瘧原蟲的鏡檢技術山東省寄生蟲病防治研究所-在線瀏覽
2025-07-13 13:32本頁面
【正文】 涂成圓盤，稱 厚血膜 。推制時速度要均勻，血滴大小、推片與載玻片之間夾角大小及展開血膜的速度快慢等常影響血膜的厚薄。 ③薄血膜外觀：舌狀厚薄均勻，無劃痕，④位于玻片 1/2～ 1/3處。④厚血膜外觀：圓形厚薄均勻，無劃痕。 熟練工作者的推片姿勢 血膜的制作 （涂片操作） 涂制厚 、 薄血膜的位置 通常將厚 、 薄血膜涂在一張載玻片上 。 作為標本的血片每張玻片涂厚 、 薄血膜各 1個；門診和發(fā)熱病人血片每片 1人 ， 涂 2個厚血膜 1個薄血膜 ， 以防血膜脫落而影響檢查； 標本片 發(fā)熱病人血片 標簽 各種不同的瘧疾血片涂制法： 標準血片 （ 1人） 門診發(fā)熱病人血片 （ 1人） 居民普查血片 （ 2人） 厚薄血膜的標準 ●厚血膜血量適宜，不宜過多或過少 。 標準的瘧疾厚薄血膜位置 全國瘧疾鏡檢知識與技能競賽 血片制作和染色質量評價標準 好血片制作質量 : 厚血膜： 血量 ～ ,位置 玻片右 1／ 3稍偏右 ,直徑 ～ ， 外觀 圓形厚膜均勻。 全國瘧疾鏡檢知識與技能競賽的 競賽內容及分值比例 ：瘧疾病原和診斷基本知識。 ：制片染色和鏡檢讀片。 ：每位選手滿分 100分，其中理論競賽 20分，技能競賽 80分；技能競賽中，制片染色 15分， 鏡檢讀片 60分， 顯微鏡使用與維護 5分。 血膜的制作 血膜編號 血膜制成后，立即在玻片面上寫上受檢者的號碼，以防差錯；待薄血膜干后再用鉛筆于薄血膜中寫上血片種類的代號和受檢者的個人編號，依次順序插入標本盒內。 ， 注意防塵 、 防昆蟲吸吮血膜 。 。夏天標本盡可能 2448h內固定染色；冬天也不能超過 72h。若不能及時染色，薄血膜宜先用甲醇固定（ 13分鐘）然后用過濾清水對厚血膜溶血，晾干固定后裝入盒內蓋嚴，待以后染色。 這些染液中的主要染劑都包含美藍、伊紅和由美藍氧化所成的天青，所以稱 多色性染劑 。瑞氏染色，染色時間短，但染色效果不如吉氏穩(wěn)定，主要在門診量大的門診實驗室使用。 組成紅 、 白細胞和瘧原蟲等蛋白質的氨基酸電離出的帶正電荷的 NH3+和帶負電荷的 COO ， 與多色染劑有色基團所帶的陰 、 陽離子相結合 ， 從而使紅 、 白細胞和瘧原蟲被染上不同的顏色 。 紅 、 白細胞和瘧原蟲的蛋白質均由氨基酸組成 ， 每個氨基酸電離出一個帶正電荷的 NH3+和一個帶負電荷的 COO。 瘧原蟲 、 淋巴和大單核細胞 的胞漿 、 嗜堿性白細胞的顆粒等酸性蛋白質 ， 故 被染成藍色 。 染液的種類及染色原理 注意 ： 蛋白質和氨基酸都是兩性電解質，要求 染液的 pH值 。 姬氏染液母液配置方法 取姬氏粉 置于研缽中 ， 加 25ml甘油 充分研磨 ， 倒入 60或 100ml帶有玻塞的 有色 玻瓶中 。 姬氏染液是目前較優(yōu)良的血膜染劑 ， 即使在炎熱天氣中 ， 亦可經久不變 。 （ 伊紅在水溶液內遇到美藍或天青 即可互相化合而產生沉淀 ， 從而失去染色力 ） 。 姬氏染液的染色方法 ▲ 先用甲醇或無水酒精固定薄血膜 ,再用清水對厚血膜溶脫血紅蛋白，然后再進行染色。 單張血片染色 ：將處理好的血膜，加姬氏母液 12滴 ，加中性蒸餾水 1530滴 ，染色 30分鐘左右，然后用清水輕輕將片上的染液沖洗干凈，晾干鏡檢。 操作 1 （快染） 配制 5%染液，（每張血片約需染液 2ml） ：量筒內量 2ml緩沖液或新鮮涼開水，直接滴加吉氏原液 7滴，混勻，滴入待染標本的厚薄血膜上，染色 10min，清水細緩沖洗，晾干鏡檢。清水細緩沖洗， 晾干鏡檢。 如果血片偏紅，說明染液偏酸性。 外觀吉氏染色血片 影響染色效果的因素 血片染色好壞除與玻片清潔度 、 血片制作質量和染色技術等有關外 ， 還受到以下因素的影響： （ 1） 染劑 、 溶劑的質量 染料 、 甲醇和甘油必須用分析純 ， 且在配制時所用的器具必須干凈而無水份 。 新配制的染液因色素尚未充分溶解 ， 染色力較弱且常呈現偏堿性 。 以防吸潮而影響染液質量 。 姬氏和瑞氏染液的主要成份是美藍 、 伊紅和由美藍氧化產生的天青 ， 三者能在酒精溶液中溶解 ， 但在水溶液中伊紅遇到美藍和天青即產生沉淀 。 （ 5）染色時間 染色時間應根據染液的質量、新舊、稀釋濃度和氣溫而適當增減。室溫高則著色快，染色時間可略縮短，氣溫低可適當延長。 （ 7） 沖洗方法 應沿玻片或染色缸邊緣加水使染液表面一層溢出 ， 并輕輕沖洗 ， 以免染液色素顆粒沾污血膜 。 ● 厚血膜干燥時不要加熱，加熱會使原蟲變形，影響鏡檢結果。 ● 固定薄血膜時不要將甲醇觸碰到厚血膜 ● 沖洗染液時，不要沖走厚血膜。 ● 最少檢查 100個厚血膜油鏡視野未查見 瘧原蟲。 瘧原蟲生活史簡圖 （為更好的理解原蟲各期形態(tài)，簡要復習一下生活史） 生 活 史 含成熟瘧原蟲子孢子按蚊 叮咬人 子孢子隨唾液進入人體血液 約 30分鐘 侵入肝細胞 裂體增殖 成熟裂殖體（含數以萬計裂殖子） 肝細胞破裂 裂殖子侵入紅細胞（開始 紅細胞內期 發(fā)育） 發(fā)育 小滋養(yǎng)體（環(huán)狀體） 攝食營養(yǎng)、發(fā)育 大滋養(yǎng)體 核分裂、發(fā)育 未成熟裂殖體 核進一步分裂 裂殖體（成熟） 被寄生紅細胞破裂 裂殖子釋放入血流 一部分被巨噬細胞吞噬。 一部分裂殖子在紅細胞內不再進行裂體增殖，而發(fā)育成雌，雄配 子體。 由生活史容易看出，瘧原蟲的主要致病時期是紅細胞內期原蟲； 主要是指紅細胞內期的無性體 —— 小滋養(yǎng)體到成熟裂殖體，而不是紅 細胞內期的無性體 —— 配子體。在我國流行最廣的是間日瘧，其次是惡性瘧；惡性瘧主要分布在我國的云南、海南兩?。蝗寨懟颊邩O少見，卵形瘧僅發(fā)現幾例。 人類四種瘧原蟲的基本特征 感染人的瘧原蟲
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