【正文】 階別 系數(shù) 數(shù)值 系統(tǒng)誤差 t檢驗 回歸標(biāo)準(zhǔn)誤 自由度 1 st b0 1st b1 10 2nd b0 2nd b1 2nd b2 9 3rd b0 3rd b1 3rd b2 3rd b3 8 三次多項式 和 一次多項式 模型的比較見下表，差值從 ，或 12%到 %，有五個濃度的差值超過實驗室設(shè)定的誤差水平（ ）。 表：回歸分析的結(jié)果 階別 回歸系數(shù) 結(jié)果 系統(tǒng)誤差 t檢驗 自由度 回歸 標(biāo)準(zhǔn) 誤 一 次 b0 一次 b1 8 二 次 b0 二次 b1 二次 b2 (*) 7 三次 b0 三次 b1 三次 b2 三次 b3 6 從 一次多項式 和 二次多項式 模型的對比分析結(jié)果來看，在低和中濃度處有較大的差別，而在高濃度水平處有較好的一致性。 自由度 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 26 附錄 C：舉例 例 1 IgM 在實驗室內(nèi)準(zhǔn)備五個等距濃度的標(biāo)本測定 IgM，每標(biāo)本重復(fù)測定兩次。下列文件可以幫助用戶碰到一些難題不能解決時進(jìn)行參考： 1) 技術(shù) 性 錯誤如干擾（ EP7臨床化學(xué)的干擾試驗） 2) 試驗結(jié)果的攜帶污染與漂移，及不精密度與偏倚的初步評價（ EP10定量臨床化學(xué)方法初步評價） 3) 分析 不精密度（ EP5臨床化學(xué)設(shè)備的精密度評價） 23 4) 偏倚（ EP9用病人標(biāo)本進(jìn)行方法比較與偏倚估計） 如果出現(xiàn)過度意外的誤差，應(yīng)進(jìn)行評價，以決定該方法或儀器是否可用。單純的目視圖表不足以建立或驗證線性。如果不同濃度樣本間的 SDr大致相等，則不同濃度樣本間不精密度較恒 定，可用 SDr表示。如果沒有非線性系數(shù) b2和b3（ p），則認(rèn)為存在線性關(guān)系，不精密度高時，則分析完成。這種方法有兩部分：第一步判斷用非線性多項式擬合數(shù)據(jù)是否比線 性好；第二步是當(dāng)非線性多項式擬合數(shù)據(jù)點(diǎn)比線性好時，判斷最適 17 非線性模型與線性擬合之間的差值是否小于預(yù)先設(shè)定的該方法的允許偏差。 4) 觀察每個濃度水平的測量值之間差值。 樣本測量時要隨機(jī)分布，在一個分析批內(nèi)或連續(xù)分析批中。下面為等間距分配各管濃度。表 1為一些分析物的建議原料，儀器或試 劑廠家的建議也可能有助于確定合適的材料。如果含分析物的濃溶液加入病人標(biāo)本中時，加入量盡可能少（原則上少于總體積的 10%），并記錄溶劑。 如果用到商品化的體外診斷試劑，需將廠家附上。這種方法由兩部分組成，第一部分是檢查非線性模型是否比線性模型更適合于數(shù)據(jù)組；第二部分是評價最適非線性模型與線性模型的差值（每個點(diǎn)）是否小于該方法所允許的偏差。線性回歸其 因變量 與各 回歸參數(shù) 之間為 線性關(guān)系 。 Tholen提出一種圖解連同回歸線性失擬誤差與目標(biāo)百分比對比的評價方法，對連續(xù)線性片斷進(jìn)行簡單的斜率分析。本指南強(qiáng)調(diào)任何用戶有必要確定自己對線性程度的要求，或非線性的允許誤差范圍。 Measurement procedure(測量程序 )代替 Analytical method(分析方法 )，指一系列用給定的方法完成的特殊操作。也可能（概率很小）由于樣本方差很大（重復(fù)性差）而導(dǎo)致臨床上很重要的非線性得出相反結(jié)果。 自愿參與 強(qiáng)烈希望各專業(yè)的實驗室科學(xué)家能自愿參加 NCCLS項目。 “標(biāo)準(zhǔn) ”一詞，除了有特定含義外，還常用來指有關(guān)的 NCCLS文件。 NCCLS創(chuàng)建于 1968年并獲得美國國家標(biāo)準(zhǔn)研究院的認(rèn)可。它應(yīng)該接受評審以保證其有效性。 曾有爭論，對于競爭免疫法這類測量方法來說，線性不是必須的，因為測量方法的響應(yīng)物與濃度之間本來就 呈非線性關(guān)系。精密度好時有利于判斷線性關(guān)系，精密度差時則不利于確定線性關(guān)系。標(biāo)準(zhǔn)防護(hù)是一種新的防護(hù)指南，主要強(qiáng)調(diào)全身防護(hù)和與身體隔離的原則。 EP6A僅僅是指導(dǎo)用戶的一系列方法評價文件中的一種，請參照最近發(fā)布的 EP21文件 臨床實驗方法的總分析誤差。大多用濃度或活性表示。 多項式回 歸 （ Polynomial regression） ： 不同 階 別的多次最小二乘法回歸 Y=a+b1X 一次多項式或者擬合直線 Y=a+b1X+b2X2 二次多項式 Y= a+b1X+b2X2+b3X3 三次多項式 重復(fù)性 （ Repeatability） ： (測量儀器 )在相同的測量條件下，對同一樣品多次測量，測量儀器重復(fù)給出十分相近示值的能力 ， 重復(fù)性可以用示值的離散特性定量表示。 4． 1 標(biāo)本要求 線性評價實驗要求有足夠量的標(biāo)本，要能滿足五個或更多濃度標(biāo)本的稀釋和測量。 4． 3 可接受基質(zhì)體系 如果多種基質(zhì)標(biāo)本類型（如尿液、血清、腦脊液、全血等）在實驗中用到，則應(yīng)評價每種基質(zhì)類型。 商業(yè)質(zhì)控物 /定標(biāo)物 /線性物質(zhì) 如果用到這些物質(zhì)，同病人標(biāo)本一樣進(jìn)行分析，可以用高值和低值標(biāo)本進(jìn)行混合得到中間濃度。 當(dāng)建立方法的線性范圍時，需 7到 11個樣本，且 20%到 30%的樣本的濃度范圍超出預(yù)期的測量范圍，在可接受的線性響應(yīng)范圍內(nèi)，試圖舍去非線性點(diǎn)，可得到較寬的線性范圍。 如當(dāng)檢測系統(tǒng)每測試需要反應(yīng)體積為 ，每濃度水平測量 2次，則至少需 考慮反應(yīng)死體積。 4． 9 臨床上幾個重要的濃度水平 評價線性范圍時，要注意幾個重要的濃度：最低分析濃度或線性范圍的下限，不同的醫(yī)學(xué)決定水平值，最高分析濃度或線性范圍的上限。查找問題原因，必要時請求生產(chǎn)廠家協(xié)助。 然后做一 次、二次和三次 多項式回歸分析，可以借助多種商業(yè)統(tǒng)計軟件完成。 每一個濃度處的線性偏差（ DL）計算如下： 18 DLi=p(Xi)—（ b0+b1Xi） X的取值范圍從 X1到 Xs， p(Xi)為最適多項式回歸模型在 Xi處的值，因而 DLi為在每個不同濃度處 二次多項式 模型與 一次多項式 （線性）模型的差值，或 三次多項式 模型與 一次多項式 （線性）模型的差值，也即非線性模型與線性模型在每個濃度點(diǎn)的差值。 如果重復(fù)測量次數(shù)超過 2次，則隨機(jī)誤差要用方差分析來計算。不論線性是如何確定的，都可以用本指南進(jìn)行 確認(rèn) 。在括號內(nèi)填寫適當(dāng)?shù)脑~語或數(shù)值。重復(fù)性差異檢測如下： 標(biāo)本號 均值 差值 Diff Diff 2/2 % Diff %Diff 2/2 1 .045 2 3 4 5 五個標(biāo)本的差值的平方和（ D2/2）為 ，平均值為 ，平方根為 ，也就是五個標(biāo)本的重復(fù)性（ SD表示）。 圖 C1： IgM線性實驗 —15稀釋 度 圖 C2： IgM線性評價差值點(diǎn)圖 —15稀釋 29 例 2： Ca 假定實驗室設(shè)定 Ca的重復(fù)性和非線性誤差均為 ，它不是百分比形式，因為大多認(rèn)為 Ca的偏差不是成比例變化的，是一個恒量。 說明： 本例中，去掉一個數(shù)據(jù)點(diǎn)重新進(jìn)行統(tǒng)計分析，雖然顯示的是一個非線性反應(yīng)曲線，但差值比實驗室規(guī)定值要小，因而通過縮小范圍后，認(rèn)為該方法是呈線性。 標(biāo)本 測量值 1 測量值 2 均值 1 2 3 4 5 6 從表中可以看出，沒有明顯的離群值。在 EP15文件中，是用一個濃度水平評價精密度，而在本指南中，用五個不同濃度水平標(biāo)本的 SD來評價。例如，如果每次檢測需要 ， 5個濃度水平各測 2次 , 那么需要 5ml標(biāo)本， e或者至少高濃度和低濃度標(biāo)本各 需要 5ml。 6． 4 其它誤差影響 不合格的實驗結(jié)果可能來自于程序錯誤，儀器、試劑或定標(biāo)問題，環(huán)境因素，方法錯誤，或基質(zhì)（包括干擾）。 有時不精密度在不同 濃度時是明顯不同的，這是最好選用加權(quán)回歸線性模型，它是采用每個濃度重復(fù)測定方差的倒數(shù)。 （ 2）觀察響應(yīng)（測量）濃度與預(yù)期值散點(diǎn) 圖，判斷非線性是在分析濃度范圍的兩端或是中間。 一次多項式 模型中的 b0和 b1兩個系數(shù)不用分析，因為它們不反映非線性。離群值指某結(jié)果不適用其它數(shù)據(jù)所擬合的模型，可以通過統(tǒng)計學(xué)方法計算，但大多數(shù)情況下，目視檢查檢測值與預(yù)期值就可以發(fā)現(xiàn)離群值。在圖上，每一個Ｙ值有一個對應(yīng)的Ｘ值，將每個濃度水平重復(fù)測定的均值點(diǎn)在圖上，手工方法或用計算機(jī)將這些點(diǎn)連接起來，觀察每個點(diǎn)與直線的大致偏差，這樣容易發(fā)現(xiàn)異常點(diǎn)，明顯的抄寫錯誤，或儀器故障等。如需配制 110單位的上述分析物溶液，則可以用 第 1管溶液和 5管溶液混勻，它的編號數(shù)為 。 以下以五個濃度等間距的配制（參考附錄 A： 5到 11個等間距濃度的分配方法）舉例。 水溶液 當(dāng)用水溶液時，對分析方法的響應(yīng)曲線的影響未測試，基質(zhì)效應(yīng)可能影響到響應(yīng)曲線和結(jié)果的解釋。對于有些分析系統(tǒng)來說，允許用病人的標(biāo)本稀釋法來評價線性，可用經(jīng)認(rèn)可的稀釋液來對超過分析范圍的病人標(biāo)本進(jìn)行稀釋，這時需提供材料證明該稀釋液是可用于該分析系統(tǒng)的。 本指南推薦用高值和低值濃度的樣本按比例精確配成等間距的不同濃度樣本，但等間距不是本方法所必需的。 2． 4 實驗方法的概述 本指南所用的多項式回歸最初由 Kroll等提出，有嚴(yán)密的統(tǒng)計學(xué)規(guī)律，且容易用表格來完成。 最小二 乘法 （ Least square regression） ： 一種統(tǒng)計學(xué)方法 ， 由所有數(shù)據(jù)點(diǎn)得到的直線或曲線上每個點(diǎn)到 X軸 （ 即與 Y軸平行 ） 的垂直距離的平方和達(dá)到最小。這種方法的優(yōu)點(diǎn)是非?？煽?，且基于嚴(yán)格的科學(xué)原理。精密 度很差時，會妨礙線性關(guān)系的評價，因而重復(fù)性的檢查也包括在內(nèi)。 NCCLS認(rèn)識到醫(yī)學(xué)術(shù)語在美國、歐洲和其他地方表達(dá)不一致，這些不同也表現(xiàn)在 7 NCCLS、國際標(biāo)準(zhǔn)化組織（ IS