原位雜交與凋亡檢測(cè)技術(shù)-在線瀏覽
2025-06-30 00:53本頁(yè)面
【正文】 洗 清潔液浸泡 24h95%酒精浸泡 24 h蒸餾水沖洗 1500C以上烘箱過(guò)夜。 蓋玻片應(yīng)做硅化處理。 實(shí)驗(yàn)用玻璃器皿在實(shí)驗(yàn)前一日置高 溫 （ 2400C） 烘烤，以破壞 RNA酶。 （五） 減低背景染色 乙酸酐和三乙醇胺浸洗，以減低靜 電效應(yīng)。 雜交后洗滌。 雜交： 滴加雜交液：輕加，不產(chǎn)生氣泡，或用 DAKO筆沿組織周圍劃圈。 蓋玻片周圍加液體石蠟或用橡皮泥封固，以防雜交液蒸發(fā)。 （八）雜交后處理： 用含低濃度 RNA酶（ 20ug/ml） 液將切 片的非堿基配對(duì)的 RNA除去。 切片切忌干燥。 酶檢測(cè)系統(tǒng)（與免疫組化同）。 將切片用 RNA酶或 DNA酶進(jìn)行預(yù)處理后雜交。 置換試驗(yàn)：用與載體非特異的序列和 不相關(guān)探針雜交。 用已知確定為陽(yáng)性或陰性組織進(jìn)行 雜交對(duì)照。 3%H2O2室溫處理 10分鐘（以滅活內(nèi)源 性過(guò)氧化物酶）蒸餾水洗。 PBS洗 3次 5分鐘，蒸餾水洗 1次。 雜交后洗滌：揭掉蓋玻片， 30370C 左右水溫的 2 SSC洗滌 5分鐘 3次。 SSC洗滌 5分鐘 3次。 滴加兔抗地高辛： 370C ， 60分鐘。 1滴加生物素化羊抗兔 IgG， 370C， 30分鐘。 1滴加 SP試劑 : 370C， 30分鐘。 1 DAB顯色： 2030分鐘，充分水洗。 七、 結(jié)果判斷： DNA原位雜交的陽(yáng)性信號(hào)一般存在于細(xì)胞核內(nèi)。 生殖細(xì)胞瘤 16號(hào)染色體 ISH HER2熒光原位雜交 皮膚鱗狀上皮細(xì)胞核 HPV DNA（ +） ISH 宮頸粘膜 上皮 HPV16（ +） ISH 宮頸粘膜上皮 HPV16（ +） ISH 宮頸鱗癌 HPV18(+)， ISH 鼻咽癌 EBER(+), ISH 腎小管上皮細(xì)胞核 HBVDNA（ +）， ISH 食管粘膜基底層細(xì)胞質(zhì) Egr1 mRNA（ +）， ISH 食管鱗癌細(xì)胞質(zhì) Egr1 mRNA（ +）， ISH 食管鱗癌細(xì)胞質(zhì) CyclinD1mRNA（ +）， ISH 胃腺癌細(xì)胞質(zhì)端粒酶hTR(+), ISH 肝細(xì)胞癌 CD44V6 mRNA（ +）， ISH 肝細(xì)胞癌 整合素 a5 mRNA（ +）， ISH 乳腺癌細(xì)胞質(zhì) PR mRNA(+), ISH 腦星形細(xì)胞瘤 血小板生長(zhǎng)因子 mRNA（ +）， ISH 陽(yáng)性信號(hào)的評(píng)定（半定量）： （ 1）陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)：陽(yáng)性細(xì)胞 ≤10% 、 ≤30% 、 ≤ 70% 和 70%分別為 4分。 用計(jì)算機(jī)輔助的圖像分析、顯微分光度計(jì)或圖像分析儀對(duì)不同類型核酸顯色數(shù)量和強(qiáng)度進(jìn)行檢測(cè)。二者 結(jié)合起來(lái)，形成一個(gè)新的分子檢測(cè)系統(tǒng)， 對(duì)于深入研究基因擴(kuò)增、表達(dá)的調(diào)控與疾 病的發(fā)生機(jī)理有廣泛的應(yīng)用前景。 做原位雜交時(shí)應(yīng)適當(dāng)減低漂洗溫度， 以減少生物活性肽或蛋白的丟失。 用上述方法必須是雙酶雙標(biāo)，即分別用鹼性磷酸酶和辣根過(guò)氧化物酶。 陽(yáng)性細(xì)胞可為棕或藍(lán)單色或?yàn)樗{(lán)棕混合色。尤其對(duì)初作此項(xiàng)工作的人往往面對(duì)失敗而束手無(wú)策；但目前國(guó)際、國(guó)內(nèi)許多公司已推出一系列成套的原位雜交檢測(cè)試劑盒，可方便使用。 The End 細(xì)胞凋亡檢測(cè)技術(shù) 一 、 前言：凋亡（ Apoptosis） 程序性
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