的六種對(duì)蝦原位雜交中，Penaeus mondon baculovirus PmNOBII的DNA片段呈陽(yáng)性雜交。根據(jù)放射性映象的強(qiáng)度確定每一斑點(diǎn)的探針濃度，并同一系列對(duì)照作比較以確定核酸的濃度。Lo等（1996）用巢式PCR檢測(cè)蝦、蟹和其他節(jié)肢動(dòng)物是否含WSSV時(shí)，在onestep PCR后，再用點(diǎn)雜交方法驗(yàn)證PCR產(chǎn)物。許多分子生物學(xué)技術(shù)都可以用來(lái)檢測(cè)對(duì)蝦的病毒，例如PTPCR等方法。隨著分子生物學(xué)技術(shù)不斷的發(fā)展和完善，把它作為一種檢測(cè)對(duì)蝦病毒手段將會(huì)得到越來(lái)越普遍的使用。一、對(duì)蝦桿狀病毒對(duì)蝦桿狀病毒（簡(jiǎn)稱BP）是在甲殼動(dòng)物中發(fā)現(xiàn)最早的一種病毒。對(duì)蝦桿狀病毒感染肝胰腺和中腸上皮細(xì)胞核。到PL5期死亡率迅速下降，此時(shí)一般為亞急性或慢性發(fā)病，患病蝦攝食量減少，生長(zhǎng)慢及體表和鰓的附著物增多。 二、斑節(jié)對(duì)蝦桿狀病毒斑節(jié)對(duì)蝦桿狀病毒（簡(jiǎn)稱MBV），最具代表性的有效種宿主是斑節(jié)對(duì)蝦。MBV最先出現(xiàn)在蚤狀幼體Ⅱ期和糠蝦幼體期，主要致死階段在仔蝦期，致死率可達(dá)90%以上，成蝦可能帶毒，甚至感染程度嚴(yán)重，但只要養(yǎng)殖環(huán)境好，則對(duì)MBV感染耐受力強(qiáng)。另外，MBV感染還是造成斑節(jié)對(duì)蝦“公孫蝦”現(xiàn)象的原因之一。BMNV主要感染肝胰腺和中腸上皮細(xì)胞核。染病蝦苗通過(guò)腹部可見(jiàn)肝胰腺和中腸腺變白混濁，同時(shí)可能有革蘭氏陰性菌并發(fā)感染，其對(duì)成蝦的危害相對(duì)較小。HPV主要感染肝胰腺和前中腸腺的上皮細(xì)胞核。HPV很少單獨(dú)引起蝦的高死亡率。以上4種腸感染病毒有相似之處，在于它們對(duì)對(duì)蝦早期生活階段致死率高，而對(duì)成蝦的影響相對(duì)較小。成蝦對(duì)其有耐受性，但如養(yǎng)殖條件惡化也會(huì)致死。而在南美白對(duì)蝦中常表現(xiàn)為典型的慢性病，所以又稱畸形發(fā)育不良綜合癥（RDS），病蝦額劍變形彎曲，觸角鞭節(jié)起皺，表皮粗糙，生長(zhǎng)慢，處于慢性消耗狀態(tài)，導(dǎo)致個(gè)體小畸形。瀕死蝦通體蒼白，頭胸部黃色腫大，鰓由白到淡黃到棕色，肝胰腺變?yōu)榈S色，所以有“黃頭病”之稱。YHV可感染斑節(jié)對(duì)蝦。十一、桃拉綜合癥病毒（簡(jiǎn)稱TSV）南美白對(duì)蝦從仔蝦第1～14期到將入池時(shí)易發(fā)生TSV，因此，～5 g之間，更大的蝦也可能感染。在急性發(fā)病期，瀕死蝦全身淡棕紅，尾扇和后足明顯發(fā)紅(因此又稱“紅尾病”)，一般在蛻皮時(shí)死亡，暗示蛻皮對(duì)其發(fā)病機(jī)現(xiàn)的重要性，典型殼軟，空腸，幾乎全體表、所有附器、鰓、胃、后腸、食管的表皮上皮多病灶壞死。養(yǎng)殖蝦累積死亡率80%～95%，而其幸存者存活率有的可達(dá)60%或更高。WSSV引起系統(tǒng)感染，主要感染真皮、前后腸上皮、造血組織、結(jié)締組織、鰓、觸角腺、血細(xì)胞、神經(jīng)和橫紋肌等。在許多病例中，WSSV瀕死蝦顯示出通體淡紅色到棕紅色(因此又名“紅體病”)，可能由于表皮色素細(xì)胞擴(kuò)散所致，有些也有少量白斑。WSSV的控制是一個(gè)系統(tǒng)而復(fù)雜的工程，涉及的方面很多?？傮w上來(lái)說(shuō)WSSV的控制采取以“預(yù)防為主，治療為輔”的方針。目前已有眾多分子生物學(xué)方法，如PCR、核酸探針和免疫學(xué)方法，如單克隆抗體和多克隆抗體技術(shù)檢測(cè)WSSV，這些方法敏感性高、特異性強(qiáng)，因而在親蝦選育中可采用這些方法選育沒(méi)有攜帶WSSV的蝦作為親蝦，從而切斷WSSV的垂直傳播途徑，但在實(shí)際操作過(guò)程中，因不同種類蝦而有所不同。主要原因是斑節(jié)對(duì)蝦在我國(guó)尚沒(méi)有用于生產(chǎn)的大規(guī)模的全人工繁殖技術(shù)，因而無(wú)法建立無(wú)WSSV品系，因而急需加強(qiáng)開(kāi)展斑節(jié)對(duì)蝦全人工繁殖的攻關(guān)研究。2 切斷WSSV垂直傳播的傳染途徑育苗期仔蝦的WSSV檢測(cè)是目前切斷WSSV進(jìn)入對(duì)蝦養(yǎng)殖期的主要手段。雖然上述WSSV的檢測(cè)方法在國(guó)內(nèi)都有應(yīng)用，但普及率比較低，同時(shí)，由于檢測(cè)育苗期仔蝦數(shù)量的局限性，無(wú)法完全準(zhǔn)確地判斷一批數(shù)量較大的蝦苗是否完全攜帶WSSV的仔蝦，因而在一些國(guó)家也是常用的對(duì)蝦苗檢測(cè)和選購(gòu)參考的手段。在WSSV暴發(fā)流行初始階段，主要是受WSSV保存宿主的影響，已知的保存宿主為養(yǎng)殖的對(duì)蝦野生的東方白蝦、長(zhǎng)臂蝦、日本櫻蝦等和大量的蟹類。何建國(guó)等（1999a）在上萬(wàn)畝蝦場(chǎng)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，上述消除水平傳播傳染源的措施起到較好的養(yǎng)殖效果。經(jīng)對(duì)蝦養(yǎng)殖實(shí)踐，效果還是比較理想。因而水質(zhì)的監(jiān)控在養(yǎng)殖過(guò)程中至關(guān)重要。溫度是病毒暴發(fā)流行的前提條件之一。對(duì)斑節(jié)對(duì)蝦個(gè)體MBV病毒感染度與水體理化因子的關(guān)系研究揭示： Y=＋＋＋式中，Y為病毒感染度；X1為鹽度；X2為氨氮（181。L1）；X3為硝酸氨（181。L1）。為防病應(yīng)提倡低鹽度養(yǎng)殖對(duì)蝦。本式是一個(gè)簡(jiǎn)化公式，去除了pH與氨氮協(xié)同作用，促進(jìn)氨氮毒性增強(qiáng)，故陰天、雨后、臺(tái)風(fēng)過(guò)后，水體pH的調(diào)節(jié)至關(guān)重要，一般1 。5 采用低鹽度和增氧方法養(yǎng)殖。6 采用淡水添加式的養(yǎng)殖模式所謂淡水添加式的養(yǎng)殖模式，實(shí)際上是在對(duì)蝦養(yǎng)殖初始進(jìn)海水，養(yǎng)殖過(guò)程中利用淡水添加，直至養(yǎng)成上市。7 采用深池養(yǎng)殖對(duì)蝦深池（水深）受氣候等因子影響小，在遇到臺(tái)風(fēng)、雨水、陰天、寒潮等不利于對(duì)蝦養(yǎng)殖的環(huán)境下，水質(zhì)調(diào)控能力強(qiáng)，再配有充氧等措施，水質(zhì)環(huán)境相對(duì)穩(wěn)定。國(guó)內(nèi)外也有大量的報(bào)道，蝦池一次換水量過(guò)大，加速患病蝦的死亡。根據(jù)生產(chǎn)上的經(jīng)驗(yàn)，建議蝦池?fù)Q水采用少量多次的方式進(jìn)行，一次換水量最好不要超過(guò)10%。因此，養(yǎng)殖對(duì)蝦在暴發(fā)WSS后，實(shí)行毒池，殺死所有攜帶WSSV的生物，再過(guò)7 d后排水，所排之水和生物不再攜帶有活性WSSV，因而也就不具有傳播的作用。11 采用過(guò)濾的相對(duì)獨(dú)立的對(duì)蝦養(yǎng)殖模式海水經(jīng)過(guò)過(guò)濾(有多種方式)和消毒后，一方面可以過(guò)濾掉大部分生物，包含了WSSV的宿主生物；另一方