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tunel染色檢測(cè)細(xì)胞凋亡-在線瀏覽

2024-10-06 02:09本頁(yè)面
  

【正文】 法檢測(cè)細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)原理和方法細(xì)胞凋亡中染色體DNA的斷裂是個(gè)漸進(jìn)的分階段的過(guò)程,染色體DNA首先在內(nèi)源性的核酸水解酶的作用下降解為50300kb的大片段。然后大約30 ﹪的染色體DNA在Ca 178。 依賴的核酸內(nèi)切酶作用下,在核小體單位之間被隨機(jī)切斷,形成180~200bp核小體DNA多聚體。由于正常的或正在增殖的細(xì)胞幾乎沒(méi)有DNA的斷裂,因而沒(méi)有3’OH形成,很少能夠被染色。TUNEL或缺口翻譯法實(shí)際上是分子生物學(xué)與形態(tài)學(xué)相結(jié)合的研究方法,對(duì)完整的單個(gè)凋亡細(xì)胞核或凋亡小體進(jìn)行原位染色,能準(zhǔn)確的反應(yīng)細(xì)胞凋亡最典型的生物化學(xué)和形態(tài)特征,可用于石蠟包埋組織切片、冰凍組織切片、培養(yǎng)的細(xì)胞和從組織中分離的細(xì)胞的細(xì)胞凋亡測(cè)定,并可檢測(cè)出極少量的凋亡細(xì)胞,靈敏度遠(yuǎn)比一般的組織化學(xué)和生物化學(xué)測(cè)定法要高,因而在細(xì)胞凋亡的研究中已被廣泛采用。在適合底物存在下,過(guò)氧化物酶可產(chǎn)生很強(qiáng)的顏色反應(yīng),特異準(zhǔn)確的定位出正在凋亡的細(xì)胞,因而可在普通光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行觀察。在所有動(dòng)物組織中幾乎不存在能與抗地高辛杭體結(jié)合的配體,因而非特異性反應(yīng)很低。本方法可以用于福爾馬林固定的石蠟包埋的組織切片、冰凍切片和培養(yǎng)的或從組織中分離的細(xì)胞凋亡測(cè)定。蛋白酶K(200μg/ml,):蛋白酶K ;PBS 100ml。TdT酶緩沖液(新鮮配):Trlzma堿 HCl調(diào)節(jié)pH至 ,加ddH2O定容到1000ml;再加入二甲砷酸鈉 29.。洗滌與終止反
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