tunel染色檢測細(xì)胞凋亡-文庫吧
2025-09-22 02:09 本頁面
【正文】 法原理：脫氧核糖核苷酸衍生物地高辛[（digoxigenin）11dUTP]在TdT酶的作用下，可以摻入到凋亡細(xì)胞雙鏈或單鏈DNA的3OH末端，與dATP形成異多聚體，并可與連接了報告酶（過氧化物酶或堿性磷酸酶）的抗地高辛抗體結(jié)合。在適合底物存在下，過氧化物酶可產(chǎn)生很強(qiáng)的顏色反應(yīng)，特異準(zhǔn)確的定位出正在凋亡的細(xì)胞，因而可在普通光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行觀察。毛地黃植物是地高辛的唯一來源。在所有動物組織中幾乎不存在能與抗地高辛杭體結(jié)合的配體，因而非特異性反應(yīng)很低。抗地高辛的特異性抗體與脊椎動物甾體激素的交叉反應(yīng)不到1％，若此抗體的Fc部分通過蛋白酶水解的方法除去后，則可完全排除細(xì)胞Fc受體非特異性的吸附作用。本方法可以用于福爾馬林固定的石蠟包埋的組織切片、冰凍切片和培養(yǎng)的或從組織中分離的細(xì)胞凋亡測定。(一)試劑配制磷酸緩沖液PBS（）：磷酸鈉鹽 50mM，NaCl 200mM。蛋白酶K（200μg/ml，）：蛋白酶K ；PBS 100ml。 含2%H2O2的PBS緩沖液（）：H2O2 ；PBS緩沖液 。TdT酶緩沖液（新鮮配）：Trlzma堿 HCl調(diào)節(jié)pH至 ，加ddH2O定容到1000ml；再加入二甲砷酸鈉 29．。TdT酶反應(yīng)液：TdT酶32μl；TdT酶緩沖液 76μl，混勻，置于冰上備用。洗滌與終止反應(yīng)緩沖液：氯化鈉 17. 4g；檸檬酸鈉 ；ddH2O 1000
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