【正文】 ????????????????????17參 考 文 獻(xiàn) ????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????18致 謝 ????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????20邵陽(yáng)學(xué)院 2022 屆畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文）11 緒 論 課題研究的背景和意義 靈芝一般用于醫(yī)學(xué)，是非常珍貴的中國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)藥物，含有大量的藥物的有效成分，包括從靈芝中提取的靈芝多糖。由此對(duì)靈芝中有效成分的提取即成為一項(xiàng)具有重大意義的工程，目前社會(huì)上新出行的高效降壓茶其有效成分即為靈芝中的靈芝多糖，目前實(shí)際生產(chǎn)中，溶劑提取法是提取靈芝多糖的最普遍且常用的方法，此種方法主要是用水、稀堿、二甲基亞砜等有機(jī)溶劑進(jìn)行提取。尤其是工藝廢料較難處理，會(huì)對(duì)環(huán)境造成嚴(yán)重污染，并對(duì)人體健康有一定的損害，不利于當(dāng)前社會(huì)倡導(dǎo)的可持續(xù)發(fā)展。本實(shí)驗(yàn)研究主要是以靈芝子實(shí)體為原料，以靈芝多糖提取率為參考目標(biāo)，采用紫外可見分光光度法測(cè)定 OD 值并計(jì)算得到多糖的得率，然后針對(duì)酶法提取靈芝多糖的預(yù)處理因素進(jìn)行試驗(yàn)研究，采用正交實(shí)驗(yàn)得出單因素處理對(duì)酶法提取靈芝多糖的影響，為靈芝子實(shí)體更進(jìn)一步的開發(fā)研究提供了理論基礎(chǔ) [5]。靈芝多糖可以用于加入固體食物中,如茶,咖啡,啤酒等飲料不改變?cè)械莫?dú)特風(fēng)味邵陽(yáng)學(xué)院 2022 屆畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文）2而且具有藥用價(jià)值,這些都是最具功能性發(fā)展前景的食品。靈芝多糖具有許多特點(diǎn),如明確的療效,沒(méi)有副作用,作為輔助藥物在腫瘤的臨床治療 [7]。游育紅等通過(guò)研究得出，靈芝多糖可以保護(hù)細(xì)胞器免受氧自由基的損傷，可以提高細(xì)胞的存活率，證明了靈芝多糖具有保護(hù)細(xì)胞和抗氧化的功能 [8]。的產(chǎn)生[9]。解躍華等通過(guò)研究證明靈芝多糖能夠降低血液中脂質(zhì)的分子含量 [10]。糖尿病在臨床方面主要表現(xiàn)為血糖濃度非常高。 （4）免疫調(diào)節(jié)功能 徐晉等將用于結(jié)合的靈芝多糖和 5 氟尿嘧啶誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以得出,該種組合可以加速并且提高肝癌細(xì)胞凋亡率 [12~13]。 （5）其它保健功能 吳京燕等研究表明復(fù)合靈芝多糖能非常顯著的提高輻照的小鼠體液中的白邵陽(yáng)學(xué)院 2022 屆畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文）3細(xì)胞及 SOD 活性，表明靈芝多糖具有拮抗輻射 [14]的功能。 靈芝多糖的提取的研究現(xiàn)狀傳統(tǒng)的提取方法耗時(shí)較長(zhǎng)、并且耗用溶劑量大、溫度過(guò)高，容易使多糖發(fā)生分解 [16]。酶法提?。荷驉塾⒌韧ㄟ^(guò)提取姬松茸子實(shí)體多糖的提取實(shí)驗(yàn)，多糖的提取% ，并且所需要的時(shí)間的只需要熱水提取時(shí)間的一半,萃取率顯著高于水萃取,也較高于酸、堿提取 [17]。也有一部分專家學(xué)者 [5]研究了銀耳多糖的多種提取工藝，研究實(shí)驗(yàn)表明,酶的提取效果最好,堿法提取排到第二，酶法提取非常顯著的縮短了提取的時(shí)間,使用復(fù)合酶水解與熱水提取法結(jié)合,提取香菇多糖，萃取時(shí)間明顯減少一半,而且萃取率增加 [ 18~19]。它基本上是建立模型，模擬胃和小腸的身體內(nèi)部工作環(huán)境，提出了人工胃液和人工腸液提取中藥(TCM)在低溫和酶催化的引入人體，使藥物進(jìn)入人體易于綜合利用活動(dòng)的混合物。超聲波提取：可以促使溶劑滲透快速進(jìn)入細(xì)胞,大大縮短提取時(shí)間,顯著提高提取率 [22~23]。超聲波提取優(yōu)點(diǎn)： 萃取效率高； 提取時(shí)間非常短；提取溫度非常低；適應(yīng)性廣；提取液中雜質(zhì)很少，有效成分比較容易分離和提純；提取的過(guò)程中操作成本非常低，綜合經(jīng)濟(jì)效益顯著提高。動(dòng)植物多糖的超濾技術(shù)可以將多糖進(jìn)行有效的分級(jí)，具有非常高的收率、重復(fù)性也比較好好、能源邵陽(yáng)學(xué)院 2022 屆畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文）4消耗低、設(shè)備比較簡(jiǎn)單、沒(méi)有污染、并且不會(huì)破壞多糖的生物活性等優(yōu)點(diǎn)。 靈芝多糖的開發(fā)和利用現(xiàn)狀自1960年代以來(lái),研究表明,某些真菌多糖的藥用價(jià)值顯著,沒(méi)有細(xì)胞毒性,應(yīng)用前景非常廣闊。近年來(lái)郭利平 [26]，陳超琴 [27]，范曉良 [28]等，這些學(xué)者在多糖的研究方面都做出了很大的貢獻(xiàn)，但是他們的研究主要關(guān)注多糖的提取工藝,故本實(shí)驗(yàn)從老師所給的幾點(diǎn)影響因素入手，參考近五年的有關(guān)多糖提取方面的文獻(xiàn)，結(jié)合不同學(xué)者多年來(lái)從不同方面對(duì)多糖測(cè)定方法的研究,預(yù)處理在幾個(gè)對(duì)酶法提取靈芝多糖的影響,并提出自己的看法不同的問(wèn)題，以期為工業(yè)上預(yù)處理對(duì)酶法提取靈芝多糖的影響因素的選擇提供依據(jù)。本次的實(shí)驗(yàn)?zāi)康闹饕菫榱丝疾椴煌膯我蛩氐奈锪项A(yù)處理對(duì)酶法提取靈芝多糖的影響，然后在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，用靈芝中靈芝多糖的提取率為參考目標(biāo)，對(duì)烘烤溫度、紫外線的照射時(shí)間、物料粒度等因素進(jìn)行正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)研究。粉碎是為了增加在萃取過(guò)程中反應(yīng)的接觸面積，用以獲得到較高的提取率。三種酶相比,纖維素酶提取靈芝多糖的效果最好,多糖提取容量高達(dá),酒精、纖維素酶+酒精下沉的方法來(lái)比較三種方法提取靈芝多糖含量、纖維素酶水解+酒精下沉方法提取效果是最好的,多糖含量,故本實(shí)驗(yàn)采取纖維素酶法 +醇沉法提取，探究物料粒度、烘烤溫度以及紫外照射時(shí)間與（酶法提?。╈`芝多糖提取率之間的相關(guān)關(guān)系。最后可以用紫外可見分光光度計(jì)測(cè)定其 OD 值，并且通過(guò)計(jì)算可以得到靈芝多糖的獲得率。表 試驗(yàn)所用試劑與材料藥品名稱 級(jí)別 生產(chǎn)廠家 濃度無(wú)水酒精 AR 東莞市建潤(rùn)化工有限公 100%C6H12O6 AR 北京化工廠壞水 AR 淄博建龍化工有限公司 95%枸櫞酸鈉 AR 北京化工廠石碳酸 AR 濟(jì)南世紀(jì)通達(dá)化工廠 100%芝草 市售 戴家平老百姓大藥房 主要儀器與設(shè)備儀器與設(shè)備歸納表 。(2)物料粒度對(duì)（酶法提?。╈`芝多糖提取率之間的關(guān)系 [30~31] g，將其置于250 mL錐形瓶中，然后將盛有物料的錐形瓶放入烘箱設(shè)備中適當(dāng)?shù)臏囟群婵疽欢〞r(shí)間，取出錐形瓶，處理后的靈芝粉降至室溫時(shí)，將稱取好的靈芝粉分別通過(guò)（50目，60目，80目，100目，150目）的目篩，紫外線下照射35 min，然后將通過(guò)不同大小目篩的靈芝粉分別用標(biāo)記好的錐形瓶裝按料液比1:15加入適量的緩沖液（pH= ） ，% 的邵陽(yáng)學(xué)院 2022 屆畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文）8纖維素酶，纖維素酶降解80分鐘，然后按照上述提取工藝流程得到靈芝粗多糖，計(jì)算得率，探究物料粒度對(duì)靈芝多糖的提取率的影響。 正交試驗(yàn)方案設(shè)計(jì) 以單因素試驗(yàn)結(jié)果為基礎(chǔ)，以靈芝多糖提取率為主要考察目標(biāo), 以烘烤溫度、物料粒度、紫外線照射時(shí)間作為考察的 3 個(gè)因素，設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)。與液體移動(dòng)移動(dòng) 、7 毫升葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液分別在 10 毫升容量瓶和擴(kuò)展能力,配水,葡萄糖含量為 、 毫克/毫升的標(biāo)準(zhǔn)使用液。邵陽(yáng)學(xué)院 2022 屆畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文）9（2）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線 準(zhǔn)確測(cè)量 毫升蒸餾水和 毫升葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液,然后干把它插到試管中,加入 毫升,5%的苯酚溶液,搖勻,然后把它放在冰水,然后立即加入 毫升濃 H2SO4,完全動(dòng)搖,將其放置在室溫下 15 分鐘后在 100℃沸水,讓水浴加熱 15 分鐘,然后拿出來(lái)放在冰水 15 分鐘,為排除干擾，根據(jù)需要設(shè)置一個(gè)空白試驗(yàn)。 靈芝多糖的含量的測(cè)定 （1）換算因數(shù)測(cè)定準(zhǔn)確稱量靈芝多糖 50 毫克完全溶解于一定量的水,體積 100 毫升容量瓶定容至 100 毫升,得到樣液。據(jù)《中華人民共和國(guó)藥典》f= 。通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程來(lái)計(jì)算樣本液體葡萄糖,葡萄糖(ug),然后通過(guò)公式計(jì)算靈芝多糖的含量。 %10%MfAm????公 式 ： 靈 芝 多 糖 的 得 率 （ ）M——葡萄糖的質(zhì)量；f——換算因素（）；A——稀釋倍數(shù)；100——樣液的體積(mL)；10－6 ——ug 換算成 g；邵陽(yáng)學(xué)院 2022 屆畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文）10m——靈芝粉的質(zhì)量（g） 。從圖中得出標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程是 Y=+(R2=1)。 單因素試驗(yàn)結(jié)果 烘烤溫度與靈芝多糖提取率之間