【正文】 O）和歐洲標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)（ CEN）的文件中。 第一版 EP6P僅用 線性失擬誤差 檢驗(yàn)（ LoF檢驗(yàn)）來判斷線性關(guān)系。 評 論 實(shí)驗(yàn)室使用者 的評論對一致化過程是很重要的。 標(biāo)準(zhǔn) ： 通過一致化過程形成的文件，并對材料、方法、或?qū)嵺`以不能修改方式明確規(guī)定其特定的基本要求。 出版物 NCCLS文件以標(biāo)準(zhǔn)、指南、委員會(huì)報(bào)告出版。因而，遵守這些自愿 一致性 標(biāo)準(zhǔn)（或指南）不能減輕使用者對遵守應(yīng)用規(guī)定的責(zé)任。 本版本說明： 與以前版本相比 EP6A最大的改變是統(tǒng)計(jì)學(xué)方法的改進(jìn)。協(xié)調(diào)一致是一個(gè)在認(rèn)知、理解、解釋差異各方面逐步達(dá)到全球一致的過程。 本指南主要是評價(jià)線性關(guān)系，盡可能不受精密度和準(zhǔn)確度的影響。 Kroll和 Emancipator提出一種基于直線回歸方程與多項(xiàng)式方程比較的方法，用殘差（即每一個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)到回歸直線的差值）來定義線性。如 y截距表示當(dāng) x為 0時(shí)的 y值大小。準(zhǔn)確度一般用測量偏倚（數(shù)字）來表示，準(zhǔn)確度與偏倚呈相反關(guān)系。 五個(gè)測量點(diǎn)是多元回歸方法評價(jià)線性范圍時(shí)的最低要求，更多的測量點(diǎn)能更精確的評價(jià)線性，得到的線性范圍更寬。 用推薦的稀釋液稀釋病人樣本 用于稀釋病人高濃度樣本的液體對測量結(jié)果是有影響的，只有廠家推薦的或?qū)嶒?yàn)室已證實(shí)可用的稀釋液才能用于稀釋樣本。這些稀釋液要用最小量，并可以查證其可用， 同時(shí) 要保證質(zhì)控物完全溶解。也可以先用高值和低值濃度配制成一個(gè)中間濃度管，然后用低值和中間濃度、高值和中間濃度分配其它管的濃度。 如果需用到其它濃度，要知道相互的間隔關(guān)系，且相互間隔適合在座標(biāo)圖表上表示。將測量數(shù)據(jù)作為 Y值，計(jì)算濃度或相對濃度作為 X值進(jìn)行作圖。深入的討論參見 ASTME 17894。計(jì)算每個(gè)非線性系數(shù)斜率的標(biāo)準(zhǔn)差 SEi（可由回歸程序算出），然后進(jìn)行 t檢驗(yàn)，判斷非線性系數(shù)是否有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，即與 0之間有無差異。如果任一個(gè)點(diǎn) DLi超過設(shè)定目標(biāo)，則代表該點(diǎn)可能是非線性，此時(shí) 按以下 兩種方法進(jìn)行處理： （ 1）試圖找到非線性的原因（樣本準(zhǔn)備，干擾物質(zhì)，儀器定標(biāo)等）并解決。如果方法 性能 與以前評估重復(fù)性時(shí)一致，重復(fù)測量次數(shù)增多一倍（ 4次），這樣可以將均值的標(biāo)準(zhǔn)差降低約 40%。 當(dāng)測量樣本的濃度未知時(shí)，線性目標(biāo)應(yīng)用相對值表示。 然而，線性范圍可通過最高和最低呈線性的測量濃度確定，在下面的稀釋列表中，起始為達(dá)到或 剛 o超過上限范圍的高濃度標(biāo)本或低濃度標(biāo)本，并且其標(biāo)本量足夠多，以至能用于各點(diǎn)重復(fù)測定。 更特異的 隨機(jī)誤差的 評價(jià)方法參見 NCCLS的 EP5文件 —臨床化學(xué)方法精密度評價(jià)操作，或 EP15文件 —精密度和準(zhǔn)確度的 核實(shí) 。這是一個(gè)顯著的高級別的模型，線性和非線性的差值用來比較非線性誤差的大小。 圖 C C4顯示 1級和 3級模型及它們的差值，有 5個(gè)差值超過實(shí)驗(yàn)室規(guī)定的 。同例 1一樣，實(shí)驗(yàn)室準(zhǔn)備樣本和對 6個(gè)不同濃度水平的標(biāo)本進(jìn)行重復(fù)測定。 由于高值標(biāo)本差異較大， 五個(gè)標(biāo)本重復(fù)測定的差值用百分比來評價(jià)更好，上表中后兩列就是用百分比進(jìn)行計(jì)算重復(fù)測定差值，所有標(biāo)本的 SD為 %。 對于（分析物）來說，用（測量方法），通過 核實(shí) 在（確定目標(biāo)或最大允許偏差范圍）內(nèi)，線性范圍為從（下限）到（上限）。 允許誤差與目標(biāo) 設(shè)定 實(shí)驗(yàn)室應(yīng) 該確定自己的所有分析物的分析誤差的目標(biāo)（參見當(dāng)前 NCCLS文件 EP21臨床實(shí)驗(yàn)方法的總誤差）。公式如下： R：為重復(fù)測定的次數(shù)（ j=1,2,3… R） L：樣本數(shù) ri：樣本 i處的平均值。 DLi應(yīng)與預(yù)先設(shè)定目標(biāo)的單位一致， 以便進(jìn)行比較。 階別 回歸方程 回歸 自由度（ Rdf） 一 次 Y=b0+b1X 2 二 次 Y= b0+b1X+b2X2 3 三 次 Y= b0+b1X+b2X2+b3X3 4 一 次多項(xiàng)式 模型為直線，這是判斷某種方法是否為線性的最適方程。 7) 目視檢查 XY散點(diǎn)圖對于后續(xù)的線性評估是非常重要的，它可以很容易的發(fā)現(xiàn)非線性，或測量范圍是否太窄或太寬，也可以為后 續(xù)的統(tǒng)計(jì)分析選擇更合適的統(tǒng)計(jì)分析方法。 5．線性范圍的核實(shí) ——數(shù)據(jù)評估 初步數(shù)據(jù)檢查 檢測結(jié)果首先要綜合評價(jià)其可接受性和有效性。高濃度管濃度為 120單位，低濃度管濃度為 40單位，注意測量前不需知道實(shí)際 15 濃度。 4． 7 樣本準(zhǔn)備和濃度計(jì)算 如果高值和低值濃度是未知的，每一管必須編號(hào)來確定它的相對濃度。要注意分析物要保持正常生理狀態(tài)下的形式（如蛋白結(jié)合或代謝產(chǎn)物狀態(tài)） 。請參考最新版本的 NCCLS的 EP14文件 —基質(zhì)效應(yīng)的評價(jià)。當(dāng)驗(yàn)證線性范圍時(shí)，需要 5到 7個(gè)能覆蓋整個(gè)線性范圍（廠家提供）的不同濃度的標(biāo)本，每個(gè)濃度水平測量兩次。 必須在相 同的測量程序、相同的儀器設(shè)備、相同的位置、在較短的時(shí)間內(nèi)重復(fù)等。 偏倚（ Bias） ：測量值與公認(rèn)參考值之間的差異。 本文件適用范圍很寬，當(dāng)需建立一種方法的線性范圍時(shí)，我們需要測試一個(gè)很寬的分析濃度范圍，然后逐漸縮小直到有可接受的線性范 圍。標(biāo)準(zhǔn)防護(hù)是防止所有的病原體，比僅防止血源性病原體更廣泛。 這種方法可以： 1）在每個(gè)水平上判斷非線性度 ， 2）在評價(jià)非線性時(shí)可以控制不可接受的精密度， 3）提供一種可測試的統(tǒng)計(jì)模型 ， 4）在很多軟件上可以進(jìn)行編程。然而，響應(yīng)物的劑量效應(yīng)曲線可以通過合適的轉(zhuǎn)換變成數(shù)學(xué)上的線性關(guān)系，而且對于一種分析方法來說，只有兩點(diǎn)之間呈線性關(guān)系時(shí)，才能進(jìn)行計(jì)算結(jié)果。 批準(zhǔn) ： 批準(zhǔn)的標(biāo)準(zhǔn)或指南已在臨床檢驗(yàn)界得到一致同意。 NCCLS所依據(jù)的原則是，對病人高質(zhì)量服務(wù)所需的臨床實(shí)驗(yàn)室檢測，自愿一致的標(biāo)準(zhǔn)是必不可少的。 報(bào)告 ： 沒有經(jīng)過一致化審定過程的文件，由理事會(huì)頒布。 評 論 寄 往 NCCLS 行 政 辦 公 室 ： 940 West Valley Road, Suite 1400,Wayne,Pennsylvania19087,USA。這種方法的缺點(diǎn)是精密度好的檢測系統(tǒng)有很小的樣本方差，在 LOF檢驗(yàn)的比率中，均值方差很小時(shí)，得出在統(tǒng)計(jì)學(xué)上差異顯著，即呈非線性。 Repeatability(重復(fù)性 )代替批內(nèi)精密度 ， 可以恰當(dāng)?shù)赜脕砻枋鲈谝欢l件下連續(xù)測量同份分析物的接近程度。首先要確定一種方法的非線性濃度范圍，及在每個(gè)濃度水平上非線性的程度。 Krouwer和 Schlain提出一種通用的方法，即 LPO（ last point off the line），需要多次計(jì)算最小二乘法方程。 線性回歸 （ Linear regression） ： 待測變量（非獨(dú)立）的浮動(dòng)經(jīng)常可以（部分地）歸因于其他變量（獨(dú)立），回歸的方法量化了獨(dú)立變量和非獨(dú)立變量之間的關(guān)系。 本質(zhì)上，多項(xiàng)式回歸是設(shè)計(jì)用來評價(jià)曲線的反應(yīng)模型，因而它適合于評價(jià)非線性。5到 11個(gè)濃度水平的等間距標(biāo)本的配制方法見附錄 A。當(dāng)存在干擾物時(shí)，在報(bào)告中需提及其來源、純度、預(yù)期影響等。 制成分析樣本的添加物的選擇 選擇添加物時(shí)要仔細(xì)考慮，使用其它物種來源的原料也會(huì)引起一些影響。注意在操作過程中，要有最準(zhǔn)確和精確 的加樣技術(shù)。 建立 線性 方法： 9到 11個(gè)樣本，每個(gè)樣本重復(fù)測定 2到 4次； 驗(yàn)證 聲明范圍或改良方法： 7到 9個(gè)樣本，每個(gè)樣本重復(fù)測定 2到 3次； 在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)證實(shí)線性范圍有效性： 5到 7個(gè) 樣本，每個(gè)樣本重復(fù)測定 2次。數(shù)據(jù)中可以發(fā)現(xiàn)操作中存在的真實(shí)問題。事實(shí)上，多項(xiàng)式回歸是用來評價(jià)非線性的，這也是我們選擇多項(xiàng)式線性評價(jià)的原因。查 t值表（附錄 B)（雙側(cè) α=）。這是檢測方法的重復(fù)性，用 SDr（或 CVr相對誤差）來表示。簡單的圖表就可以顯示結(jié)果是否遵循線性及非線性明顯的區(qū)域，圖表也有助于全面了解數(shù)據(jù)，可 以排除線性，但不能接受線性，也不能判斷每個(gè)濃度處的非線性度。本委員會(huì)建議用戶與廠家聯(lián)系，有助于解決這些問題。例如，當(dāng)雙側(cè) 檢驗(yàn)可信度為 95%，自由度為 10時(shí)， t值為 ，那么計(jì)算得到的統(tǒng)計(jì)值大于 ，在 a= 平時(shí)具有顯著性意義。注意，我們主要評價(jià)非線性模型的系數(shù)，而不關(guān)注截距和線性模型。 三次多項(xiàng)式 模型還有較低的標(biāo)準(zhǔn)差，也提示較 二次多項(xiàng)式 和 一次多項(xiàng)式 模型有較好的適合性。 測量均值 預(yù)期值 1st 預(yù)期值 3rd 差值 % 差值 我們除去最后一個(gè)點(diǎn)，如果剩下的五個(gè)點(diǎn)呈可接受的線性關(guān)系，則該方法的線性范圍為 到 15，也適合實(shí)驗(yàn)室的需求，修正后的分析見下表。高中低濃度水平處差值的百分?jǐn)?shù)大小超過了實(shí)驗(yàn)室設(shè)定的誤差范圍，因而認(rèn)為本方法不具有線性。假定實(shí)驗(yàn)室設(shè)定的重復(fù)性和線性的允許誤差范圍分別為 2%和 5%。測量誤差是由不精密度、準(zhǔn)確度、攜帶污染、漂移所引起，能明顯影響線性范圍，也可能錯(cuò)誤地解釋結(jié)果。 線性度最好用差值點(diǎn)圖來表示，即用 一次多項(xiàng)式 與 三次多項(xiàng)式 模型的差值作為Ｙ值，每個(gè)濃度值作為Ｘ值，進(jìn)行作圖。如果在高濃度處的差值較大，則不精密度大小可能與濃度值成比例變化，此時(shí)應(yīng)用 CVr表達(dá)。如果 二次多項(xiàng)式 模型的非線性系數(shù) b2，或 三次多項(xiàng)式 模型的 b2或 b3中任一個(gè)與 0比較，有顯著差異（ p），則該 組 數(shù)據(jù)存在非線性。 多項(xiàng)式回歸 評估線性時(shí)至少要求五個(gè)不同濃度水平樣本，每個(gè)水平重復(fù)測定兩次。在線性模型中，各段的斜率大致相等，升高或降低趨勢提示非線性。數(shù)據(jù)的刪除按 。 （ 2）低濃度（理想狀態(tài)為接近或位于線性范圍下限）管編號(hào)為 1，高濃度管編號(hào)為 5； （ 3）中間濃度管由高濃度和低濃度管按恒定的間距配成不同的濃度，一種簡便的配制中間濃度的方法如下： 第 2管為 3份低濃度和 1份高濃度標(biāo)本混合而成； 第 3管為 2份低濃度和 2份高濃度標(biāo)本混合而成； 第 4管為 1份的低濃度和 3份的高濃度標(biāo)本混合而成。 表 1 樣本添加原料 分析物 原 料 ALT 純酶 Alb 白蛋白干粉，人 V片斷 酒精 無水乙醇 ALP 如果沒有高濃度的病人樣本，用純酶 AST 純酶 淀粉酶 唾液或胰腺提取物 BIL 如果沒有高濃度的病人樣本時(shí)，用純膽紅素，或 低稀釋的 高值質(zhì)控品或標(biāo)準(zhǔn)品 膽固醇 純膽固醇或 質(zhì)控品 CO2 碳酸鈉或碳酸氫鈉 CK 純酶 Cr 無水標(biāo)準(zhǔn)品或高值病人樣本 γGT 純酶 Hb 洗滌后的人類紅細(xì)胞溶血液 Hct 微量高速離心 后的 紅細(xì)