菌種擴大培養(yǎng)ppt課件-資料下載頁
2025-05-03 05:19本頁面
【正文】 后，再通過純種分離和性能測定的辦法從衰退的群體中找出尚未衰退的個體，以達到保持該菌種原有典型性狀的一種措施。 二、菌種的復(fù)壯 復(fù)壯的方法通常有兩種 純種分離 淘汰已衰退的個體 二、菌種的復(fù)壯 ?根本目的 是保持原有典型形狀，防止退化、死亡及雜菌污染 ?途徑 ：挑取其休眠體（分生孢子、芽孢），在其休眠后停止生長的條件下保藏。即缺乏營養(yǎng)、缺水、缺氧、低溫等。 ?重要因素 ：低溫 ?要求不損傷 cell，緩慢冷凍易使 cell死亡，快速不易死亡。 三、菌種保藏 ?適于 98%以上各類別的微生物，但不適于不產(chǎn)孢子的絲狀真菌的菌絲體 ?原理 :在低溫下快速將細胞凍結(jié)，然后在真空條件下干燥，使微生物的生長和酶活動停止，為防止冷凍和水分升華中對細胞的損害，采用保護劑代替干燥中丟失的結(jié)合水而穩(wěn)定細胞的構(gòu)型。防止細胞膜因凍結(jié)而破壞，還可以起支撐作用，使微生物疏松的固定在上面。 （一）凍干保藏 步驟： ? 安瓿管準(zhǔn)備 ? D=8mm， H=100mm的中性安瓿管，用 2%HCL浸泡 24小時 → 自來水沖凈 → 蒸餾水洗 12次 → 烘干 → 管口塞上棉塞 → 121℃ ， 30分鐘 ? 保護劑制備： ?脫脂牛乳或血清、乳糖、葡萄糖等（不含抗生素），蒸餾水配成 17%20%的脫脂乳（在無菌的干燥三角瓶中）→ 121℃,5min or 108℃,15min 殺菌（血清等用過濾除菌） （一）凍干保藏 ?菌種準(zhǔn)備及分裝 菌懸液的制備： ?斜面（穩(wěn)定期） ? 孢子 （新鮮成熟） → 每個斜面加 23ml滅菌保護劑 → 用接種環(huán)將菌苔刮起（若液體培養(yǎng)，則應(yīng)離心收集菌體，并經(jīng)滅菌生理鹽水洗滌，收集的菌體用保護劑制成菌懸液）制成 菌懸液 （ 1091010CFU/mL） → 用滅菌的滴管將菌懸液滴加至 安瓿管 底部，裝量一般為球體的 2/3左右位置（視干燥劑性能而定） → 管口塞好 滅菌棉 （一）凍干保藏 ?預(yù)凍： 70℃ 至全部凍結(jié) ?冷凍干燥： ?冷凍干燥器密封 → 開啟降溫至 50℃→ 開真空泵 →冷干塊或松散片狀（ 1%3%水分） → 停機，放氣（傳感器） ?取出，用酒精噴燈燒焙密封，低溫保藏（ 4℃或 18℃ ） （一）凍干保藏 凍干菌種 凍干管的啟用： 取出安瓿管 酒精表面消毒 近頂部在酒精燈火焰上灼燒 迅速滴上冷無菌水 管破裂（敲或掰） 加入 用無菌滴管或接種環(huán)移至液體或斜面上進行培養(yǎng) ?斜面孢子，液態(tài)孢子，斜面種子 → 4℃ 保藏 ?一般只宜 12個月（水分濃度較高） ?注意：不宜用于生產(chǎn)菌種保藏，也不適于名貴菌種保藏。 （二）低溫保藏法 ： ?傳統(tǒng)方法：少數(shù)冷凍保存易死亡的菌種用此法 ?步驟與方法 ： ?斜面菌種 → 低溫干燥處 → 每 36個月移植 ?穿刺培養(yǎng)：含 %%瓊脂培養(yǎng)基裝試管滅菌 → 用接種針尖挑取少量菌體，垂直刺入瓊脂培養(yǎng)基中心→ 適溫培養(yǎng) → 長好后低溫保存 ?大腸桿菌此法可保藏兩年以上，不發(fā)生明顯變異。 ? 缺陷：易發(fā)生遺傳變異（連續(xù)傳代丟失或減弱形狀，也易污染雜菌）。不宜用于貴重菌株或生產(chǎn)優(yōu)良菌株。 （三）低溫定期移植法 ： （四）石蠟油低溫保藏 適用于不產(chǎn)孢子的菌種 （如：平菇菌種） 不適用于利用石蠟的石油微生物 斜面菌種（斜面不宜過長) 石蠟油 三角瓶中，經(jīng) 121℃ ， 12小時 140℃ 160℃ 烘箱中干熱處理 以去除滅菌時滲入的水分 至清澈透明 倒入斜面（不能出現(xiàn)氣泡） 添加量已高出斜面 1cm為宜 4℃ 4℃ 保藏 ?方法： ?河砂 → 40目篩 → 加入 1%HCL置 30分鐘 → 蒸餾水沖洗至中性 → 烘干黃土（地表 1尺以下，瘦） → 曬干磨細，過 120目篩，砂：土 =4： 1（若土粗些，可 3： 2或 1：1） → 溶入小試管（ 50*80）裝量 1cm，塞棉塞→ 121℃ ， 1小時或 170℃ ， 2小時 → 制菌懸液（孢子液） → 每增加 → 真空干燥 34小時用 P2O5或CaCO3作干燥劑 → 保存與真空干燥狀態(tài)下， 4℃ ?適用于保藏產(chǎn)孢子的放線菌，霉菌及產(chǎn)芽孢的細菌（孢子、芽孢） （五）砂土管保藏 80%甘油高壓蒸汽滅菌（ 121℃ ， 30min，一小時） 斜面菌種用無菌水制成高濃度（ 1081010/ml）菌懸液，液體菌種離心并用無菌生理鹽水洗滌 → 各取等體積入菌種管或離心管（甘油約 40%）， 20℃ 保存（凍存） —— 細菌（ LAB）、酵母應(yīng)用均較好 。 （六）甘油管保藏 （七）液氮超低溫保藏 10%甘油或 510%的二甲亞楓 做保護劑 移入液氮 凍結(jié) 每分鐘下降 1℃
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