代謝物酶法分析技術(shù)(編輯修改稿)
2025-02-01 23:02 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 酚 2， 4二氯酚 N乙基 N（ 3甲苯） N乙酰乙二胺 N乙基 N（ 2羥基 3丙磺酰）間甲苯胺 N乙基 N（ 3丙磺酰） 3， 5二甲氧基苯胺 P 2， 4DCP EMAE TOOS ESPDMA 500 510 555 555 585 過氧化物酶指示系統(tǒng) 常用的 Trinder反應(yīng)生色基團(tuán) 表內(nèi)這些酚類衍生物，有的是提高生色基團(tuán)的穩(wěn)定性和溶解度、產(chǎn)物的靈敏度和穩(wěn)定性；有些生色基團(tuán)的產(chǎn)物是蘭色醌類，能避免溶血等色素干擾。 全國高等醫(yī)藥院校醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專業(yè)規(guī)劃教材 臨床生物化學(xué)檢驗(yàn) （第二版） 第五章 代謝物酶法分析技術(shù) 22 利用底物和輔酶的反復(fù)反應(yīng)，使待測物的酶促反應(yīng)產(chǎn)物不斷擴(kuò)增，擴(kuò)增量決定于循環(huán)次數(shù)，反應(yīng)產(chǎn)物的增加，提高了檢測靈敏度，減少了共存物質(zhì)的干擾，達(dá)到高靈敏度和特異的要求。 酶循環(huán)法 (enzymatic cycling assay)的靈敏度決定于循環(huán)反應(yīng)速度和時(shí)間，循環(huán)反應(yīng)速度又取決于兩種試劑酶 ( Ea 和 Eb) 的量。該法測定中所選擇酶的Km 值要小，以便用較少的酶量保持所需的靈敏度。 酶循環(huán)法 (3) 全國高等醫(yī)藥院校醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專業(yè)規(guī)劃教材 臨床生物化學(xué)檢驗(yàn) （第二版） 第五章 代謝物酶法分析技術(shù) 23 ?使用兩種酶，即一種氧化酶用于靶物質(zhì)的氧化，一種脫氫酶使其回到還原狀態(tài)，促使靶物質(zhì) (或其衍生物 )或靶物質(zhì)的氧化產(chǎn)物作為底物循環(huán)。 ?檢測指示系統(tǒng)： ①循環(huán)前、后用速率法測定NADH(340 nm) 的變化。②檢測產(chǎn)物 H2O2可通過 Trinder 反應(yīng)比色測定。 產(chǎn)物循環(huán)－氧化酶－脫氫酶系統(tǒng) 全國高等醫(yī)藥院校醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專業(yè)規(guī)劃教材 臨床生物化學(xué)檢驗(yàn) （第二版） 第五章 代謝物酶法分析技術(shù) 24 甘油AT P AD PGK甘油 3 磷酸N AD + N AD H + H +O 2 H 2 O 2磷酸二羥丙酮GPOG 3 PDH產(chǎn)物循環(huán)－氧化酶－脫氫酶系統(tǒng) 甘油濃度測定 ?通過 GPO和 G3PDH使 G3P 與 DHAP之間循環(huán)，在反復(fù)循環(huán)中 G3P 和 DHAP 的量不變，而產(chǎn)物 H2O2 隨每次循環(huán)不斷遞增，同時(shí) NADH 遞減。在規(guī)定時(shí)間 t 內(nèi)， H2O2 累計(jì)的量決定于 t 和每 min循環(huán)次數(shù)。 全國高等醫(yī)藥院校醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專業(yè)規(guī)劃教材 臨床生物化學(xué)檢驗(yàn) （第二版） 第五章 代謝物酶法分析技術(shù) 25 底物循環(huán)－脫氫酶－輔酶系統(tǒng) ?用一種脫氫酶和兩種輔酶 ( thioNAD+ 和 NADH)。用 395 nm ～ 415 nm 波長測定反應(yīng)中氧化型 thioNAD+ 轉(zhuǎn)為還原型 thioNADH的增加 速度。 ? 循 環(huán)反應(yīng)條件： ? 酶對 thioNAD+ 和 NADH應(yīng)有高度親和力。 ? 溶液 pH 和緩沖體系同時(shí)有利于雙向反應(yīng)。 ? thioNAD+ 和 NADH 二者的濃度和配比達(dá)最適條件。 全國高等醫(yī)藥院校醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專業(yè)規(guī)劃教材 臨床生物化學(xué)檢驗(yàn) （第二版） 第五章 代謝物酶法分析技術(shù) 26 底物循環(huán)－脫氫酶－輔酶系統(tǒng) 血淸膽汁酸測定 T h i o NAD + T h i o NADH ( 黃色 )膽汁酸 循環(huán) 3 酮類固醇3 α HS D3 α HS D NAD + NADH 膽汁酸與 3酮類固醇之間構(gòu)成循環(huán)，不斷產(chǎn)生硫代還原型輔酶 Ⅰ （黃色），控制好條件，反應(yīng)速度與代測物膽汁酸呈正比。靈敏度可增加數(shù)十倍。 全國高等醫(yī)藥院校醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專業(yè)規(guī)劃教材 臨床生物化學(xué)檢驗(yàn) （第二版） 第五章 代謝物酶法分析技術(shù) 27 氨循環(huán)－合成酶－脫氫酶系統(tǒng) ?NH4+在 NAD合成酶和 Mg2+存在下催化脫氨 NAD轉(zhuǎn)化為 NAD+，經(jīng)脫氫酶將亮氨酸轉(zhuǎn)化為氧化異己酸和NH4+同時(shí)生成 NADH，生成的 NH4+進(jìn)入循環(huán)再次生成NADH，在 340nm測定。 NH4+Mg 2++ 脫氨 NAD NAD +NADHNH4+NAD 合成酶亮氨酸亮氨酸脫氫酶+ 氧化異己酸AT P AM P+ PPi全國高等醫(yī)藥院校醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專業(yè)規(guī)劃教材 臨床生物化學(xué)檢驗(yàn) （第二版） 第五章 代謝物酶法分析技術(shù) 28 酶循環(huán)法具有的特點(diǎn) ?靈敏度隨反應(yīng)時(shí)間的延長而提高 ?靈敏度隨酶在擴(kuò)增反應(yīng)中的用量而
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