tunel染色檢測(cè)細(xì)胞凋亡(存儲(chǔ)版)
【正文】 PBS緩沖液 。用95％和75％乙醇各洗一次，每次3min。在載玻片上滴加 50～100μl細(xì)胞懸液并使之干燥。用PBS洗4次，每次5min。陽(yáng)性對(duì)照的切片可使用DNaseI部分降解的標(biāo)本，陽(yáng)性細(xì)胞對(duì)照可使用地塞米松（1μM）處理34hr的大、小鼠胸腺細(xì)胞或人外周血淋巴細(xì)胞。1 用二甲苯脫水3次，每次2min，封片、干燥后，在光學(xué)顯微鏡下觀察并記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果。將切片置于染色缸中，加入已預(yù)熱到37℃的洗滌與終止反應(yīng)緩沖液，于37℃保溫30min，每10min將載玻片輕輕提起和放下一次，使液體輕微攪動(dòng)。用PBS洗兩次，每次5min，然后按下述步驟2進(jìn)行操作。過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗地高辛抗體（ONCOR）（二）實(shí)驗(yàn)步驟標(biāo)本預(yù)處理：（1）石蠟包埋的組織切片預(yù)處理：將組織切片置于染色缸中，用二甲苯洗兩次，每次5min。(一)試劑配制磷酸緩沖液PBS（）：磷酸鈉鹽 50mM，NaCl 200mM。低分子量的DNA分離后，也可使用DNA聚合酶進(jìn)行缺口翻譯（nick translation），使低分子量的DNA標(biāo)記或染色，然后分析凋亡細(xì)胞。然后大約30 ﹪的染色體DNA在Ca 178。在適合底物存在下，過(guò)氧化物酶可產(chǎn)生很強(qiáng)的顏色反應(yīng)，特異準(zhǔn)確的定位出正在凋亡的細(xì)胞，因而可在普通光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行觀察。TdT酶緩沖液（新鮮配）：Trlzma堿 HCl調(diào)節(jié)pH至 ，加ddH2O定容到1000ml；
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