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2025-01-03 03:19本頁(yè)面
  

【正文】 類型一致(血清、血漿、尿液等)。 2. 介紹 2. 1 目的 本指南的目的旨在提供一種定量測(cè)量程序線性評(píng)價(jià)的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法。本指南強(qiáng)調(diào)任何用戶有必要確定自己對(duì)線性程度的要求,或非線性的允許誤差范圍。 Global 檢驗(yàn) 僅僅表明統(tǒng)計(jì)學(xué)上的非線性存在,不能顯示非線性存在哪里,也不能顯示誤差的大小。 用戶必須定一個(gè)目標(biāo),確定自己所要求的測(cè)量誤差、偏倚、隨機(jī)誤差(不精密度)、非特異性(干擾)的大小。 本文件適用范圍很寬,當(dāng)需建立一種方法的線性范圍時(shí),我們需要測(cè)試一個(gè)很寬的分析濃度范圍,然后逐漸縮小直到有可接受的線性范 圍。操作方法大體相似,不同的僅僅是分析的濃度水平和重復(fù)的次數(shù)。 Kroll和 Emancipator提出一種基于直線回歸方程與多項(xiàng)式方程比較的方法,用殘差(即每一個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)到回歸直線的差值)來(lái)定義線性。如果得出線性適合( 一次多項(xiàng)式 )則說(shuō)明測(cè)量方法是線性的。這種 9 方法 被 Kroll、 Praestgard、 Mechaliszyn和 Styer進(jìn)一步改進(jìn),并被美國(guó)病理學(xué)家學(xué)會(huì)實(shí)驗(yàn)室間方法比對(duì)所采用。 Tholen提出一種圖解連同回歸線性失擬誤差與目標(biāo)百分比對(duì)比的評(píng)價(jià)方法,對(duì)連續(xù)線性片斷進(jìn)行簡(jiǎn)單的斜率分析。通常單次檢測(cè)的允許誤差的范圍用標(biāo)本測(cè)量靶值 177。 分析物 (Analyte): 具有某一名稱的定量測(cè)定成分 ( ISO FDIS 17511) 分析結(jié)果( Analytical result) : 在本文件中指一個(gè)試驗(yàn)標(biāo)本的最后測(cè)量結(jié)果。 偏倚( Bias) :測(cè)量值與公認(rèn)參考值之間的差異。 自變量 ( Input variable) : 非獨(dú)立 變量 ( independence variable), 與因變量 ( output variable) 相對(duì)應(yīng) , 用 X表示 , 它的值點(diǎn)在 X軸上。如 y截距表示當(dāng) x為 0時(shí)的 y值大小。 線性方程( Linear squation) :代表線性關(guān)系的方 程式,典型的線性關(guān)系方程表達(dá)式為: Y=a+bX,X和 Y分別為自變量和應(yīng)變量, b為斜率, a為 Y軸截距。 線性( Linearity) :在檢測(cè)樣本時(shí),可以直接按比例得出分析物含量(一定范圍內(nèi))的能力。線性回歸其 因變量 與各 回歸參數(shù) 之間為 線性關(guān)系 。 測(cè)量程序 ( Measurement procedure) : 一系列操作規(guī)程,根據(jù)給定的方法,用于特定的檢測(cè)。 10 應(yīng)變量( Output variable) : 獨(dú)立變量 , 與自變量相對(duì)應(yīng)。 必須在相 同的測(cè)量程序、相同的儀器設(shè)備、相同的位置、在較短的時(shí)間內(nèi)重復(fù)等。 檢測(cè)系統(tǒng)( Testing system) :包括測(cè)量過(guò)程的所有因素,如儀器、樣本、人員、試劑、輔助材料和操作等,也包括樣本類型、測(cè)試溫度、濕度等。準(zhǔn)確度一般用測(cè)量偏倚(數(shù)字)來(lái)表示,準(zhǔn)確度與偏倚呈相反關(guān)系??梢詤⒖家话愕慕y(tǒng)計(jì)學(xué)文獻(xiàn)、書籍或統(tǒng)計(jì)軟件。 收集數(shù)據(jù)時(shí)要求有 5到 9個(gè)不同濃度的標(biāo)本多次測(cè)量,不同的濃度標(biāo)本 之間稀釋關(guān)系已知,不要求各濃度之間呈等距的。這種方法由兩部分組成,第一部分是檢查非線性模型是否比線性模型更適合于數(shù)據(jù)組;第二部分是評(píng)價(jià)最適非線性模型與線性模型的差值(每個(gè)點(diǎn))是否小于該方法所允許的偏差。儀器設(shè)備在實(shí)驗(yàn)室必須安裝和使用一段時(shí)間,實(shí)驗(yàn)室人員能理解和正確操作儀器。 11 4. 實(shí)驗(yàn)條件評(píng)價(jià) 建立一個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)的線性范圍比驗(yàn)證線性范圍來(lái)說(shuō),所需的實(shí)驗(yàn)條件是不同的,前者需要更多的實(shí)驗(yàn)標(biāo)本和重復(fù)次數(shù),后者只需一系列已知濃度或相互間稀釋關(guān)系的標(biāo)本,測(cè)量順序都是隨機(jī)的。當(dāng)驗(yàn)證線性范圍時(shí),需要 5到 7個(gè)能覆蓋整個(gè)線性范圍(廠家提供)的不同濃度的標(biāo)本,每個(gè)濃度水平測(cè)量?jī)纱巍Ia(chǎn)商希望有更多的測(cè)量點(diǎn)(比預(yù)期的線性范圍寬 20~ 30%),這樣能檢測(cè)到 “拐點(diǎn) ”,就能確定更寬的線性范圍。 五個(gè)測(cè)量點(diǎn)是多元回歸方法評(píng)價(jià)線性范圍時(shí)的最低要求,更多的測(cè)量點(diǎn)能更精確的評(píng)價(jià)線性,得到的線性范圍更寬。只要各標(biāo)本間的相互關(guān)系已知,配成特殊濃度的樣本也是可以接受的。在吸取小容量標(biāo)本時(shí)要小心,用正位移液管比較有用。 如果用到商品化的體外診斷試劑,需將廠家附上。 4. 2 基質(zhì)效應(yīng) 用于驗(yàn)證線性范圍的標(biāo)本類型應(yīng)與臨床測(cè)試所用的標(biāo)本類型相類似,所有標(biāo)本應(yīng)不含廠家所標(biāo)定的干擾因素(如溶血、黃疸、脂血等)。注意:標(biāo)本處理時(shí)加入不同的摻雜物,與人的標(biāo)本相比,會(huì)造成不同的影響。請(qǐng)參考最新版本的 NCCLS的 EP14文件 —基質(zhì)效應(yīng)的評(píng)價(jià)。 病人標(biāo)本 12 理想的樣本類型是病人的標(biāo)本,用接近于預(yù)期的可報(bào)告范圍上限和下限(或測(cè)量低限)的兩個(gè)分析濃度的標(biāo)本配成所有標(biāo)本濃度。 用推薦的稀釋液稀釋病人樣本 用于稀釋病人高濃度樣本的液體對(duì)測(cè)量結(jié)果是有影響的,只有廠家推薦的或?qū)嶒?yàn)室已證實(shí)可用的稀釋液才能用于稀釋樣本。如可能時(shí),廠商建立分析系統(tǒng)時(shí),應(yīng)包括稀釋液的研究。 病人樣本中添加分析物 當(dāng)分析物中不含干擾物時(shí),添加的分析物不需要高純度。如果含分析物的濃溶液加入病人標(biāo)本中時(shí),加入量盡可能少(原則上少于總體積的 10%),并記錄溶劑。做為選擇,可以適當(dāng)?shù)靥幚聿∪藰?biāo)本以降低分析物濃度(如透析、熱處理、層析)。尤其重要的是保持恒定的基質(zhì)要好于通過(guò)稀釋得到低的基質(zhì)效應(yīng)。要注意分析物要保持正常生理狀態(tài)下的形式(如蛋白結(jié)合或代謝產(chǎn)物狀態(tài)) 。這些稀釋液要用最小量,并可以查證其可用。這些稀釋液要用最小量,并可以查證其可用, 同時(shí) 要保證質(zhì)控物完全溶解。盡管高純度的材料可以最大程度的減少干擾效應(yīng)(影響結(jié)果的解釋),但低純度的材料也可以接受。 其它溶劑 13 當(dāng)用有機(jī)溶劑作稀釋劑時(shí),基質(zhì)效應(yīng)可能更大。表 1為一些分析物的建議原料,儀器或試 劑廠家的建議也可能有助于確定合適的材料。如果用白蛋白或非人的一些成分,在實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)和結(jié)果中要注明) WBC 白細(xì)胞棕黃層 注意:當(dāng)使用蛋白質(zhì)或酶時(shí),要確保其物理和 /或化學(xué)活性的一致性。 4. 6 分析范圍 選擇的測(cè)量濃度范圍應(yīng)包含或等于廠家所聲明的最低和最高濃度范圍,如果聲明的線性 范圍或測(cè)量范圍與選擇的濃度范圍不一致時(shí),可以選擇合適的樣本濃度加做新的實(shí)驗(yàn),或舍去未端點(diǎn)適當(dāng)?shù)乜s小線性范圍(五個(gè)或以上的樣本數(shù))。 4. 7 樣本準(zhǔn)備和濃度計(jì)算 如果高值和低值濃度是未知的,每一管必須編號(hào)來(lái)確定它的相對(duì)濃度。驗(yàn)證線性范圍時(shí), 高值和低值的測(cè)量均值要用到。也可以先用高值和低值濃度配制成一個(gè)中間濃度管,然后用低值和中間濃度、高值和中間濃度分配其它管的濃度。在一些實(shí)驗(yàn)室,優(yōu)先考慮稱量法來(lái)配制溶液。 ( 1)高值和低值濃度管要用可以接受的基質(zhì),要滿足整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的用量,具體量的多少要依賴于分析中所用體積決定。下面為等間距分配各管濃度。 每管的濃度由以下公式來(lái)計(jì)算,第 1管的濃度為 C1,體積為 V1,以此類推,第 5管的濃度和體積分別為 C5和 V5: 濃度 C=( C1 V5) /( V1+V5) 每管的濃度和體積單位必須一致,注意每管要充分混勻,并防止蒸發(fā)或其它改變。高濃度管濃度為 120單位,低濃度管濃度為 40單位,注意測(cè)量前不需知道實(shí)際 15 濃度。 預(yù)期各管濃度分別為 40, 60, 80, 100和 120單位。 如果需用到其它濃度,要知道相互的間隔關(guān)系,且相互間隔適合在座標(biāo)圖表上表示。用相同的計(jì)算方法可以得到其它任何的濃度。以下是根據(jù)不同目的所推薦的樣本數(shù)。 樣本測(cè)量時(shí)要隨機(jī)分布,在一個(gè)分析批內(nèi)或連續(xù)分析批中。 重復(fù)測(cè)量的次數(shù)要足夠,以便 可靠 得出各管的濃度。用戶要能 準(zhǔn)確地判斷重復(fù)測(cè)量的次數(shù),本指南不反對(duì)在不同的濃度水平重復(fù)不同的次數(shù)。 5.線性范圍的核實(shí) ——數(shù)據(jù)評(píng)估 初步數(shù)據(jù)檢查 檢測(cè)結(jié)果首先要綜合評(píng)價(jià)其可接受性和有效性。詳細(xì)的結(jié)果評(píng)估必須逐步參照以下模式: 1) 檢查數(shù)據(jù)是否有極端明顯的差異 (或錯(cuò)誤) ,如果有分析或技術(shù)性問(wèn)題被發(fā)現(xiàn)并得到糾正,則重復(fù)整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程 。將測(cè)量數(shù)據(jù)作為 Y值,計(jì)算濃度或相對(duì)濃度作為 X值進(jìn)行作圖。 3) 如果需要,將每一組的檢測(cè)數(shù)據(jù)按檢測(cè)時(shí)間次序排列,檢查是否有漂移或趨勢(shì)性變化。要避免沒(méi)有糾正錯(cuò)誤,選擇多次重 復(fù)測(cè)定結(jié)果中的 “好 ”數(shù)據(jù)進(jìn)行替代。 4) 觀察每個(gè)濃度水平的測(cè)量值之間差值。 5) 當(dāng)某一個(gè)給定濃度的一個(gè)測(cè)量值( yi)明顯偏離另一個(gè) Y值時(shí),目視檢查就可以判斷它是一個(gè)離群值(參照 )。 6) 如果發(fā)現(xiàn)兩個(gè)或以上不可解釋的 離群值,就應(yīng)懷疑檢測(cè)系統(tǒng)的性能。 7) 目視檢查 XY散點(diǎn)圖對(duì)于后續(xù)的線性評(píng)估是非常重要的,它可以很容易的發(fā)現(xiàn)非線性,或測(cè)量范圍是否太窄或太寬,也可以為后 續(xù)的統(tǒng)計(jì)分析選擇更合適的統(tǒng)計(jì)分析方法。出現(xiàn)離群值提示非線性或存在系統(tǒng)誤差。深入的討論參見(jiàn) ASTME 17894。單個(gè)離群值在數(shù)據(jù)組中可以刪除而不用更換 ,如果有一個(gè)以上的離群值出現(xiàn),檢測(cè)系統(tǒng)可能精確度太低,應(yīng)按標(biāo)準(zhǔn)方法刪除,這種情況下必須找到原因并糾正。不論最適曲線是線性與否,都不影響(線性范圍內(nèi))實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)點(diǎn)之間 其他濃度的反應(yīng)狀態(tài),并可得到連續(xù)、可靠的結(jié)果的 能力。這種方法有兩部分:第一步判斷用非線性多項(xiàng)式擬合數(shù)據(jù)是否比線 性好;第二步是當(dāng)非線性多項(xiàng)式擬合數(shù)據(jù)點(diǎn)比線性好時(shí),判斷最適 17 非線性模型與線性擬合之間的差值是否小于預(yù)先設(shè)定的該方法的允許偏差。先要知道其濃度或各溶液之間的比例關(guān)系,不同濃度間可以是等間距或不等間距的(但要知道相互之間的關(guān)系)??梢杂? 60、 80和 100代表 X值,也可 以用 4和5。 階別 回歸方程 回歸 自由度( Rdf) 一 次 Y=b0+b1X 2 二 次 Y= b0+b1X+b2X2 3 三 次 Y= b0+b1X+b2X2+b3X3 4 一 次多項(xiàng)式 模型為直線,這是判斷某種方法是否為線性的最適方程。 三次多項(xiàng)式 模型代表一種 “S”形反應(yīng)曲線,在測(cè)量范圍的兩端呈非線性。計(jì)算每個(gè)非線性系數(shù)斜率的標(biāo)準(zhǔn)差 SEi(可由回歸程序算出),然后進(jìn)行 t檢驗(yàn),判斷非線性系數(shù)是否有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,即與 0之間有無(wú)差異。 b2和 b3的統(tǒng)計(jì)分析計(jì)算公式如下: t=bi/SEi 自由度的計(jì)算公式為 df=L 上例 中,三 次 多項(xiàng)式回歸時(shí),L=5, R=2, Rdf=4, df=5*24=6。如果沒(méi)有非線性系數(shù) b2和b3( p),則認(rèn)為存在線性關(guān)系,不精密度高時(shí),則分析完成。要注意這只是統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著性,只是非線性被檢測(cè),而不代表對(duì)病人的檢測(cè)結(jié)
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