tunel染色檢測(cè)細(xì)胞凋亡-免費(fèi)閱讀
【正文】 （三）注意事項(xiàng)一定要設(shè)立陽(yáng)性和陰性細(xì)胞對(duì)照。 組織切片用PBS洗 3次，每次 5min后，直接在切片上滴加兩滴過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗地高辛抗體，于濕盒中室溫反應(yīng)30min。（3）培養(yǎng)的或從組織分離的細(xì)胞的預(yù)處理：將約 5 107個(gè)/ml細(xì)胞于 4％中性甲醛室溫中固定 10min。用無(wú)水乙醇洗兩次，每次3min。蛋白酶K（200μg/ml，）：蛋白酶K ；PBS 100ml。TUNEL或缺口翻譯法實(shí)際上是分子生物學(xué)與形態(tài)學(xué)相結(jié)合的研究方法，對(duì)完整的單個(gè)凋亡細(xì)胞核或凋亡小體進(jìn)行原位染色，能準(zhǔn)確的反應(yīng)細(xì)胞凋亡最典型的生物化學(xué)和形態(tài)特征，可用于石蠟包埋組織切片、冰凍組織切片、培養(yǎng)的細(xì)胞和從組織中分離的細(xì)胞的細(xì)胞凋亡測(cè)定，并可檢測(cè)出極少量的凋亡細(xì)胞，靈敏度遠(yuǎn)比一般的組織化學(xué)和生物化學(xué)測(cè)定法要高，因而在細(xì)胞凋亡的研究中已被廣泛采用。TUNEL法檢測(cè)細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)原理和方法細(xì)胞凋亡中染色體DNA的斷裂是個(gè)漸進(jìn)的分階段的過(guò)程，染色體DNA首先在內(nèi)源性的核酸水解酶的作用下降解為50300kb的大片段。一、過(guò)氧化物酶標(biāo)記測(cè)定法原理：脫氧核糖核苷酸衍生物地高辛[（digoxigenin）11dUTP]在TdT酶的作用下，可以摻入到凋亡細(xì)胞雙鏈或單鏈DNA的3OH末端，與dATP形成異多聚體，并可與連接了報(bào)告酶（過(guò)氧化物酶或堿性磷酸酶）的抗地高辛抗體結(jié)合。 含2%H2O2的PBS緩沖液（）：H2O2 ；
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