酶免疫分析技術(shù)ppt課件-在線瀏覽
2025-03-09 00:30本頁面
【正文】 第二節(jié) 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) 一、基本原理 將已知抗原或抗體吸附在固相載體表面，使抗原抗體反應(yīng)在固相表面進(jìn)行，用洗滌的方法將固相上的抗原抗體復(fù)合物與液相中的游離成分分開。 第七章 酶免疫分析技術(shù) 二、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的類型 （一）雙抗體夾心法檢測抗原 將己知抗體包被固相載體，待檢標(biāo)本中的相應(yīng)抗原與固相表面的抗體結(jié)合，洗滌去除未結(jié)合成分。 第七章 酶免疫分析技術(shù) E 固相抗體 標(biāo)本 （ 含抗原 ） 酶標(biāo)抗體 E E 底物 雙抗體夾心法檢測抗原 第七章 酶免疫分析技術(shù) （ 1）將特異性抗體包被于固相反應(yīng)板上，洗滌。 （ 3）加酶標(biāo)抗體，洗滌。 2．技術(shù)要點(diǎn) 第七章 酶免疫分析技術(shù) （ +） （ ） E E E E E E E E E 雙抗體夾心法測抗原 第七章 酶免疫分析技術(shù) 雙抗體夾心法中，應(yīng)注意類風(fēng)濕因子 (RF)的干擾。使用抗體的 F(ab’)2或 Fab片段作為酶標(biāo)抗體可消除 RF的干擾。測定時將待檢標(biāo)本和酶標(biāo)抗體同時加入進(jìn)行反應(yīng)，兩種抗體互不干擾，經(jīng)一次溫育和洗滌后，即可加入底物進(jìn)行顯色測定。 鉤狀效應(yīng)嚴(yán)重時，可出現(xiàn)假陰性結(jié)果，必要時可將待檢標(biāo)本適當(dāng)稀釋后重新測定。免疫反應(yīng)后，結(jié)合于固相的酶標(biāo)抗原量與標(biāo)本中待檢抗原含量呈 反比 。 1．原理 第七章 酶免疫分析技術(shù) 酶標(biāo)抗原 E E E E 固相抗體 標(biāo)本 （ 含抗原 ） 底物 E 競爭法檢測抗原 第七章 酶免疫分析技術(shù) （ 1）將特異性抗體包被于固相反應(yīng)板上，洗滌。對照管中只加酶標(biāo)抗原，溫育，洗滌。對照管中顏色深，待測管顏色越淡，表示標(biāo)本中抗原含量越多。 1．原理 第七章 酶免疫分析技術(shù) 固相抗原 標(biāo)本 （ 含抗體 ） 酶標(biāo)二抗 底物 E E E 間接法檢測抗體 第七章 酶免疫分析技術(shù) （ 1）將特異性抗原包被于固相反應(yīng)板上，洗滌。 （ 3）加酶標(biāo)二抗，洗滌。 2．技術(shù)要點(diǎn) 第七章 酶免疫分析技術(shù) （ +） E E E E E E （ ） E E E 間接法測抗體 第七章 酶免疫分析技術(shù) （五） 雙抗原夾心法檢測抗體 將已知抗原包被固相載體，待檢標(biāo)本中的相應(yīng)抗體可分別與固相表面的抗原、酶標(biāo)抗原結(jié)合，形成固相抗原 抗體 酶標(biāo)抗原復(fù)合物，根據(jù)加底物后的顯色程度確定待檢抗體含量。 1．原理 2．技術(shù)要點(diǎn) 第七章 酶免疫分析技術(shù) E 固相抗體 標(biāo)本（含抗體） 酶標(biāo)抗原 底物 E E 雙抗原夾心法檢測抗體 第七章 酶免疫分析技術(shù) （ +） （ ） E E E E E E E E E 雙抗原夾心法測抗體 第七章 酶免疫分析技術(shù) （六）競爭法檢測抗體 同競爭法結(jié)合抗原。 1．原理 第七章 酶免疫分析技術(shù) （ 1）競爭法檢測 HBcAb： ①將 HBcAg包被于固相反應(yīng)板上，洗滌。 ③加入底物，溫育，形成有色產(chǎn)物，用酶標(biāo)比色儀測定結(jié)果。 2．技術(shù)要點(diǎn) 第七章 酶免疫分析技術(shù) 固相抗原 標(biāo)本 （ 含抗體 ） 底物 酶標(biāo)抗體 E E E E E 競爭法檢測 HBcAb 第七章 酶免疫分析技術(shù) （ +） E E （ ） E E E E E E E 競爭法檢測 HBcAb 第七章 酶免疫分析技術(shù) （ 2）競爭法檢測 HBeAb： ①將 HBeAb包被于固相反應(yīng)板上，洗滌。 ③加入酶標(biāo) HBeAb，溫育，洗滌。顯色深淺與待檢標(biāo)本中相應(yīng)抗體含量成反比。加入特異抗原與固相抗體捕獲的 IgM類抗體結(jié)合，再加入抗原特異的酶標(biāo)抗體，形成固相抗人IgMIgM抗原 酶標(biāo)抗體復(fù)合物。 1．原理 第七章 酶免疫分析技術(shù) （ 1）將抗人 IgMμ鏈抗體包被于固相反應(yīng)板上， 洗滌。 （ 3）加入特異性抗原，溫育，洗滌。 （ 5）加入底物，溫育一定時間，顯色，用酶標(biāo) 比色儀測定結(jié)果。 RF（ IgM類）能與固相抗人 μ鏈抗體結(jié)合，并可與隨后加入的酶標(biāo)抗體（動物 IgG）反應(yīng)，從而導(dǎo)致 假陽性反應(yīng) 。因此，使用本法測 IgM，必須對臨床樣本進(jìn)行適當(dāng)稀釋。 （ 2）將酶標(biāo)抗人 IgG用稀釋液作一系列稀釋后分別加入已包被的孔中，溫育，洗滌。加酸終止反應(yīng)后，讀取吸光度（ A）值在 ，作為酶標(biāo)抗體的工作濃度。 （ 2）將強(qiáng)陽性參考血清、弱陽性參考血清和陰性參考血清用稀釋液作 1:100稀釋，加樣，溫育，洗滌。 2．棋盤滴定法選擇包被抗原工作濃度 第七章 酶免疫分析技術(shù) （ 4）加底物顯色，加酸終止反應(yīng)后讀取 A值。 第七章 酶免疫分析技術(shù) 參考
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