【正文】 疾鏡檢知識(shí)與技能競(jìng)賽的 競(jìng)賽內(nèi)容及分值比例 ：瘧疾病原和診斷基本知識(shí)。包括：瘧原蟲生史，血片制作、染色、鏡檢操作理論，顯微鏡使用與維護(hù)知識(shí)。 ：制片染色和鏡檢讀片。包括：厚、薄血片的制作和染色；瘧原蟲的顯微鏡鏡檢，確定陰陽(yáng)性和蟲種，定量計(jì)數(shù)以及顯微鏡的使用與維護(hù)。 ：每位選手滿分 100分，其中理論競(jìng)賽 20分，技能競(jìng)賽 80分；技能競(jìng)賽中，制片染色 15分， 鏡檢讀片 60分， 顯微鏡使用與維護(hù) 5分。 將來(lái)咱們省內(nèi)競(jìng)賽內(nèi)容及分值比例參考該標(biāo)準(zhǔn)。 血膜的制作 血膜編號(hào) 血膜制成后，立即在玻片面上寫上受檢者的號(hào)碼，以防差錯(cuò)；待薄血膜干后再用鉛筆于薄血膜中寫上血片種類的代號(hào)和受檢者的個(gè)人編號(hào)，依次順序插入標(biāo)本盒內(nèi)。 制作血膜的注意事項(xiàng) ， 且勿碰撞 、 磨損 。 ， 注意防塵 、 防昆蟲吸吮血膜 。 厚血膜未干前勿使標(biāo)本盒傾斜 ， 以免血膜傾向一側(cè) ，造成血膜厚薄不均 ， 厚處不易溶血和著色而影響檢查結(jié)果；晾干血膜時(shí)應(yīng)注意防塵 、 防止蒼蠅 、 蟑螂等昆蟲吮吸血膜；干后應(yīng)及時(shí)裝入標(biāo)本盒并蓋嚴(yán) 。 。 切忌在毒太陽(yáng)下曬或火烤，干透后才能用甲醇固定薄血膜。夏天標(biāo)本盡可能 2448h內(nèi)固定染色；冬天也不能超過 72h。放置時(shí)間越久，厚血膜越不易溶血，染色效果也差。若不能及時(shí)染色，薄血膜宜先用甲醇固定（ 13分鐘）然后用過濾清水對(duì)厚血膜溶血，晾干固定后裝入盒內(nèi)蓋嚴(yán)，待以后染色。 染液的種類 染液種類：瘧原蟲的染色，目前臨床上應(yīng)用最廣泛的是 瑞氏（ Wright stain）和吉氏染液（ Giemsa stain）。 這些染液中的主要染劑都包含美藍(lán)、伊紅和由美藍(lán)氧化所成的天青，所以稱 多色性染劑 。 我們主要用吉氏染液，它具有方便，染色效果穩(wěn)定，便于長(zhǎng)期保存的優(yōu)點(diǎn)。瑞氏染色，染色時(shí)間短，但染色效果不如吉氏穩(wěn)定，主要在門診量大的門診實(shí)驗(yàn)室使用。 染液的染色原理 染色原理是染料于被染物的陰陽(yáng)離子互相吸附而結(jié)合的一種化學(xué)反應(yīng) 。 組成紅 、 白細(xì)胞和瘧原蟲等蛋白質(zhì)的氨基酸電離出的帶正電荷的 NH3+和帶負(fù)電荷的 COO ， 與多色染劑有色基團(tuán)所帶的陰 、 陽(yáng)離子相結(jié)合 ， 從而使紅 、 白細(xì)胞和瘧原蟲被染上不同的顏色 。 瘧原蟲和白細(xì)胞的胞漿被染成藍(lán)色 ， 紅細(xì)胞 、 瘧原蟲和白細(xì)胞核被染成紫紅色 。 紅 、 白細(xì)胞和瘧原蟲的蛋白質(zhì)均由氨基酸組成 ， 每個(gè)氨基酸電離出一個(gè)帶正電荷的 NH3+和一個(gè)帶負(fù)電荷的 COO。 堿性染料美藍(lán) 的有色基團(tuán)帶陽(yáng)離子 ， 可與細(xì)胞中帶負(fù)電荷的 COO部分結(jié)合 ， 使之成為 藍(lán)色 。 瘧原蟲 、 淋巴和大單核細(xì)胞 的胞漿 、 嗜堿性白細(xì)胞的顆粒等酸性蛋白質(zhì) ， 故 被染成藍(lán)色 。 酸性染料伊紅 的有色基團(tuán)帶陰離子 ， 可 與細(xì)胞中帶正電荷的 NH2+部分結(jié)合 ， 使之呈 紅色 ；但 美藍(lán)與伊紅都不能使瘧原蟲和白細(xì)胞的核著色 ， 可美藍(lán)氧化后產(chǎn)生的天青有媒染作用 ， 于是 ， 在媒染物與染料的共同作用下 ， 瘧原蟲 和白細(xì)胞 核 被染成 紫紅色 。 染液的種類及染色原理 注意 ： 蛋白質(zhì)和氨基酸都是兩性電解質(zhì)，要求 染液的 pH值 。 染液偏酸 時(shí)，所帶的正電荷增加，易于伊紅結(jié)合，使紅細(xì)胞和瘧原蟲的核染成鮮紅色 ，而 淋巴細(xì)胞和原蟲的胞漿著色較差 ；反之，當(dāng) 染液偏堿 時(shí)， 紅細(xì)胞和嗜伊紅白細(xì)胞的顆粒等被染成紫藍(lán)色 ，不易觀察。 姬氏染液母液配置方法 取姬氏粉 置于研缽中 ， 加 25ml甘油 充分研磨 ， 倒入 60或 100ml帶有玻塞的 有色 玻瓶中 。 在研缽中加少量甲醇 ， 洗去甘油濃液混入瓶?jī)?nèi) ， 至 25ml甲醇 洗凈缽中甘油染液為止 ， 塞緊瓶塞 ， 充分搖勻 ， 置于 55—60℃ 水浴中或溫箱內(nèi) 24h或室溫內(nèi) 3—5天 ， 多加搖動(dòng) ， 即成原液 。 姬氏染液是目前較優(yōu)良的血膜染劑 ， 即使在炎熱天氣中 ， 亦可經(jīng)久不變 。 材料： 姬氏粉 甘油 25ml 甲醇 25ml 注意： 。 （ 伊紅在水溶液內(nèi)遇到美藍(lán)或天青 即可互相化合而產(chǎn)生沉淀 ， 從而失去染色力 ） 。 ， 充分研磨；整個(gè)染色液配制時(shí)間不能少于 5個(gè)小時(shí) 。 姬氏染液的染色方法 ▲ 先用甲醇或無(wú)水酒精固定薄血膜 ,再用清水對(duì)厚血膜溶脫血紅蛋白，然后再進(jìn)行染色。 注意： 吸取母液時(shí)，不要晃動(dòng)瓶子 ,以免沉淀物泛起影響染色效果 . 成批血片染色 ： 將已用甲醇固定薄血膜的血片插入染色缸，倒入 3%吉氏染液稀釋液（ 3毫升吉氏原液加緩沖液或凈水 97毫升，混勻）浸沒血片，同時(shí)對(duì)厚薄血膜染色 30min（根據(jù)當(dāng)?shù)貙?shí)際情況，酌情增減染色時(shí)間和濃度），然后用清水輕輕將染液漂洗干凈，將血片標(biāo)本（血膜面朝下）插于晾干板上晾干，包裝，鏡檢。 單張血片染色 ：將處理好的血膜，加姬氏母液 12滴 ，加中性蒸餾水 1530滴 ，染色 30分鐘左右，然后用清水輕輕將片上的染液沖洗干凈，晾干鏡檢。 較理想的染色結(jié)果是 紅細(xì)胞為淡紅或淡紫紅色 ， 瘧原蟲的胞質(zhì)呈藍(lán)色 ， 核為紫紅色 ， 瘧色素為棕褐色 。 操作 1 （快染） 配制 5%染液，（每張血片約需染液 2ml） ：量筒內(nèi)量 2ml緩沖液或新鮮涼開水，直接滴加吉氏原液 7滴，混勻，滴入待染標(biāo)本的厚薄血膜上，染色 10min，清水細(xì)緩沖洗，晾干鏡檢。 操作 2 (慢染 )配制 3%染液： 在染色量筒內(nèi)量 2ml蒸餾水或 新鮮涼開 水， 再滴加 吉氏原液 4滴，混勻，滴入待染標(biāo)本上， 染色 30~40min。清水細(xì)緩沖洗， 晾干鏡檢。 吉氏染液濃度 門診染色 質(zhì)量好的染色 :核呈紅色 ,胞漿呈藍(lán)色。 如果血片偏紅，說明染液偏酸性。 如果血片偏藍(lán)，說明染液偏鹼性。 外觀吉氏染色血片 影響染色效果的因素 血片染色好壞除與玻片清潔度 、 血片制作質(zhì)量和染色技術(shù)等有關(guān)外 ， 還受到以下因素的影響： （ 1） 染劑 、 溶劑的質(zhì)量 染料 、 甲醇和甘油必須用分析純 ， 且在配制時(shí)所用的器具必須干凈而無(wú)水份 。 （ 2） 染液的新舊