【正文】 柱色譜法 HPLC色譜法 溶劑提取法 檢識(shí) 理化檢識(shí) 色譜檢識(shí) （一）提取方法 — 溶劑法 ? 溶劑法 關(guān)鍵 溶劑的選擇 選擇依據(jù) 黃酮類成分的存在狀態(tài)（游離、苷）及溶解性 溶劑的溶解性能 提取方法（煎煮法、滲漉法、回流法等）的選擇 溶劑 提取原理 游離黃酮 黃酮苷 備 注 乙醇 溶解范圍廣 + + （甲醇） 苷、苷元均可溶 （ 90~95%） ( 60%） 甲醇毒性大 沸水 多糖苷易于水 + 成本低、安全 ,水溶性雜質(zhì)多 堿性水或 稀氫氧化鈉溶出能力強(qiáng) 堿性乙醇 酚羥基的酸性 + + 石灰水除雜質(zhì)效果好 HPLC色 譜 （二）分離 分離依據(jù)： 成分 (黃酮與雜質(zhì)、苷與苷元 、苷元與苷元 )之間的極性（分配系數(shù) K）差異。 pH梯度萃取法 溶劑萃取法 柱色譜法 常用聚酰胺和硅膠色譜。 （ 2）硅膠柱色譜 洗脫順序：羥基越多，極性越大，越后洗出（不分醇羥基、酚羥基） 適用于各種黃酮類化合物的分離。 任務(wù)一 黃芩中黃酮類化合物的提取分離技術(shù) 學(xué)習(xí)目標(biāo) 一 二 三 任務(wù)導(dǎo)入 必備知識(shí) 五 四 六 相關(guān)知識(shí)鏈接及拓展 課堂互動(dòng) 目標(biāo)測(cè)試 一 學(xué)習(xí)目標(biāo) 2 掌握 黃芩中黃酮 類化合物的提取、分離及鑒定技術(shù)。 了解 黃芩中黃酮 類化合物的存在及生物活性。 熟練進(jìn)行 黃芩中黃酮類 化合物的提取、分離及鑒定操作。 學(xué)習(xí)目的 任務(wù)導(dǎo)入： 黃芩為唇形科植物黃芩（ Scutellaria baicalensis Gei）的干燥根。其中黃芩苷（ %～ %）是主要有效成分，有抗菌消炎、降低轉(zhuǎn)氨酶等作用。 黃芩中黃芩苷的提取工藝流程： 黃芩苷分子中有羧基，酸性較強(qiáng)，在植物體內(nèi)多與鎂離子成鹽，且黃芩苷的鎂鹽水溶 性較大，故可用水為溶劑提取。黃芩苷的提取分離流程如下： 加適量水?dāng)噭?， 加 40%NaOH調(diào)至 pH7， 再加入等量乙醇 ， 過濾 沉淀 沉淀 上清液 黃芩粗粉 黃芩苷 水洗 ， 50%乙醇洗滌 ， 再用 95%乙醇洗滌或重結(jié)晶 加 HCL調(diào) pH1～ 2， 充分?jǐn)嚢?， 加熱至 80℃ ， 保溫 30分鐘 ， 過濾 濾液 藥渣 濾液 分別加 10倍 、 8倍量水煎煮 2次 ， 每次 1小時(shí) ， 過濾 藥渣 加 HCL調(diào) pH1～ 2， 80℃ 保溫 30分鐘 ， 靜置 ， 離心沉淀 濾液 （二）黃芩中黃酮類成分的提取分離 （一）黃芩中黃酮類主要有效成分及結(jié)構(gòu) 三 必備知識(shí) 黃芩苷（ baicalin） 黃芩素（ baicalein） 漢黃芩苷（ wogonoside） 漢黃芩素（ wogonin） （一）黃芩中黃酮類主要效成分及結(jié)構(gòu) OOH OH OOOO HO HO HC O O HOH OH OOH OOH OOOO HO HO HC O O HO C H 3OOH OH OO C H 3O 黃芩中黃芩苷為主要有效成分，黃芩苷為淡黃色針晶，熔點(diǎn) 223℃ ，幾乎不溶于水，難溶于甲醇、乙醇、丙酮，可溶于熱乙酸，易溶于堿性溶液。這是黃芩在放置過程中或處理不當(dāng)時(shí)易變綠的原因。 苷糖與苷元連接的化學(xué)鍵稱為苷鍵，形成苷鍵的原子稱為苷鍵原子。 氮苷 按照苷鍵原子進(jìn)行分類 氧苷 硫苷 碳苷 紅景天苷（醇苷） O O O HO glcCH2OHOOOC H 2C H 2 O HRO OO O C HC N 苦杏仁苷（氰苷） 山慈姑苷（酯苷） 天麻苷（酚苷） O S CN( C H 2 ) 2O S 3 HC H C H S O C H 3蘿卜苷 NNNN H 2H OOO H O HC H 2 O HO 巴豆苷 蟲草苷 蘆薈苷 NNNNNH2O 四 知識(shí)鏈接及拓展 結(jié)晶與重結(jié)晶 原理 溶劑選擇 操作技術(shù) 結(jié)晶與重結(jié)晶的基本原理 結(jié)晶與重結(jié)晶法是利用混合物中各成分在不同溫度溶劑中溶解度的不同來達(dá)到分離的方法。 溶劑的沸點(diǎn)亦不易太高。結(jié)晶溶劑又常會(huì)用到混合溶劑。 （二）結(jié)晶條件的控制 1．趁熱過濾得到的濾液應(yīng)長(zhǎng)時(shí)間靜置，逐漸冷卻，避免溫度驟降使析晶過快帶出雜質(zhì)。 五 課 堂 互 動(dòng) 1．聚酰胺柱色譜用于分離黃酮類化合物（苷、苷元）的原理、方法及洗脫規(guī)律。 3．何謂交叉共軛體系，它與黃酮類化合物顏色的關(guān)系如何？ 任務(wù)二 葛根中黃酮類化合物的提取分離技術(shù) 學(xué)習(xí)目標(biāo) 一 二 三 任務(wù)導(dǎo)入 必備知識(shí) 五 四 六 相關(guān)知識(shí)鏈接及拓展 課堂互動(dòng) 目標(biāo)測(cè)試 一 學(xué)習(xí)目標(biāo) 2 掌握葛根大豆 苷元的提取、分離及鑒定技術(shù)。氧化鋁柱色譜的原理及操作。 知識(shí)要求 3 能力要求 1 掌握葛根中黃酮類化學(xué)成分的提取分離原理及操作技術(shù)。 學(xué)會(huì)葛根 中黃酮類 化合物的色譜鑒定技術(shù) 。具有解肌退熱，生津，透疹，升陽止瀉的作用?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明：葛根中的異黃酮類化合物葛根素對(duì)高血壓、高血脂、高血糖和心腦血管疾病有一定療效?？傸S酮再通過氧化鋁柱色譜進(jìn)行分離。 （二）葛根中黃酮類成分的提取分離 （一）葛根中黃酮類主要有效成分及結(jié)構(gòu) 三 必備知識(shí) （一）葛根中黃酮類主要效成分及結(jié)構(gòu) 葛根中主要含異黃酮類化合物，如葛根素（ C苷）、大豆素、大豆苷等。大豆素為無色針晶， 265℃ 升華， 320℃ 分解，易溶于乙醇。 R1 R2 R3 大豆素 H H H 大豆苷 H 葡萄糖 H 葛根素 葡萄糖 H H OOR 1R 2 OO R 3（二）葛根中黃酮類化合物的提取分離 葛根中黃酮類化合物的分離 方法一： 葛 根 粗 粉9 5 % 乙 醇 加 熱 回 流 提 取 2 次 ，每 次 8 h ， 合 并 醇 液 ， 濾 過藥 渣醇 液減 壓 濃 縮 成 浸 膏 ， 用 苯脫 脂 ， 蒸 去 殘 余 苯 苯 液 脫 脂 浸 膏加 濃 鹽 酸 在 水 浴 上 攪 拌回 流 2 h ， 放 冷 ， 濾 過酸 水 不 溶 物醋 酸 乙 酯 萃 取 3 ~ 4 次