【正文】 脂溶性生物堿的提取 —— 親脂性有機(jī)溶劑提取法 1. 原理 是將中藥中的生物堿有機(jī)酸鹽轉(zhuǎn)變成水溶性較大的無機(jī)酸或小分子有機(jī)酸鹽，將其提取出來。 。 ，操作簡(jiǎn)便；提取液體積大，濃縮困難，水溶性雜質(zhì)多。 ，亦可采用回流法。 游離堿大多溶于親脂性有機(jī)溶劑的性質(zhì)，故采用氯仿、 乙醚和苯等將其提取出來。 （石灰乳、稀氨水等）濕潤(rùn)藥粉，使其中生物堿鹽轉(zhuǎn)變成游離堿后，再用氯仿等提取。但成本高、安全性差，故只用于實(shí)驗(yàn)室。 偽麻黃堿 + + 偽麻黃堿草酸鹽 + 某些生物堿特殊功能團(tuán)（羥基、內(nèi)酯鍵和內(nèi)酰胺鍵等）能發(fā)生可逆性化學(xué)反應(yīng)，導(dǎo)致其溶解性改變，從而與其他成分分離。 例如三尖衫酯堿和高三尖衫酯堿的分離。常用 C18反相色譜柱，流動(dòng)相以甲醇 水、 乙腈 水為底劑。 化學(xué)檢識(shí)主要利用有關(guān)的沉淀反應(yīng)和顯色反應(yīng)。 （一）硅膠（氧化鋁）吸附薄層色譜＊ 硅膠 TLC最好在堿性條件下進(jìn)行，可在展開劑中加入少量堿性試劑如二乙胺、氨水等，或制備堿性薄層板。 大多采用改良碘化鉍鉀試液噴霧顯色，呈橘紅色斑點(diǎn)。 （二）紙色譜 常用正相紙上分配色譜。 ①游離堿： 常以甲酰胺為固定相，氯仿苯等為展開劑。 顯色方法與薄層色譜基本相同，但不宜使用含硫酸的顯色劑。 任務(wù)一 麻黃中生物堿類成分的提取分離技術(shù) 學(xué)習(xí)目標(biāo) 一 二 三 麻黃中生物堿的提取分離技術(shù) 必備知識(shí) 五 四 六 相關(guān)知識(shí)鏈接及拓展 課堂互動(dòng) 目標(biāo)測(cè)試 一 學(xué)習(xí)目標(biāo) 2 掌握 麻黃中生物堿類化合物 的提取、分離及鑒定技術(shù)。 了解 麻黃中生物堿類化合物 的存在及生物活性。 熟練進(jìn)行 麻黃中生物堿類化合物的提取、分離及鑒定操作。 學(xué)習(xí)目的 二 麻黃中生物堿類化學(xué)成分的提取分離技術(shù) 麻黃（ herba ephedrae）為麻黃科草麻黃 (Ephedra sinica Stapf.)、中麻黃 (Ephedra intermedia Schrenk et .)或木賊麻黃 (Ephedra equisetina Bge.)的干燥草質(zhì)莖。麻黃中含有多種生物堿 ,因產(chǎn)地和品種的不同有一定的差異 ,一般以麻黃堿和偽麻黃堿為主 ,此外還含少量甲基麻黃堿、甲基偽麻黃堿和去甲基麻黃堿、去甲基偽麻黃堿。它們的結(jié)構(gòu)如下： CH OCHC H 3HN H C H 3 H OC CHC H 3HN H C H 3l 麻 黃 堿 ( 1 R ， 2 S ) d 偽 麻 黃 堿 ( 1 S ， 2 S )1 21 2 CH OCHC H 3HN ( C H 3 ) 2l 去 甲 麻 黃 堿 ( 1 R ， 2 S )1 2CH OCHC H 3HN H 21 2l 甲 基 麻 黃 堿 ( 1 R ， 2 S ) （二）麻黃生物堿的理化性質(zhì) 麻黃堿和偽麻黃堿的分子量較小，為無色結(jié)晶，游離麻黃堿含水物熔點(diǎn)為 40℃ 。 麻黃堿和偽麻黃堿為仲胺生物堿，且氮原子在側(cè)鏈上，堿性較強(qiáng)，而且偽麻黃堿的堿性（ ）稍強(qiáng)于麻黃堿（ ）。游離的麻黃生物堿可溶于水，而偽麻黃堿由于形成較穩(wěn)定的分子內(nèi)氫鍵，所以在水中的溶解度比麻黃堿小。麻黃堿草酸鹽比偽麻黃堿草酸鹽在水中溶解度小。 結(jié)晶法是實(shí)驗(yàn)室常用的成分純化方法 。 基本原理 根據(jù)中藥化學(xué)成分與溶劑間“極性相似相溶”的原理，依據(jù)各類成分溶解度的差異，選擇對(duì)所提成分溶解度大、對(duì)雜質(zhì)溶解度小的溶劑，依據(jù)“濃度差”原理，將所提成分從藥材中溶解出來的方法。但太細(xì)，藥粉對(duì)成分 的吸附也越強(qiáng)。 2 提取溫度：一般熱提效率高，但要考慮有些成分溫度高易破壞，應(yīng)選擇適宜 溫度。但被提成分在細(xì)胞內(nèi)外溶解一旦平衡， 時(shí)間長(zhǎng)即無意義。 4 提取溶劑的選擇 : 遵循 “ 相似者相溶 ” 規(guī)律，選擇對(duì)有效成分溶解度大，對(duì)無 效成分溶解度小的溶劑做為提取溶劑 。 5 提取方法的選擇 :見后面 方 法 常用溶劑 優(yōu) 點(diǎn) 缺 點(diǎn) 浸漬法 水和醇 室溫提取不易破壞成分，設(shè)備簡(jiǎn)單，適合提取含淀粉或黏液質(zhì)多的藥材。 時(shí)間長(zhǎng)次多，提取效率低。 溶劑用量較多 煎煮法 水 設(shè)備簡(jiǎn)單，提取較全面 加熱提取易破壞成分，揮發(fā)性成分易損失，不適合提取含淀粉或黏液質(zhì)多的藥材 回流法 有機(jī)溶劑 加熱提取效率較高 易破壞熱敏性成分，操作較繁 連續(xù)回流法 有機(jī)溶劑 保持較 高濃度差 提取效率高，操作 簡(jiǎn)便 ，溶劑 用量少 提取液受熱時(shí)間長(zhǎng)，成分易破壞 操作形式 方 法 常用溶劑 優(yōu) 點(diǎn) 缺 點(diǎn) 浸漬法 水和醇 室溫提取不易破壞成分，設(shè)備簡(jiǎn)單，適合提取含淀粉或黏液質(zhì)多的藥材。 時(shí)間長(zhǎng)次多，提取效率低。 溶劑用量較多 煎煮法 水 設(shè)備簡(jiǎn)單，提取較全面 加熱提取易破壞成分，揮發(fā)性成分易損失，不適合提取含淀粉或黏液質(zhì)多的藥材 回流法 有機(jī)溶劑 加熱提取效率較高 易破壞熱敏性成分，操作較繁 連續(xù)回流法 有機(jī)溶劑 保持較 高濃度差 提取效率高，操作 簡(jiǎn)便 ，溶劑 用量少 提取液受熱時(shí)間長(zhǎng)，成分易破壞 水蒸氣蒸餾法 基本原理 適用范圍 裝置示意圖 是將水蒸氣通入含有揮發(fā)性成分的藥材中，使藥材中揮發(fā)性成分隨水蒸氣蒸餾出來的提取方法。 般來說 ， 天然藥物化學(xué)成分在常溫下多半是固體物質(zhì) ， 常具有結(jié)晶的通性 ， 因此 ， 可根據(jù)溶解度得不同 ， 用結(jié)晶法來達(dá)到分離 、 純化 、 精制的目的 。 但并不能利用結(jié)晶法直接進(jìn)行提取液的分離和純化 ， 因?yàn)檫^多的雜質(zhì)會(huì)干擾結(jié)晶的形成 ， 甚至有時(shí)少量的雜質(zhì)也會(huì)阻礙結(jié)晶的析出 ， 因此 ， 結(jié)晶前應(yīng)盡可能地除去雜質(zhì) 。由于溶解度不同，麻黃堿草酸鹽從水溶液中析出，偽麻黃堿草酸鹽仍留在水中，過濾分離后再按溶劑提取法中的精制步驟將其精制成鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿。 離子交換樹脂法 利用生物堿鹽能夠交換到強(qiáng)酸型陽離子樹脂柱上，將麻黃草的酸性水提液通過離子交換柱，用酸性液洗脫，由于麻黃堿的堿性比偽麻黃弱，可先從樹脂柱上洗脫下來，從而使兩者達(dá)到分離。 麻 黃 草 粉0 . 5 % 的 鹽 酸 連 續(xù) 浸 泡 3 次滲 濾 液加 碳 酸 鈉 調(diào) 節(jié) p H 5 . 5 ～ 6 ， 蒸 發(fā) 濃 縮再 加 入 碳 酸 鈉 調(diào) 節(jié) p H 1 0 , 濾 去 沉 淀 物濾 液加 適 量 氯 化 鈉 飽 和 ， 濾 過麻 黃 粗 提 物乙 醚 連 續(xù) 萃 取 4 次乙 醚 相減 壓 回 收 乙 醚浸 膏溶 于 少 量 氯 仿 中 ， 進(jìn) 行 硅 膠 柱 色 譜 ，氯 仿 甲 醇 （ 2 . 5 : 1 ） 洗 脫 ， 用 T L C 檢 識(shí) ，合 并 含 有 麻 黃 堿 部 分洗 脫 液蒸 干麻 黃 堿 純 品麻 黃 粗 粉0 . 1 % ～ 0 . 5 % H c l 滲 漉滲 漉 液通 過 強(qiáng) 酸 型 陽 離 子 交 換 樹 脂漉 出 液樹 脂水 洗 去 殘 留 滲 漉 液方 法 一 方 法 二4 m o l / L H c l 洗 脫（ 控 制 洗 脫 量 ）5 % N H4 O H 乙 醇 洗 脫（ 控 制 洗 脫 量 ） 樹 脂（ 偽 麻 黃 堿 ）洗 脫 液減 壓 濃 縮 ，濾 過 結(jié) 晶鹽 酸 麻 黃 堿 粗 品母 液 樹 脂（ 偽 麻 黃 堿 ）洗 脫 液加 N a c l 飽 和 溶 液 ，C H c l3 萃 取C H c l3 萃 取 液酸 水 層 C H c l 3 層1 % H c l 萃 取減 壓 濃 縮鹽 酸 麻 黃 堿 粗 品中藥酸水提取液（鹽） 過陽離子交換樹脂柱 （ RSO3 H+） 樹脂柱（ RSO3BH+） 氨液堿化（游離） 氯仿提取 回收溶劑 總生物堿 流出液 （水溶性雜質(zhì)） 離子交換樹脂法 操作流程 提取液的濃縮 水提液的濃縮 有機(jī)提取液的濃縮 敞口蒸發(fā) 適用于少量水提液。 常壓蒸餾 適用于低沸點(diǎn)有機(jī)溶劑的回收，例如乙醚、 丙酮等 減壓蒸餾 適用于高沸點(diǎn)有機(jī)溶劑的回收，例如乙醇、正丁醇等 【 注 】 加熱 有機(jī) 溶劑（溶液）必須使用 非明火 熱源。 熟悉粉防己堿和防己諾林堿的結(jié)構(gòu)及主要理化性質(zhì)。 知識(shí)要求 3 能力要求 1 掌握防己中生物堿類化學(xué)成分的提取分離原理及操作技術(shù)。 學(xué)會(huì)防己 中生物堿類化合物 的色譜鑒定技術(shù) 。防已味苦、辛，性寒，具有祛風(fēng)止痛、利水消腫等功效。 防己生物堿的提取分離工藝流程 防 己 粗 粉9 5 % 乙 醇 加 熱 回 流 提 取乙 醇 提 取 液堿 水 層濃 縮乙 醇 浸 膏5 % 鹽 酸 溶 解 ， 過 濾酸 水 液 不 溶 物氨 水 堿 化 至 P H 9 . 0 1 0 . 0氯 仿 萃 取氯 仿 層回 收 氯 仿殘 留 物氧 化 鋁 柱 層 析 分 離環(huán) 己 烷 丙 酮 ( 4 : 1 ) 洗 脫（ 漢 防 己 甲 素 ）粉 防 己 堿防 己 諾 林 堿( 漢 防 己 乙 素 )鹽 酸 酸 化 至 P H 3 . 0 4 . 0加 飽 和 雷 氏 銨 鹽 至 沉 淀 完 全靜 置 ， 過 濾沉 淀丙 酮 溶 解 ， 過 濾丙 酮 液通 過 氧 化 鋁 柱 除 去 雜 質(zhì)丙 酮 液濾 液沉 淀定 量 加 入 B a C l2溶 液（ 把 上 步 加 入 A g2S O4中 的 S O42 沉 淀 完 全 ）沉 淀濾 液減 壓 濃 縮 ， 析 出 晶 體 （ 粗 品 ）熱 水 重 結(jié) 晶輪 環(huán) 藤 酚 堿 鹽 酸 鹽方 法 二加 入 熱 飽 和 A g2S O4溶 液過 濾方 法 一加 冷 苯 溶 解苯 液 不 溶 物回 收 苯丙 酮 重 結(jié) 晶丙 酮 重 結(jié) 晶（ 漢 防 己 甲 素 ）粉 防 己 堿防 己 諾 林 堿( 漢 防 己 乙 素 )（二） 防己生物堿的性質(zhì) （一）防己中主要有效成分及結(jié)構(gòu) 三 必備知識(shí) （一）防己中主要有效成分及結(jié)構(gòu) 防已中的生物堿含量高達(dá) %一 %，其中主要為粉防己堿和防己諾林堿，還含少量的輪環(huán)藤酚堿。其結(jié)構(gòu)如下 ： R = C H3 粉 防 己 堿 （ 漢 防 己 甲 素 ） R = H 防 己 諾 林 堿 （ 漢 防 己 乙 素 ）NC H3OHC H3NO C H3O RHO C H3C H3OO輪 環(huán) 藤 酚 堿O HO C H3N+C H3C H3OH O （二）防己生物堿的理化性質(zhì) 1．性狀 粉防己堿和防己諾林堿均為白色結(jié)晶。輪環(huán)藤酚堿的氯化物為無色結(jié)晶，熔點(diǎn) 214℃ 。輪環(huán)藤酚堿屬于原小檗堿型季銨堿，具強(qiáng)堿性。但由于兩者的分子結(jié)構(gòu)中 7位取代基的差異，前者為甲氧基，后者為酚羥基，故粉防己堿的極性較小，能溶于冷苯；防己諾林堿極性較大，難溶于冷苯。輪環(huán)藤酚堿為水溶性生物堿，可溶于水、甲醇、乙醇，難溶于乙醚、苯等親脂性有機(jī)溶劑。 結(jié)晶法是實(shí)驗(yàn)室常用的成分純化方法 。 酸堿沉淀法的基本原理 利用某些成分在酸（或堿）中溶解，繼而又在堿（或酸）中生成沉淀的性質(zhì)達(dá)到分離的方法。 酸沉淀與堿沉淀各自的沉淀范圍 酸沉淀：適用于分離提純酸性、堿性或兩性有機(jī)化合物，如 黃酮、蒽醌類酚酸性成分等。 粉防己 粗粉 以 ％硫酸浸泡 4 次 酸水浸出液