菌種擴(kuò)大培養(yǎng)ppt課件-在線瀏覽
2025-06-20 05:19本頁面
【正文】 菌種而異 ， 但其原則為采用易被菌利用的成分如葡萄糖 、 玉米漿 、 磷酸鹽等 ， 需氧菌 ， 還需供給足夠的無菌空氣 ， 并不斷攪拌 ， 使菌 （絲 ） 體在培養(yǎng)液中均勻分布 。 種子罐級(jí)數(shù)的確定 種子罐級(jí)數(shù) ：是指制備種子需逐級(jí)擴(kuò)大培養(yǎng)的次數(shù) ， 取決于： （ 1） 菌種生長特性 、 孢子發(fā)芽及菌體繁殖速度； （ 2） 所采用發(fā)酵罐的容積 。 茄子瓶 → 種子罐 → 發(fā)酵罐 霉菌 ：生長較慢 ， 如青霉菌 ， 三級(jí)發(fā)酵 孢子懸浮液 → 一級(jí)種子罐 （ 27℃ ,40h孢子發(fā)芽 ， 產(chǎn)生菌絲 ） → 二級(jí)種子罐 （ 27℃ ， 1024h， 菌體迅速繁殖 ， 粗壯菌絲體 ） → 發(fā)酵罐 放線菌 ：生長更慢 ， 采用四級(jí)發(fā)酵 酵母 ：比細(xì)菌慢 ， 比霉菌 ， 放線菌快 ， 通常用一級(jí)種子 確定種子罐級(jí)數(shù)需注意的問題 （ 1） 種子級(jí)數(shù)越少越好 ， 可簡化工藝和控制 ， 減少染菌機(jī)會(huì) （ 2） 種子級(jí)數(shù)太少 ， 接種量小 ， 發(fā)酵時(shí)間延長 ， 降低發(fā)酵罐的生產(chǎn)率 ， 增加染菌機(jī)會(huì) （ 3） 雖然種子罐級(jí)數(shù)隨產(chǎn)物的品種及生產(chǎn)規(guī)模而定 。 如改變種子罐的培養(yǎng)條件 ， 加速了孢子發(fā)芽及菌體的繁殖 ， 也可相應(yīng)地減少種子罐的級(jí)數(shù) 。 培養(yǎng)基 種子質(zhì)量不穩(wěn)定的主要原因是原材料質(zhì)量波動(dòng) 。 蛋白胨加工原料不同如魚胨或骨胨對(duì)孢子影響不同 。 如微量元素 Mg2+ 、Cu2+ 、 Ba2+能刺激孢子的形成 。 水質(zhì)的影響：地區(qū)不同、季節(jié)變化和水源污染，均可造成水質(zhì)波動(dòng)，影響種子質(zhì)量。 解決措施 ： （ 1） 培養(yǎng)基所用原料要經(jīng)過發(fā)酵試驗(yàn)合格才可使用； （ 2） 嚴(yán)格控制滅菌后培養(yǎng)基的質(zhì)量； （ 3） 斜面培養(yǎng)基使用前 ， 需在適當(dāng)溫度下放置一定時(shí)間； （ 4） 供生產(chǎn)用的孢子培養(yǎng)基要用比較單一的氮源 ， 作為選種或分離用的培養(yǎng)基則采用較復(fù)雜的有機(jī)氮源 。 一般要嚴(yán)格控制孢子子斜面的培養(yǎng)溫度 。 例如土霉素生產(chǎn)菌種龜裂鏈霉菌孢子制備時(shí)發(fā)現(xiàn)：氣候干燥地區(qū)孢子斜面長得較快 ， 在含有少量水分的試管斜面培養(yǎng)基下部孢子長得較好 ， 斜面上部由于水分迅速蒸發(fā)呈干疤狀 ， 孢子稀少 。 表 21 不同相對(duì)濕度對(duì)龜裂鏈霉菌斜面生長的影響 相對(duì)濕度（ %） 斜面外觀 活孢子計(jì)數(shù)（億 /支） ~19 25~36 40~45 上部稀薄下部稠略黃 上部薄中部均勻發(fā)白 一片白 ， 孢子豐富 ，稍皺 培養(yǎng)時(shí)間和冷藏時(shí)間 （ 1） 培養(yǎng)時(shí)間 一般來說 ， 衰老的孢子不如年輕的孢子 ， 因?yàn)樗ダ系逆咦右言谥鸩竭M(jìn)入發(fā)芽階段 ， 核物質(zhì)趨于分化狀態(tài) 。 解決措施 ： 孢子培養(yǎng)的時(shí)間應(yīng)該控制在孢子量多 、 孢子成熟 、 發(fā)酵產(chǎn)量正常的階段終止培養(yǎng) 。 如土霉素生產(chǎn)菌種孢子斜面培養(yǎng) 4d左右即于 4℃ 冰箱保存 ， 發(fā)現(xiàn)冷藏 78d菌體細(xì)胞開始自溶 。 冷藏時(shí)間對(duì)孢子生產(chǎn)能力也有影響。 接種量 接種量大小影響到培養(yǎng)基中孢子的數(shù)量，進(jìn)而影響菌體的生理狀況。 二 、 影響種子質(zhì)量的因素及控制 生產(chǎn)過程中影響種子質(zhì)量的因素通常有：孢子的質(zhì)量 、 培養(yǎng)基 、 培養(yǎng)條件 、 種齡 、 接種量 。 培養(yǎng)條件 （ 1） 溫度 （ 2） 通氣量 在種子罐中培養(yǎng)的種子除保證供給易被利用的培養(yǎng)基外 ， 有足夠的通氣量可以提高種子質(zhì)量 。 但也有例外 ， 例如土霉素生產(chǎn)菌 ， 一級(jí)種子罐的通氣量小對(duì)發(fā)酵有利 。 通常種齡是以處于生命力極旺盛的對(duì)數(shù)生長期 ， 菌體量還未達(dá)到最大值時(shí)的培養(yǎng)時(shí)間較為合適 。 不同菌種或同一菌種工藝條件不同 ， 種齡是不一樣的 ， 一般需經(jīng)過多種實(shí)驗(yàn)來確定 。 接種量 接種量 ：是指移入的種子液體積和接種后培養(yǎng)液體積的比例 。 但接種量過大或者過小 ， 均會(huì)影響發(fā)酵 。 通常接種量 ， 細(xì)菌 1~5%， 酵母菌5~10%， 霉菌 7~15%， 有時(shí) 20~25% 三 、 種子質(zhì)量的控制措施 種子質(zhì)量的最終指標(biāo)是考察其在發(fā)酵罐中所表現(xiàn)出來的生產(chǎn)能力 。 因此在生產(chǎn)過程中通常進(jìn)行以下兩項(xiàng)檢查 。 生化指標(biāo) 種子液的糖 、 氮 、 磷的含量和 pH變化 。 酶活力 種子液中某種酶的活力，與目的產(chǎn)物的產(chǎn)量有一定的關(guān)聯(lián)。 (1)斜面培養(yǎng)基組成 葡萄糖 %， 蛋白胨 %， 牛肉膏 %， 氯化鈉 %， 瓊脂 ~%， pH ~（ 傳代和保藏斜面不加葡萄糖 ） 。 一級(jí)種子培養(yǎng) 一級(jí)種子培養(yǎng)的目的在于大量繁殖活力強(qiáng)的菌體 ， 培養(yǎng)基組成應(yīng)以少含糖分 ， 多含有機(jī)氮為主 ， 培養(yǎng)條件從有利于長菌考慮 。 (2)培養(yǎng)條件 用 1000mL三角瓶裝入培養(yǎng)基 200mI， 滅菌后置于沖程 、頻率 96次 /min的往復(fù)式搖床上振蕩培養(yǎng) 12h， 培養(yǎng)溫度 33
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