【正文】 nm處的 OD值增加，并與解鏈程度有一定比例的關(guān)系。 ? Tm值高低與其分子所含堿基中的 GC 含量相關(guān)， GC含量越高， Tm值越大。 ? 退火：熱變性的 DNA經(jīng)緩慢冷卻后復(fù)性的過程。 七、 核酸酶的 概念 及 性質(zhì) a) 核酸酶： 所有可以水解核酸的酶，根據(jù)酶解底物的不同分為 DNA酶和 RNA酶。 c) 核酸外切酶： 僅能水解位于核酸分子鏈末端核苷酸的酶。 d) 核 酶：具有 催化功能的 RNA分子，底物是核酸，屬于序列特異性的核酸內(nèi)切酶。 第三章 一、 酶及生物催化劑的基本概念；酶的分子組成及相關(guān)概念如酶蛋白、輔助因子（輔酶、輔基）、全酶、酶的活 性中心和必需基團(tuán)等 見表 31。是機(jī)體內(nèi)催化各種代謝反應(yīng)最主要的催化劑。核酶是具有高效、特異催化作用的核酸，是近年來發(fā)現(xiàn)的一類新的生物催化劑，主要是參與 RNA的剪接。 單體酶 僅具有三級結(jié)構(gòu)的酶 ―― 寡聚酶 由多個(gè)相同或不同亞基以非共價(jià)鍵連接組成的酶 ―― 多酶體系 由幾種不同功能的酶彼此聚合形成的多酶復(fù)合物 丙酮酸 脫氫酶復(fù)合體 多功能酶 一些多酶體系在進(jìn)化過程中由于基因的整合，多種不同催化功能存在于一條多肽鏈中 嘧啶核苷酸從頭合成的酶 單純酶 僅由肽鏈構(gòu)成的酶 脲酶、淀粉酶、脂酶等 結(jié)合酶 由酶蛋白和輔助因子組成的酶 酶蛋白和輔助因子結(jié)合形成的復(fù)合物稱為全酶 只有全酶才有催化作用 輔助因子 輔酶 與酶蛋白結(jié)合疏松的輔助因子，可用透析或超濾方法去除 ―― 輔基 與酶蛋白結(jié)合緊密的輔助因子，不能用透析或超濾方法去除 金屬離子多為酶的輔基 金屬酶 金屬離子作為輔助因子，且與酶結(jié)合緊密，提取過程中不易丟失 羧 基肽酶、黃嘌呤氧化酶 金屬激活酶 金屬離子作為輔助因子，但與酶結(jié)合疏松 已糖激酶、肌酸激酶 酶的必需基團(tuán) 酶分子中與酶活性密切相關(guān)的化學(xué)基團(tuán) ―― 酶的活性中心 必需基團(tuán)組成具有特定空間結(jié)構(gòu)的區(qū)域，能與底物結(jié)構(gòu)并將底物轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物的區(qū)域，包含結(jié)合基團(tuán)和催化基團(tuán) ―― 單純酶與結(jié)合酶的活性中心 ? 對單純酶來說，活性中心就是酶分子在三維結(jié)構(gòu)上比較接近的少數(shù)幾個(gè)氨基酸殘基，但 通過肽鏈的盤繞、折疊而在空間構(gòu)象上相互靠近； 活性中心的常見必需基團(tuán)： His殘基的咪唑基、 Ser殘基的羥基、 Cys殘基的巰基及 Glu殘基的 γ 羧基。 金屬離子的作用 ? 作為酶活性中心的催化基團(tuán)參與催化反應(yīng)、傳遞電子； ? 作為連接底物與酶的橋梁，便于酶對底物起作用； ? 維持酶蛋白構(gòu)象； ? 中和陰離子，降低反應(yīng)中的靜電斥力。 表 32 常見酶促反應(yīng)中維生素的作用 維生素 學(xué)名 輔酶形式 酶促反應(yīng)中的作用 B1 硫胺素 TPP 丙酮酸脫氫酶 , α 酮戊二酸脫羧酶及轉(zhuǎn)酮醇酶的輔酶 B2 核黃素 FAD、 FMN 多種氧化還原酶及遞氫體 的酶輔基參與遞氫作用 PP 尼克酸 NAD、 NADP 脫氫酶的輔酶 B6 吡哆醛 磷酸吡哆醛 氨基酸脫羧酶、轉(zhuǎn)氨酶等的輔酶 B12 鈷胺素 鈷胺素 烷基轉(zhuǎn)移的輔酶 泛酸 遍多酸 輔酶 A、 ACP 多種?；D(zhuǎn)移反應(yīng)的輔酶 H 生物素 羧化酶輔酶 羧化酶的輔酶，參與 CO2的固定 葉酸 葉酸 FH4 各種 — 碳基團(tuán)轉(zhuǎn)移的活性載體 C 抗壞血酸 抗壞血酸 膠原中脯氨酰羥化酶、多巴胺 ? 羥化酶等作用時(shí)提供還原物 二、 酶促反應(yīng)的特點(diǎn)與酶促反應(yīng)機(jī)制的學(xué)說 酶促反應(yīng)的特點(diǎn) ? 酶促反應(yīng)具有極高的效率：降低反應(yīng)的活化能，但 不改變反應(yīng)的平衡點(diǎn)。如脲酶和琥珀酸脫氫酶。如脂肪酶、磷酸酶、蛋白酶等。 ? 酶促反應(yīng)的可調(diào)節(jié)性：⑴酶量調(diào)節(jié)； ⑵酶催化效率調(diào)節(jié)； ⑶改 變底物濃度進(jìn)行調(diào)節(jié)。 酶促反應(yīng)機(jī)制的誘導(dǎo)契 合假說 ? 酶與底物接近時(shí)二者相互誘導(dǎo)、相互形變、相互適應(yīng)。 三、 影響酶促反應(yīng)動力學(xué)的 幾種因素及其動力學(xué)特點(diǎn) 影響酶促反應(yīng)速度的因素見表 33。 Km 值越小，酶與底物的親和力越大，表示不需要很高的底物濃度就可容 易達(dá)到最大反應(yīng)速度。 ? Vmax是酶完全被底物飽和時(shí)的反應(yīng)速度，與酶濃度呈正比 ? Km與 Vmax的測定：雙倒數(shù)作圖得到林貝氏方程： 自變量是 1/[S]，應(yīng)變量是 1/V，斜率是 Km/Vmax，在 y軸的截距是 1/Vmax（圖 31） 酶濃度的影響 圖 31 斜率 ? 當(dāng) [S][E]時(shí)，酶促反應(yīng)速度與 [E]成正比 pH值的影響 ? 在某一 pH值，酶催化 活性最大，稱為最適 pH值。少數(shù)例外（如胃蛋白酶，最適 pH 值為；肝精氨酸酶最適 pH 值為 ）。 表 34 兩種抑制性作用的比較 不可逆性抑制 可逆性抑制 結(jié)合方式 共價(jià)鍵 非共價(jià)鍵 抑制劑的作用部位 活性中心上的必需基團(tuán) 如有機(jī)磷農(nóng)藥： 絲氨酸上的羥基 重金屬離子和砷化合物：巰基 S、 ES、 E 能否通過透析或超濾去除 否 可以 舉例 有機(jī)磷農(nóng)藥、重金屬離子 磺胺類等 ? 三種可 逆性抑制的比較 ， 詳見表 35。 ? 大多數(shù)為金 屬離子，如 Mg2+、 K+；有機(jī)化合物：如膽汁酸鹽。例 Mg2+于已糖激酶。 四、 酶原與酶原的激活 ? 酶 原： 無活性酶的前體。 ? 酶原的激活： 酶原向酶的轉(zhuǎn)化過程。 ? 生理意義：⑴保護(hù)自身不被酶破壞；⑵保證酶在特定的部位與環(huán)境發(fā)揮作用；⑶酶的貯存形式。 2. 變構(gòu)酶多為代謝途徑的關(guān)鍵酶，催化的常為不可逆反應(yīng)。 4. 變構(gòu)酶有催化部位和調(diào)節(jié)部位（而不是都具有催化亞基和調(diào)節(jié)亞基）。 ? 共價(jià)修飾：酶蛋白上的一些基團(tuán)與某種化學(xué)基團(tuán)發(fā)生可逆的共價(jià)結(jié)合，從而改變酶的活性。 7. 磷酸化與去磷酸化最為常見。 ? 酶含量的調(diào)節(jié)：通過改變酶合成或降解以調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)酶的含量，屬于慢速調(diào)節(jié)。由不同基因或等位基因編碼的多肽鏈，或由同一基因轉(zhuǎn)錄生成的不同 mRNA 翻譯的不同多肽鏈組成的蛋白質(zhì)。推薦名稱是從習(xí)慣名稱中挑選而來，可分為六類：⑴氧化還原酶類；⑵轉(zhuǎn)移酶類；⑶水解酶類；⑷裂合酶類；⑸異構(gòu)酶類； ⑹合成酶類。遺傳性因素和許多疾病均可引起酶的質(zhì)與量的異常以及活性的改變，并引發(fā)多種疾病。許多藥物可通過改變?nèi)梭w或致病菌中酶的活性從而達(dá)到治療目的。 第四章 一、 糖的主要生理功能 ? 提供能量是糖最主要的生理功能。 ? 糖也是組成人體組織結(jié)構(gòu)的重要成分，例糖蛋白、糖脂。 二、 糖無氧氧化的基本反應(yīng)過程、能量生成、關(guān)鍵酶調(diào)節(jié)及生理意義 糖的無氧氧化： 又稱糖酵解，葡萄糖在缺氧或供氧不足情況下，生成乳酸的過程。 ⑴ 一次脫氫： 3磷酸甘油醛→ 1,3二磷酸甘油酸 + NADH+H＋ 的氧化過程。 ? 糖酵解的調(diào)節(jié)： 主要在三個(gè)關(guān)鍵酶上的調(diào)節(jié)（見 表 41）。 ? 成熟紅細(xì)胞的供能。 三、 糖有氧氧化的基本反應(yīng)過程、能量生成、關(guān)鍵酶調(diào)節(jié)及生理意義 糖有氧氧化的定義： 葡萄糖在有氧條件下徹底氧化生成水和二氧化碳的過程。 ⑴ 一次底物水平磷酸化反應(yīng) ? 琥珀酰 CoA → 琥珀酸 + GTP ⑵ 二次脫羧基反應(yīng) （同時(shí)伴隨有脫氫反應(yīng)） ? 異檸檬酸 → α 酮戊二酸 + CO2 + NADH+H＋ ? α 酮戊二酸 → 琥珀酰 CoA + CO2 + NADH+H＋ ⑶ 三次關(guān)鍵酶的催化 ? 檸檬酸合成酶 催化 草酰乙酸 + 乙酰 CoA → 檸檬酸 ? 異檸檬酸脫氫酶 催化 異檸檬酸 → α 酮戊二酸 + CO2 + NADH+H＋ ? α 酮戊二酸脫氫酶 催化 α 酮戊二酸 → 琥珀酰 CoA + CO2 + NADH+H＋ ⑷ 四次脫氫反應(yīng) ? 異檸檬酸 → α 酮戊二酸 + CO2 + NADH+H＋ ? α 酮戊二酸 → 琥珀酰 CoA + CO2 + NADH+H＋ ? 琥珀酸 → 延胡索酸 + FADH2 ? 蘋果酸 → 草酰乙酸 + NADH+H＋ 糖有氧氧化的調(diào)節(jié) 見表 42。 三羧酸循環(huán)的意義 ? 氧化供能。 ? 是三大營養(yǎng)物質(zhì)互變的樞紐。 有氧氧化生成的 ATP 表 43 糖有氧氧化生成 ATP的詳細(xì)部位說明 反 應(yīng) 輔 酶 ATP 第一階段 葡萄糖 → 6P葡萄糖 1 6P果糖 → 1,6雙磷酸果糖 1 2個(gè)拷貝分子 3磷酸甘油醛 → 1,3二磷酸甘油酸 NAD＋ 2 or 3 * 2 1,3二磷酸甘油酸 → 3磷酸甘油酸 底物水平 1 2 磷酸烯醇式丙酮酸 → 丙酮 酸 底物水平 1 2 第二階段 丙酮酸 → 乙酰 CoA NAD＋ 3 2 第三階段 異檸檬酸 → α 酮戊二酸 NAD＋ 3 2 α 酮戊二酸 → 琥珀酰 CoA NAD＋ 3 2 琥珀酰 CoA → 琥珀酸 底物水平 1 2 琥珀酸 → 延胡索酸 FAD 2 2 延胡索酸 → 蘋果酸 NAD＋ 3 2 凈生成 36 or 38 *糖酵解過程中產(chǎn)生的 NADH+H＋， 如果經(jīng)蘋果酸穿梭機(jī)制，可以產(chǎn)生 3個(gè) ATP，若經(jīng)磷酸甘油穿梭機(jī)制，則產(chǎn)生 2個(gè) ATP分子。 ? 提供 NADPH作為供氫體參與多種代謝反應(yīng) 。 ⑵ NADPH參與體內(nèi)羥化反應(yīng)。 五、 糖原合成及 分解 的基本反應(yīng)過程 、部位、關(guān)鍵 酶調(diào)節(jié) 及生理意義。 表 44 糖原合成與糖原分解的比較 糖原合成 糖原分解 部 位 肝臟、肌肉 肝臟、肌肉 關(guān)鍵酶 有活性的 糖原合酶 a(去磷酸化形式 ) 磷酸化酶 a（磷酸化形式） 無活性的 糖原合酶 b（磷酸化形式） 磷酸化酶 b（去磷酸化形式） 作用部位 α 1,4糖苷鍵、 α 1,6糖苷鍵 能量 消耗 增加一個(gè)糖分子，消耗 2個(gè) ATP 不需要 生理作用 能量的儲備 維持血糖（肝） 酵解供能（肌肉） 六、 糖異生概念 、 反應(yīng)過程、關(guān)鍵酶 調(diào)節(jié)及生理意義 糖異生概念： 從非糖化合物（乳酸、甘油、生糖氨基酸） 轉(zhuǎn)變?yōu)槠咸烟腔蛱窃倪^程。 ⑴ 一次反應(yīng) 一次 ATP的消耗：丙酮酸 + CO2 + ATP → 草酰乙酸 一次 GTP的消耗：草酰乙酸 + GTP → 磷酸烯醇式丙酮酸 ⑵ 二種轉(zhuǎn)運(yùn)草酰乙酸 的途徑 ? 蘋果酸穿梭機(jī)制：丙酮酸或生成丙氨酸的生糖氨基酸為原料異生糖時(shí)。 ⑶ 三次能障的繞行 ? 丙酮酸 → 草酰乙酸 → 磷酸烯醇式丙酮酸 ? 1,6二 磷酸 果糖 → 6P果糖（果糖二磷酸酶 1催化） ? 6P葡萄糖 → 葡萄糖（葡萄糖 6磷酸酶催化） 糖異生的調(diào)節(jié) ? 糖異生途徑與糖酵解途徑是方向相反的兩條代謝途徑。 糖異生的生理意義 ? 維持血糖濃度恒定。 ? 調(diào)節(jié)酸堿平衡。乳酸通過細(xì)胞膜彌散進(jìn)入血液后入肝，在肝內(nèi)異生為葡萄糖。如此形成的循環(huán)。 ? 生理意義：避免損失乳酸。 糖的三條分解代謝途徑的比較見表 45。激素對血糖濃度的調(diào)節(jié) ? 血液正常值： ～ 。 ? 類脂：固醇及其酯、磷脂及糖脂，細(xì)胞的膜結(jié)構(gòu)重要組分。 ? 來源二由代謝物供給如必需脂肪酸，某些多不飽和脂肪酸。 ? 甘油一酯途徑：小腸粘膜細(xì)胞，初始底物為 2甘油一酯， 1,2甘油二酯為中間產(chǎn)物。 甘油的分解代謝 1． 甘油 + ATP → 3P甘油 （胞液中） 2． 3P甘油 → 磷酸二羥丙酮（ 3P甘油醛） + NADH+H＋ （胞液中） 3． 3P甘油醛 → 1,3二磷酸甘油酸 + NADH+H＋ （胞液中） 4． 1,3二磷酸甘油酸 → 3磷酸甘油酸 + ATP （ 胞液中） 5． 磷酸烯醇式丙酮酸 → 丙酮酸 + ATP （胞液中） 6． 丙酮酸 → 15 ATP （線粒體） 由上可知，一 分子 甘油徹底氧化分解產(chǎn)生的 ATP分子數(shù)為 20個(gè)或 22 個(gè)（在胞液中的兩次脫下的 NADH+H＋ 經(jīng)不同的轉(zhuǎn)運(yùn)途徑運(yùn)輸入線粒體中分別產(chǎn)生 2個(gè)或 3個(gè) ATP分子） 十、 脂肪動員的概念及特點(diǎn) 脂肪動員： 儲存在脂肪細(xì)胞中的脂肪，被脂肪酶逐步水解為游離脂酸及甘油并釋放入血供其它組織氧化利用的過程。肉堿脂酰轉(zhuǎn)移酶 I是限速酶。 ? 肝內(nèi)生酮：肝細(xì)胞內(nèi)有生成酮體的酶， HMG CoA合成酶是合成的限速酶。 ? 肝外用酮： 1. 琥珀酰 CoA轉(zhuǎn)硫酶（心、腎、腦、骨骼?。? 2. 乙酰乙酰 CoA硫解酶（心、腎、腦、骨骼肌） 3. 乙酰乙酰硫激酶（心、腎、腦） 酮體生成的意義 ? 為肝外組織（腦、肌組織）提供能源。 ? 正常情況下，血中酮體為 mmol/