生物制藥的基本技術(shù)ppt46頁-在線瀏覽
2025-07-11 10:44本頁面
【正文】 : 與溶解度和穩(wěn)定性有很大關(guān)系，一般選擇在 pI 的兩側(cè)。如胃蛋白酶、酵母醇脫氫酶及多肽激素類，選擇 3750 ℃ 提取，效果較好。 擴(kuò)散作用的影響：擴(kuò)散方程式 G=DF*Δ C/Δ X*t 分配作用的影響：分配定律 (C1/C2)恒溫、恒壓 =K 四、分離純化 Separation and Purification 鹽析法 利用不同的蛋白質(zhì)在高濃度鹽溶液中，溶解度不同程度的降低來進(jìn)行分離純化。 優(yōu)點(diǎn) ：設(shè)備和條件要求低，安全應(yīng)用范圍廣泛。 缺點(diǎn)： 分級分離能力不高。 鹽析時應(yīng)注意的幾個問題： （ 1）鹽飽和度：由于蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)不同，鹽析要求的飽和度也不同。 （ 2） pH 值的選擇：蛋白質(zhì)在 pI時的溶解度最小。 （ 3）蛋白質(zhì)濃度：在相同條件下，蛋白質(zhì)濃度越大越易沉淀，使用鹽的飽和度極限也愈低。選擇適當(dāng)?shù)牡鞍踪|(zhì)濃度，可避免共沉的干擾。但對溫度敏感的，要在低溫下進(jìn)行。 如尿激酶。最常用的脫鹽方法是透析，時間一般較長，應(yīng)常換透析液，注意防止污辱。蛋白質(zhì)的沉淀與溶解，與溶劑的介電常數(shù)有關(guān)。 幾種溶劑的介電常數(shù) 溶劑名稱 20 ℃ 時的介電常數(shù) 溶劑名稱 20 ℃ 時的介電常數(shù) 乙醚 甲醇 33 丙酮 水 80 乙醇 24 介電常數(shù)與靜電力的關(guān)系： F=Q1Q2/Kr2 式中： K— 介電常數(shù)。 F— 相距為 r的 2個帶電量分別為 Q Q2點(diǎn)電荷相互作用的靜電引力。即可用 20— 30%的丙酮； 而 7080%乙醇沉淀的物質(zhì)，可用 50— 60%的丙酮即可。有機(jī)溶劑法比鹽析法分辨力強(qiáng)，沉淀也好過濾，易干燥，但對有些生物活性物質(zhì)能引起失活和變性。 有機(jī)沉淀法應(yīng)注意的問題 ： （ 1）控制工藝過程的溫度：整個操作過程應(yīng)在低溫下進(jìn)行，而且最好是同一溫度。 （ 3）及時處理沉淀物：沉淀物經(jīng)過濾或離心后，要立即用水或緩沖液溶解，降低有機(jī)溶劑的濃度。 （ 5）有機(jī)溶劑是酶和蛋白質(zhì)的變性因素，尤其是對敏感酶類。 由于各種蛋白質(zhì)在等電點(diǎn)時，仍有一定的溶解度而沉淀不完全，多數(shù)蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)又都十分接近，所以單獨(dú)使用效果不理想，分辨力差，多用于提取后除雜蛋白。 膜分離法 膜分離技術(shù)包括 超濾 、 反滲透析 、電滲析、 微孔過濾 、氣體滲析和 超精密過濾 。在液壓的驅(qū)動下，能通過超濾膜的分離粒子的范圍，一般在 — m。 優(yōu)點(diǎn) ：成本低、操作方便、條件溫和、能較好地保持藥物活性、回收率高。 （ 2）反滲透：以高分子透過性薄膜為分離介質(zhì)，在超過溶液滲透壓力的情況下，使溶液中的溶劑透過薄膜，同時使溶質(zhì)和不溶物阻截在膜前。 特點(diǎn)：能耗少，體積小，適應(yīng)大規(guī)模生產(chǎn)。膜的孔徑在 μ m。為 ~ μ m。 離子交換層析 采用不溶性高分子化合物作為離子交換劑，分離純化各種生化物質(zhì)。離子交換層析包括吸附、吸收、穿透、擴(kuò)散、離子交換、離子親和力等物理化學(xué)過程。 （ 2）弱酸性陽離子交換樹脂：功能團(tuán)為羧基、酚基。 （ 3）強(qiáng)堿性陰離子交換樹脂：功能團(tuán)為三甲基季胺基團(tuán)。 （ 4）弱酸性陰離子交換樹脂：功能團(tuán)為伯胺基、仲胺基、叔胺基。 影響交換速度的因素： （ 1）樹脂顆粒的大?。侯w粒小，表面積大，能促進(jìn)內(nèi)部和外部擴(kuò)散。 （ 3）離子濃度：交換速度隨離子濃度的上升而增加，達(dá)到一定濃度后交換速度不在升高。 （ 5）樹脂酸堿性的強(qiáng)弱和溶液的 pH： （ 6）交聯(lián)度大小：交聯(lián)度愈小，樹脂愈易膨脹，交換速度愈快。 （ 7）有機(jī)溶劑的影響：當(dāng)有有機(jī)溶劑存在時，會降低樹脂對有機(jī)離子的選擇性，而容易吸附無機(jī)離子。又稱凝膠過濾、凝膠滲透過濾、分子篩過濾、阻滯擴(kuò)散層析、排阻層析。 缺點(diǎn)：分離速度慢。 幾種常用的凝膠： （ 1）葡聚糖凝膠：基本骨架是 1— 6糖苷鍵。最著名的商品為Sephadex葡聚糖凝膠，珠狀顆粒物，化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，不溶于水、弱酸、堿和鹽溶液?？稍?120℃ 加熱 30min 滅菌而不破壞，但高于 120℃ 即變黃。 （ 2）聚丙烯酰胺凝膠：由碳 — 碳骨架構(gòu)成。穩(wěn)定性比葡聚糖凝膠好，洗脫時不會有凝膠物質(zhì)下來。遇酸時酰胺鍵會水解為羧基，使凝膠帶有一定的離子交換基團(tuán)?？障抖纫云跫?zhí)堑臐舛葋砀淖?，化學(xué)穩(wěn)定性不如葡聚糖凝膠。在 pH ,溫度 040 ℃ 穩(wěn)定。他能分離及萬到幾千萬相對分子質(zhì)量的物質(zhì)，彌補(bǔ)了葡聚
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