代謝物酶法分析技術(shù)-資料下載頁(yè)
2025-01-05 23:02本頁(yè)面
【正文】 P脫氫酶＜% 葡萄糖 6磷酸脫氫酶(G6PDH) 酵母 212022 ＞ 140 己糖激酶、磷酸葡萄糖異構(gòu)酶＜ % 過(guò)氧化物酶(POD) 辣根 40200 ＞ 50 不含胺氧化酶及過(guò)氧化氫酶 全國(guó)高等醫(yī)藥院校醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專業(yè)規(guī)劃教材 臨床生物化學(xué)檢驗(yàn) （第二版） 第五章 代謝物酶法分析技術(shù) 38 名稱 來(lái)源 分子量 等電點(diǎn) 比活性 (U/mg) 雜酶占試劑酶活性的 %（允許限度） 脲酶 巨豆 483 000 5100 天冬氨酸酶 ≤%,精氨酸酶 ≤%, NH4+≤, 谷氨酸脫氫酶 (GLDH) 變形桿菌 300 000 ≥90 醇脫氫酶、乳酶脫氫酶、蘋(píng)果酸脫氫酶＜ % 乳酸脫氫酶 心 135 000 ≥500 丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶＜ %,丙酮酸激酶、醛縮酶＜% 脂蛋白脂肪酶（ LPL） 心，假單胞菌屬 47 000 177。 ＞ 100 ATP酶＜ %, NADH氧化酶＜ %,膽固醇氧化酶＜ %,過(guò)氧化氫酶＜ % 甘油激酶（ GK) 嗜熱脂肪芽胞桿菌 209 000 ≥85 NADH氧化酶＜ %,己糖激酶＜ % 全國(guó)高等醫(yī)藥院校醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專業(yè)規(guī)劃教材 臨床生物化學(xué)檢驗(yàn) （第二版） 第五章 代謝物酶法分析技術(shù) 39 名稱 來(lái)源 分子量 等電點(diǎn) 比活性 (U/mg) 雜酶占試劑酶活性的 % （允許限度） 磷酸 3甘油氧化酶 足球菌 76 000 177。 ＞ 40 乳酸氧化酶 ≤% 膽固醇酯酶(CEH) 假單胞菌 302022 ＞ 25 ATP酶＜ , NADH氧化酶＜ %,GOD＜ %,尿酸酶＜ %,過(guò)氧化氫酶＜ 1U/mg 膽固醇氧化酶(CHOD) 鏈霉菌 34000 ＞ 25 CEH＜ %,GOD＜%尿酸酶＜% 膽紅素氧化酶(BOD) 疣胞漆斑菌 52022 ＞ NADH氧化酶＜ % 尿酸酶 肝 100000 ≥15 過(guò)氧化氫酶＜ % 丙酮酸氧化酶 260000 ≥ ATP酶 ≤% ， ALT、AST≤% 全國(guó)高等醫(yī)藥院校醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專業(yè)規(guī)劃教材 臨床生物化學(xué)檢驗(yàn) （第二版） 第五章 代謝物酶法分析技術(shù) 40 ?所用試劑酶的特異性： ?怎樣消除干擾因素： ?試劑中的附加劑： ?如何提高靈敏度：①用 PMS或黃遞酶，將 NADH上的氫交給四氮唑鹽，在可見(jiàn)光監(jiān)測(cè)； ②用酶循環(huán)法； ③測(cè)定熒光法。 酶法分析的設(shè)計(jì)要求 (2) 酶法設(shè)計(jì)的共性要求 全國(guó)高等醫(yī)藥院校醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專業(yè)規(guī)劃教材 臨床生物化學(xué)檢驗(yàn) （第二版） 第五章 代謝物酶法分析技術(shù) 41 ? 酶的用量要足夠大，能使反應(yīng) 1 min～ 3 min 達(dá)到平衡，以保證較快完成測(cè)定。 ? 反應(yīng)要朝正反應(yīng)方向進(jìn)行，如果反應(yīng)的平衡常數(shù)太低，可用增加底物濃度、偶聯(lián)反應(yīng)移去生成物、改變反應(yīng)pH 等方法 ,并設(shè)標(biāo)準(zhǔn)管一起到達(dá)平衡以后測(cè)定。 ? Km 在保證測(cè)定線性的前提下要盡量小。 平衡法設(shè)計(jì)的要求 全國(guó)高等醫(yī)藥院校醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專業(yè)規(guī)劃教材 臨床生物化學(xué)檢驗(yàn) （第二版） 第五章 代謝物酶法分析技術(shù) 42 ? 所用酶的 Km 應(yīng)足夠大，以保證測(cè)定線性和較長(zhǎng)的反應(yīng)動(dòng)態(tài)期。 Km 太小，可加入競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑加大 Km。 ? 酶用量要合適，用少了可能導(dǎo)致線性期縮短，甚至一級(jí)反應(yīng)喪失。一般認(rèn)為酶用量比平衡法小。 ? 速率法酶促反應(yīng)受很多因素影響，只有很好控制反應(yīng)速度（ v）才與代測(cè)物的濃度成正比例。 速率法設(shè)計(jì)的要求 全國(guó)高等醫(yī)藥院校醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專業(yè)規(guī)劃教材 臨床生物化學(xué)檢驗(yàn) （第二版） 第五章 代謝物酶法分析技術(shù) 43 區(qū)別 速率法 平衡法 測(cè)定時(shí)間 檢測(cè)速度 檢測(cè)成本 產(chǎn)物堆積 樣品色原 測(cè)定儀器 較 短 較 快 酶用量小，成本低 影響較小 影響較小 要求電噪聲小， A讀準(zhǔn)到，溫差 % 較長(zhǎng) 較 慢 酶用量大，成本 高 影響較大 影響較大 要求不嚴(yán) 速率法和平衡法測(cè)定比較 另外，平衡法的試劑酶活性下降對(duì)測(cè)定影響遠(yuǎn)沒(méi)有速率法明顯，僅使達(dá)到平衡所需時(shí)間延長(zhǎng)，檢測(cè)范圍變窄。但對(duì)速率法是致命的，可能導(dǎo)致線性期縮短，甚至一級(jí)反應(yīng)喪失。由于以上種種原因，代謝物酶法分析大多選擇平衡法。 返回章目錄
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1