生物制藥的基本技術(shù)ppt46頁-文庫吧資料
2025-05-02 10:44本頁面
【正文】 ate）凝膠、聚苯乙烯凝膠（如 Styrogel , BioBeadsS） 親和層析 生物活性物質(zhì)都有親和作用，如酶與底物、激素與受體、核酸的互補(bǔ)鏈間，多糖與蛋白質(zhì)復(fù)合體。對硼酸有吸附，不能用硼酸緩沖液。沒有干凝膠，必須在溶脹狀態(tài)保存，遇脫水劑、冷凍和一些有機(jī)溶劑即破壞，丙酮和乙醇對它無影響。 （ 3）瓊脂糖凝膠：天然凝膠，不是共價(jià)交聯(lián)，是以氫鍵交聯(lián)。 缺點(diǎn)：不耐酸。完全為惰性。濕狀貯存易發(fā)霉，若長期不用，需加防腐劑。低溫時(shí)，在 12h不改變性質(zhì)；室溫時(shí)，在 也不改變；在 ， 60℃ 兩個(gè)月沒有發(fā)改變。由葡聚糖和甘油以醚橋形式交聯(lián)而成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。 廣泛用于分離氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)、酶及多糖等藥物。 優(yōu)點(diǎn)：設(shè)備簡單，操作方便，分離效果好，回收率高，分離條件緩和，不使活性物質(zhì)失活變性，凝膠可重復(fù)使用，無需再生處理。 凝膠層析 指化合物隨流動相流經(jīng)裝有凝膠的固定相的層析柱時(shí)，因其各種物質(zhì)分子大小不同而被分離的技術(shù)。但交聯(lián)度小的樹脂選擇性較差。 （ 4）離子的水化半徑：水化半徑小的易被吸附。 （ 2）攪拌和流速：加快攪拌速度或加大液體流速，都能減少樹脂外液膜的厚度，從而使液相擴(kuò)散速度增加。 pH愈低交換能力愈大。pH沒有限制。在酸性溶液中不發(fā)生交換， pH愈大交換能力愈強(qiáng)。 樹脂種類和理化性能： （ 1）強(qiáng)酸性陽離子交換樹脂：功能團(tuán)為磺酸基， pH一般沒有限制。 基本原理：離子交換樹脂在水中能溶脹，溶脹后，其分子中的極性基團(tuán)（活性基團(tuán)），具有可擴(kuò)散的離子，能與溶液中的離子起交換作用；非極性基團(tuán)作為樹脂的骨架，使樹脂不溶于水并具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，為離子交換的進(jìn)行及溶液和樹脂的分離創(chuàng)造了條件。用于水的精制、循環(huán)水的凈化、除懸浮固體粒子以及糖液、酶液的精制。 （ 4）超精密過濾：以聚乙烯醇為主體的中空多孔濾膜，分級性能在超濾膜與微孔濾膜之間。 （ 3）微孔濾膜：由高分子材料制成的薄膜過濾介質(zhì)，可以過濾一般介質(zhì)不能截留的細(xì)菌和微粒。這一過程類似于滲透 ,但方向相反，即溶劑從高濃度一側(cè)傳遞到濃度低的一側(cè)，故稱反滲透。適用于酶和蛋白質(zhì)藥物的分離、濃縮、脫鹽、提純、除菌、除病毒和熱原。即利用一種特制的膜對溶液中的各種溶質(zhì)分子進(jìn)行選擇性過濾。 （ 1）超濾：根據(jù)溶質(zhì)分子和懸浮粒子是否通過多孔膜來進(jìn)行篩分。實(shí)際生產(chǎn)中常與有機(jī)溶劑沉淀法、鹽析法聯(lián)合使用。 等電點(diǎn)沉淀法 利用蛋白質(zhì)在等電點(diǎn)時(shí)的溶解度最低，而各種蛋白質(zhì)又具有不同的等電點(diǎn)的特性進(jìn)行分離的工藝過程。 （ 4） pH的選擇：在待沉淀蛋白質(zhì)的 pI附近。 （ 2）防止溶劑局部濃度過高：加入有機(jī)溶劑時(shí)攪拌要均勻，速度要適當(dāng)，避免局部濃度過高，引起沉淀物的破壞、變性或失活。應(yīng)用時(shí)還要注意揮發(fā)和火災(zāi)等。 注：水有較高的介電常數(shù)，具有很好的溶劑性能，是一種廣譜溶劑。 經(jīng)驗(yàn) ：如 3040%乙醇沉淀的物質(zhì)，改用丙酮時(shí)，其體積分?jǐn)?shù)可減少 10%左右。指帶相反電荷的微粒之間的靜電引力。降低溶液的介電常數(shù)，使其溶解度變小，同時(shí)，還破壞蛋白質(zhì)的水化膜而使蛋白質(zhì)沉淀析出。 有機(jī)溶劑沉淀法 利用不同蛋白質(zhì)在不同濃度的有機(jī)溶劑中的溶解度差異而分離目的蛋白質(zhì)的方法。 （ 5）鹽析沉淀物的脫鹽：鹽析的沉淀分離后，經(jīng)脫鹽才能獲得純品。 常在 04 ℃ 范圍內(nèi)迅速操作。 （ 4）溫度：一般在室溫下進(jìn)行，濃鹽對蛋白質(zhì)有保護(hù)作用。蛋白質(zhì)濃度愈高，其他蛋白質(zhì)共沉作用也愈強(qiáng)，這是不希望的。因此，進(jìn)行鹽析時(shí)的 pH，要選擇在被分離蛋白質(zhì)的 pI 附近。要按工藝要求，正確計(jì)算飽和度。 常用的中性鹽 ：硫酸銨、硫酸鎂、硫酸鈉、氯化鈉、磷酸鈉 。在高鹽情況下，蛋白質(zhì)不易發(fā)生變化，一般在室溫下操作。在低鹽濃度下，溶解度隨著鹽濃度升高而增加，稱鹽溶作用；當(dāng)鹽濃度不斷升高時(shí)，不同蛋白質(zhì)的溶解度又以不同程度下降并先后析出沉淀，稱鹽析作用。 影響提取的因素： 被提取物質(zhì)溶解度的大?。阂话銟O性對極性；非極性對非極性；酸對堿；堿對酸；高溫；遠(yuǎn)離等電點(diǎn)。 溫度：一般在 5 ℃ 以下，但對溫度耐受力較大的藥物，可適當(dāng)?shù)奶岣邷囟?，使雜蛋白變性分離，有利于提取和純化。適用于動植物和微生物原料。 提取條件的選擇 ： 溶劑 :常用水、稀鹽、稀酸、稀堿，有機(jī)溶劑如乙醇、丙酮、氯仿、四氯化碳、丁醇等。 三、提 取 Extraction 提?。?也稱抽提、萃取，就是利用一種溶劑對物質(zhì)的不同溶解度，從化合物中分離出一種或幾種組分的過程。 C. 表面活性劑處理法：表面活性劑的分子中，兼有親脂性和親水性基團(tuán)，能降低水的界面張力，具有乳化、分散、增溶作用。如用噬菌體感染大腸桿菌細(xì)胞制造 DNA時(shí)，采用 ，然后加 入 100μg~1mg的溶菌酶，在 37 176。 B. 溶菌酶處理法：溶菌酶是專一地破壞細(xì)菌細(xì)胞壁的酶。自溶時(shí)，需加少量的防腐劑，甲苯、氯仿，以防止外界細(xì)菌的污染。 3. 生化及化學(xué)法 ： A. 自溶法：將新鮮的生物材
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