種子擴(kuò)大培養(yǎng)-在線瀏覽
2024-09-19 15:31本頁面
【正文】 和較大表面積而適合作霉菌的培養(yǎng)基 ② 培養(yǎng)溫度多為 25~28 ℃ ，培養(yǎng)時間為4~14天 發(fā)酵工程教學(xué)課件 3. 細(xì)菌孢子的制備 注意事項 37 ℃ ，少數(shù)為 28 ℃ ，培養(yǎng)時 間細(xì)菌菌體為 1~2天，產(chǎn)芽孢的細(xì)菌為 5~10天 發(fā)酵工程教學(xué)課件 種子制備 概念：指將固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)出的 孢子或菌體 轉(zhuǎn)入到液體培養(yǎng)基種培養(yǎng)，使其繁殖成大量 菌絲或菌體 的過程。 種子培養(yǎng)基營養(yǎng)應(yīng)豐富完全，易被菌體利用，濃度不宜過高。菌株純度高，性狀穩(wěn)定，不易發(fā)生變異。 若以菌體細(xì)胞為接種物，應(yīng)采取正在旺盛生長的繁殖期細(xì)胞，菌體細(xì)胞應(yīng)均勻，同步率高。 發(fā)酵工程教學(xué)課件 為了提高孢子的萌發(fā)率，有時需采取一些特殊措施 如： 丙酮丁醇梭菌的孢子在沸水中處理 90秒后在放入液體培養(yǎng)基底部，可獲得較高的發(fā)芽率?？稍谂囵B(yǎng)基中加入少量無毒的表面活性劑，幫助形成懸液。 如：檸檬酸生產(chǎn)的制種，用麩皮培養(yǎng)基產(chǎn)生大量孢子直接用于種子罐接種。孢子接入含液體培養(yǎng)基的搖瓶中，恒溫振蕩培養(yǎng)，獲得菌絲體，作為種子。 如：谷氨酸棒桿菌生產(chǎn)谷氨酸 發(fā)酵工程教學(xué)課件 實驗室制備的孢子或液體種子移種至種子罐擴(kuò)大培養(yǎng)，種子罐的培養(yǎng)基雖因不同菌種而異，但其原則為采用易被菌利用的成分如葡萄糖、玉米漿、磷酸鹽等。 生產(chǎn)車間種子制備 發(fā)酵工程教學(xué)課件 2）種子罐的作用： 主要是使孢子發(fā)芽，生長繁殖成菌（絲）體，接入發(fā)酵罐能迅速生長，達(dá)到一定的菌體量，以利于產(chǎn)物的合成。 一般根據(jù)菌種 生長特性 、 孢子發(fā)芽 及 菌體繁殖速度 以及所采用 發(fā)酵罐的容積 而定。 茄子瓶 → 種子罐 → 發(fā)酵罐 ?霉菌： 生長較慢 ， 如青霉菌 ， 三級發(fā)酵 孢子懸浮液 → 一級種子罐 （ 27?C,40小時孢子發(fā)芽 ， 產(chǎn)生菌絲 ） → 二級種子罐（ 27?C,10~24小時 ， 菌體迅速繁殖 ，粗壯菌絲體 ） → 發(fā)酵罐 ?放線菌： 生長更慢 ， 采用四級發(fā)酵 ?酵母： 比細(xì)菌慢 ， 比霉菌 ， 放線菌快 ，通常用一級種子 發(fā)酵工程教學(xué)課件 ?種子級數(shù)越少越好，可簡化工藝和控制，減少染菌機(jī)會； ?種子級數(shù)太少，接種量小，發(fā)酵時間延長，降低發(fā)酵罐的生產(chǎn)率，增加染菌機(jī)會； 確定種子罐級數(shù)需注意的問題 發(fā)酵工程教學(xué)課件 發(fā)酵工程教學(xué)課件 發(fā)酵工程教學(xué)課件 ?對于生長快的細(xì)菌，種子用量比例小，故種子罐相應(yīng)也少。 這稱為 一級種子罐擴(kuò)大培養(yǎng) ，也稱 二級發(fā)酵。 這稱為 二級種子罐擴(kuò)大培養(yǎng) ，也稱 三級發(fā)酵。 發(fā)酵工程教學(xué)課件 ?種子罐的級數(shù)越少，越有利于簡化工藝和控制，并可減少由于多次移種而帶來的染菌的機(jī)會。 發(fā)酵工程教學(xué)課件 雖然種子罐級數(shù)隨產(chǎn)物的品種及生產(chǎn)規(guī)模而定，但也與所選用工藝條件有關(guān)。 發(fā)酵工程教學(xué)課件 種子罐 1 發(fā)酵罐 1 發(fā)酵罐 2 種子罐 2 移種方式： ① ① ② ③ ④ 1）單種 2）雙種 3）倒種 4）混種 發(fā)酵工程教學(xué)課件 1）單種： 一個種子罐接種到一個發(fā)酵罐中。 3）倒種： 種子罐染菌又無備用種子時或種子質(zhì)量不理想可采樣 倒種 法，以適宜的發(fā)酵罐倒出部分給另一發(fā)酵罐。 發(fā)酵工程教學(xué)課件 2）種齡 種齡 —— 種子罐中培養(yǎng)的菌體開始移入下一級種子罐或發(fā)酵罐時的培養(yǎng)時間。 發(fā)酵工程教學(xué)課件 過于年輕的種子接入發(fā)酵罐后，往往會出現(xiàn)前期生長緩慢、發(fā)酵周期延長、產(chǎn)物開始形成的時間推遲，造成異常發(fā)酵的情況。 發(fā)酵工程教學(xué)課件 不同品種或同一品種的工藝條件不同，其菌齡也不一樣，一般要經(jīng)過多次試驗，考察其發(fā)酵罐中產(chǎn)量的多少來確定最適種齡。 大多數(shù)抗生素發(fā)酵的最適接種量為 7～ 15%，有時可增加到 20 ～ 25%；而由棒狀桿菌生產(chǎn)谷氨酸 接種量只需 1%。 接種量的大小取決于生產(chǎn)菌種在發(fā)酵中生長繁殖的速度。 近年來，不少廠家以加大種子量及采用豐富培養(yǎng)基作為獲得高產(chǎn)的措施；有的產(chǎn)品采用兩個種子罐接一個發(fā)酵罐的雙種法。 發(fā)酵工程教學(xué)課件 但如果接種量過大，往往使菌體生長過快、培養(yǎng)液黏度增加，造成溶氧不足，從而影響產(chǎn)物的合成。 發(fā)酵工程教學(xué)課件 種子質(zhì)量的判斷 為了保證各級種子移種前的質(zhì)量，除了保證規(guī)定的培養(yǎng)條件外，在過程中還要定期取樣測定一些參數(shù)以觀察基質(zhì)的代謝變化及菌體形態(tài)是否正常。 發(fā)酵工程教學(xué)課件 生化指標(biāo) 通常測定的參數(shù)有： 1） pH 2）培養(yǎng)基滅菌后磷、糖、氨基氮的含量變化 3）菌體形態(tài)、菌體濃度和培養(yǎng)液外觀（色素、顆粒等） 4）其它參數(shù)，如某種酶的活力 如土霉素發(fā)酵中，種子液的淀粉酶活力與發(fā)酵單位有一定關(guān)系，可通過測定種子液中淀粉酶的活力判斷種子質(zhì)量。 霉菌濃度的測量方法有 。 OD600 測干重
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