酶免疫分析技術(shù)ppt課件-資料下載頁(yè)
2025-01-20 00:30本頁(yè)面
【正文】 成不溶性顯色物的酶反應(yīng)底物，使區(qū)帶染色。陽(yáng)性反應(yīng)的條帶染色清晰，根據(jù) SDSPAGE時(shí)加入的分子量標(biāo)準(zhǔn)，確定各組分的分子量。 第七章 酶免疫分析技術(shù) 免疫印跡試驗(yàn) 第七章 酶免疫分析技術(shù) 免疫印跡試驗(yàn) 第七章 酶免疫分析技術(shù) 基本原理與免疫印跡試驗(yàn)相似，不同之處是特異性抗原不通過(guò)電泳分離轉(zhuǎn)印，而是 直接分條加在固相膜上。 RIBA已用于血清抗 HCV抗體的測(cè)定和分析。 第七章 酶免疫分析技術(shù) 二、生物素 親和素標(biāo)記技術(shù)在 ELISA中的應(yīng)用 （一）生物素和親和素的特點(diǎn) 結(jié)構(gòu)中的咪唑酮環(huán)是與親和素結(jié)合的主要部位，四氫噻吩環(huán)戊酸側(cè)鏈末端羧基是與抗體和酶等蛋白質(zhì)結(jié)合的主要部位。 1．生物素 (biotin， B) 第七章 酶免疫分析技術(shù) 利用生物素的羧基加以化學(xué)修飾后可制成各種活性基團(tuán)的衍生物 (活化生物素 )，以適合與各種生物大分子結(jié)合的需要。 第七章 酶免疫分析技術(shù) 富含色氨酸，借助色氨酸殘基與生物素的咪唑酮環(huán)結(jié)合。親和素與生物素之間的親和力極強(qiáng)，比抗原與抗體的親和力至少高 1萬(wàn)倍，且具有高度特異性和穩(wěn)定性。 2．親和素 (avidin， A) 第七章 酶免疫分析技術(shù) 酸性氨基酸含量較多，其等電點(diǎn)為 pH值 ，而且不帶任何糖基，在檢測(cè)中出現(xiàn)的非特異性結(jié)合明顯少于卵白親和素，正逐漸取代卵白親和素。 3．鏈霉親和素 (streptavidin， SA) 第七章 酶免疫分析技術(shù) 生物素 親和素技術(shù)在 ELISA中的應(yīng)用類(lèi)型 反應(yīng)層次 直接法 間接法 BAELISA Ag（ AbB） A＊ Ag（ AbB） AB＊ Ag（ AbB） AB＊ C AgAb1（ Ab2B） A＊ AgAb1（ Ab2B） AB＊ AgAb1（ Ab2B） AB＊ C BABELISA ABCELISA A＊為標(biāo)記親和素 B＊為標(biāo)記生物素 第七章 酶免疫分析技術(shù) 基本原理： 直接 BAELISA是以酶標(biāo)親合素直接連接生物素化抗體。間接 BAELISA采用生物素化的二抗，可進(jìn)一步提高檢測(cè)靈敏度。 BAELISA中親和素與酶的共價(jià)結(jié)合對(duì)酶的活性有一定程度的損傷。 第七章 酶免疫分析技術(shù) BAELISA檢測(cè)抗原 第七章 酶免疫分析技術(shù) BAELISA檢測(cè)抗體 第七章 酶免疫分析技術(shù) 基本原理： 直接 BABELISA是以游離的親合素作為橋聯(lián)劑，利用親合素的多價(jià)性，將生物素化抗體和酶標(biāo)生物素連接起來(lái)，以檢測(cè)反應(yīng)分子。間接 BABELISA是在加入抗體后，再用生物素化的二抗，使反應(yīng)增加一個(gè)層次，從而使靈敏度進(jìn)一步提高。 2． BABELISA 第七章 酶免疫分析技術(shù) BABELISA 第七章 酶免疫分析技術(shù) 基本原理： 親合素與酶標(biāo)生物素結(jié)合形成親合素 生物素 過(guò)氧化物酶復(fù)合物 (ABC)。當(dāng)其與生物素化抗體 (直接 ABCELISA)或生物素化二抗 (間接ABCELISA)相遇時(shí)， ABC中未飽和的親合素結(jié)合部位可與抗體上的生物素結(jié)合，使抗原抗體反應(yīng)體系與 ABC體系連成一體。通過(guò)依次的相互連接作用，形成一個(gè)具有多級(jí)放大作用的晶格樣網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，使檢測(cè)敏感性明顯提高。 3． ABCELISA 第七章 酶免疫分析技術(shù) 返回章目錄 ABCELISA 第七章 酶免疫分析技術(shù) 小 結(jié) 酶免疫分析技術(shù) 是以酶標(biāo)記的抗原或抗體作為主要試劑的免疫檢測(cè)方法，在抗原與抗體的特異性反應(yīng)完成后，通過(guò)酶對(duì)底物的催化作用提高反應(yīng)的敏感性。酶免疫分析技術(shù)可分為酶免疫組織化學(xué)技術(shù)和酶免疫測(cè)定兩大類(lèi) ,后者根據(jù)抗原抗體反應(yīng)后是否需要分離結(jié)合與游離的酶標(biāo)記物而分為均相和非均相兩種類(lèi)型。 第七章 酶免疫分析技術(shù) 最常用的技術(shù)是以聚苯乙烯等材料作為固相載體的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ ELISA） ,其原理可分為夾心法、競(jìng)爭(zhēng)法、間接法和捕獲法等。 返回章目錄 第七章 酶免疫分析技術(shù) 展 望 酶免疫技術(shù) 是三大經(jīng)典標(biāo)記免疫技術(shù)之一，是以酶標(biāo)記抗體或抗原為主要試劑的一種標(biāo)記免疫分析技術(shù)。隨著相關(guān)新技術(shù)的不斷問(wèn)世，如雜交瘤單克隆抗體、生物素一親和素放大系統(tǒng)的應(yīng)用以及與化學(xué)發(fā)光和電化學(xué)發(fā)光技術(shù)的偶聯(lián)等，明顯地提高了分析和測(cè)定方法的特異性、靈敏度及其自動(dòng)化程度，使酶免疫分析技術(shù)不斷更新，應(yīng)用范圍不斷拓寬。 第七章 酶免疫分析技術(shù) 當(dāng)前，酶免疫技術(shù)己與形式各異、各具特點(diǎn)和用途的定位、定量和超微量測(cè)定的標(biāo)記免疫技術(shù)融合發(fā)展，在醫(yī)學(xué)和生物學(xué)中有著廣泛的應(yīng)用。 返回章目錄 第七章 酶免疫分析技術(shù) THANK YOU FOR YOUR ATTENTION! 返回總目錄
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