酶免疫分析技術(shù)ppt課件(編輯修改稿)
2025-02-16 00:30 本頁面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 術(shù) 固相抗原 標(biāo)本 （ 含抗體 ） 酶標(biāo)二抗 底物 E E E 間接法檢測(cè)抗體 第七章 酶免疫分析技術(shù) （ 1）將特異性抗原包被于固相反應(yīng)板上，洗滌。 （ 2）加稀釋的受檢血清，洗滌。 （ 3）加酶標(biāo)二抗，洗滌。 （ 4）加底物顯色，顏色深度代表標(biāo)本中待檢抗體 的量。 2．技術(shù)要點(diǎn) 第七章 酶免疫分析技術(shù) （ +） E E E E E E （ ） E E E 間接法測(cè)抗體 第七章 酶免疫分析技術(shù) （五） 雙抗原夾心法檢測(cè)抗體 將已知抗原包被固相載體，待檢標(biāo)本中的相應(yīng)抗體可分別與固相表面的抗原、酶標(biāo)抗原結(jié)合，形成固相抗原 抗體 酶標(biāo)抗原復(fù)合物，根據(jù)加底物后的顯色程度確定待檢抗體含量。 同雙抗體夾心法。 1．原理 2．技術(shù)要點(diǎn) 第七章 酶免疫分析技術(shù) E 固相抗體 標(biāo)本（含抗體） 酶標(biāo)抗原 底物 E E 雙抗原夾心法檢測(cè)抗體 第七章 酶免疫分析技術(shù) （ +） （ ） E E E E E E E E E 雙抗原夾心法測(cè)抗體 第七章 酶免疫分析技術(shù) （六）競(jìng)爭(zhēng)法檢測(cè)抗體 同競(jìng)爭(zhēng)法結(jié)合抗原。 HBcAb和 HBeAb的測(cè)定均采用競(jìng)爭(zhēng)法，但其測(cè)定具體模式有區(qū)別。 1．原理 第七章 酶免疫分析技術(shù) （ 1）競(jìng)爭(zhēng)法檢測(cè) HBcAb： ①將 HBcAg包被于固相反應(yīng)板上，洗滌。 ②加入待檢標(biāo)本和酶標(biāo)特異性抗體，溫育，洗滌。 ③加入底物，溫育，形成有色產(chǎn)物，用酶標(biāo)比色儀測(cè)定結(jié)果。顯色深淺與待檢標(biāo)本中相應(yīng)抗體含量成反比。 2．技術(shù)要點(diǎn) 第七章 酶免疫分析技術(shù) 固相抗原 標(biāo)本 （ 含抗體 ） 底物 酶標(biāo)抗體 E E E E E 競(jìng)爭(zhēng)法檢測(cè) HBcAb 第七章 酶免疫分析技術(shù) （ +） E E （ ） E E E E E E E 競(jìng)爭(zhēng)法檢測(cè) HBcAb 第七章 酶免疫分析技術(shù) （ 2）競(jìng)爭(zhēng)法檢測(cè) HBeAb： ①將 HBeAb包被于固相反應(yīng)板上，洗滌。 ②加入待檢標(biāo)本和 HBeAg，溫育，洗滌。 ③加入酶標(biāo) HBeAb，溫育，洗滌。 ④加入底物，溫育，形成有色產(chǎn)物，用酶標(biāo)比色儀測(cè)定結(jié)果。顯色深淺與待檢標(biāo)本中相應(yīng)抗體含量成反比。 第七章 酶免疫分析技術(shù) 固相抗體 標(biāo)本 （ 含抗體 ） 抗原 酶標(biāo)抗體 底物 E E E 競(jìng)爭(zhēng)法檢測(cè) HBeAb 第七章 酶免疫分析技術(shù) （ +） （ ） E E E E E E E E E 競(jìng)爭(zhēng)法檢測(cè) HBeAb 第七章 酶免疫分析技術(shù) （七）捕獲法檢測(cè)抗體 將抗人 IgM抗體吸附于固相載體上，待檢標(biāo)本中的 IgM類抗體多被固相抗體捕獲。加入特異抗原與固相抗體捕獲的 IgM類抗體結(jié)合，再加入抗原特異的酶標(biāo)抗體，形成固相抗人IgMIgM抗原 酶標(biāo)抗體復(fù)合物。最后根據(jù)加底物后的顯色程度確定待檢 IgM抗體的含量。 1．原理 第七章 酶免疫分析技術(shù) （ 1）將抗人 IgMμ鏈抗體包被于固相反應(yīng)板上， 洗滌。 （ 2）加人待檢標(biāo)本，溫育，洗滌。 （ 3）加入特異性抗原，溫育，洗滌。 （ 4）加入抗原特異的酶標(biāo)抗體，溫育，洗滌。 （ 5）加入底物，溫育一定時(shí)間，顯色，用酶標(biāo) 比色儀測(cè)定結(jié)果。 2．技術(shù)要點(diǎn) 第七章 酶免疫分析技術(shù) 固相抗人 lgM抗體 E 標(biāo)本（含抗體） 抗原 底物 E E 固相捕獲法檢測(cè) lgM抗體 第七章 酶免疫分析技術(shù) E E E E E E （ +） （ ） 捕獲法 第七章 酶免疫分析技術(shù) 采用固相捕獲法檢測(cè) IgM類抗體時(shí)要注意的是 RF（ IgM類）及其它非特異 IgM的干擾。 RF（ IgM類）能與固相抗人 μ鏈抗體結(jié)合，并可與隨后加入的酶標(biāo)抗體（動(dòng)物 IgG）反應(yīng)，從而導(dǎo)致 假陽性反應(yīng) 。 3．注意事項(xiàng) 第七章 酶免疫分析技術(shù) 非 特異 IgM由于其在第一步溫育中，可與特異 IgM競(jìng)爭(zhēng)與固相抗體結(jié)合，所以會(huì)影響測(cè)定的靈敏度。因此，使用本法測(cè) IgM，必須對(duì)臨床樣本進(jìn)行適當(dāng)稀釋。 第七章 酶免疫分析技術(shù) 三、最適工作濃度的選擇 （一）間接法檢測(cè)抗體 （ 1）用 100ng/ml人 IgG進(jìn)行包被，洗滌。 （ 2）將酶標(biāo)抗人 IgG用稀釋液作一系列稀釋后分別加入已包被的孔中，溫育，洗滌。 （ 3）加底物顯色。加酸終止反應(yīng)后，讀取吸光度（ A）值在 ，作為酶標(biāo)抗體的工作濃度。 1．酶標(biāo)抗抗體工作濃度的選擇 第七章 酶免疫分析技術(shù) （ 1）用包被液將抗原作一系列稀釋后包被，洗滌
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