【正文】 柱色譜法 HPLC色譜法 溶劑提取法 檢識 理化檢識 色譜檢識 （一）提取方法 — 溶劑法 ? 溶劑法 關(guān)鍵 溶劑的選擇 選擇依據(jù) 黃酮類成分的存在狀態(tài)（游離、苷）及溶解性 溶劑的溶解性能 提取方法（煎煮法、滲漉法、回流法等）的選擇 溶劑 提取原理 游離黃酮 黃酮苷 備 注 乙醇 溶解范圍廣 + + （甲醇） 苷、苷元均可溶 （ 90~95%） ( 60%） 甲醇毒性大 沸水 多糖苷易于水 + 成本低、安全 ,水溶性雜質(zhì)多 堿性水或 稀氫氧化鈉溶出能力強 堿性乙醇 酚羥基的酸性 + + 石灰水除雜質(zhì)效果好 HPLC色 譜 （二）分離 分離依據(jù)： 成分 (黃酮與雜質(zhì)、苷與苷元 、苷元與苷元 )之間的極性（分配系數(shù) K）差異。 pH梯度萃取法 溶劑萃取法 柱色譜法 常用聚酰胺和硅膠色譜。 （ 2）硅膠柱色譜 洗脫順序：羥基越多，極性越大，越后洗出（不分醇羥基、酚羥基） 適用于各種黃酮類化合物的分離。 任務一 黃芩中黃酮類化合物的提取分離技術(shù) 學習目標 一 二 三 任務導入 必備知識 五 四 六 相關(guān)知識鏈接及拓展 課堂互動 目標測試 一 學習目標 2 掌握 黃芩中黃酮 類化合物的提取、分離及鑒定技術(shù)。 了解 黃芩中黃酮 類化合物的存在及生物活性。 熟練進行 黃芩中黃酮類 化合物的提取、分離及鑒定操作。 學習目的 任務導入： 黃芩為唇形科植物黃芩（ Scutellaria baicalensis Gei）的干燥根。其中黃芩苷（ %～ %）是主要有效成分，有抗菌消炎、降低轉(zhuǎn)氨酶等作用。 黃芩中黃芩苷的提取工藝流程： 黃芩苷分子中有羧基，酸性較強，在植物體內(nèi)多與鎂離子成鹽，且黃芩苷的鎂鹽水溶 性較大，故可用水為溶劑提取。黃芩苷的提取分離流程如下： 加適量水攪勻 ， 加 40%NaOH調(diào)至 pH7， 再加入等量乙醇 ， 過濾 沉淀 沉淀 上清液 黃芩粗粉 黃芩苷 水洗 ， 50%乙醇洗滌 ， 再用 95%乙醇洗滌或重結(jié)晶 加 HCL調(diào) pH1～ 2， 充分攪拌 ， 加熱至 80℃ ， 保溫 30分鐘 ， 過濾 濾液 藥渣 濾液 分別加 10倍 、 8倍量水煎煮 2次 ， 每次 1小時 ， 過濾 藥渣 加 HCL調(diào) pH1～ 2， 80℃ 保溫 30分鐘 ， 靜置 ， 離心沉淀 濾液 （二）黃芩中黃酮類成分的提取分離 （一）黃芩中黃酮類主要有效成分及結(jié)構(gòu) 三 必備知識 黃芩苷（ baicalin） 黃芩素（ baicalein） 漢黃芩苷（ wogonoside） 漢黃芩素（ wogonin） （一）黃芩中黃酮類主要效成分及結(jié)構(gòu) OOH OH OOOO HO HO HC O O HOH OH OOH OOH OOOO HO HO HC O O HO C H 3OOH OH OO C H 3O 黃芩中黃芩苷為主要有效成分，黃芩苷為淡黃色針晶，熔點 223℃ ，幾乎不溶于水，難溶于甲醇、乙醇、丙酮，可溶于熱乙酸，易溶于堿性溶液。這是黃芩在放置過程中或處理不當時易變綠的原因。 苷糖與苷元連接的化學鍵稱為苷鍵，形成苷鍵的原子稱為苷鍵原子。 氮苷 按照苷鍵原子進行分類 氧苷 硫苷 碳苷 紅景天苷（醇苷） O O O HO glcCH2OHOOOC H 2C H 2 O HRO OO O C HC N 苦杏仁苷（氰苷） 山慈姑苷（酯苷） 天麻苷（酚苷） O S CN( C H 2 ) 2O S 3 HC H C H S O C H 3蘿卜苷 NNNN H 2H OOO H O HC H 2 O HO 巴豆苷 蟲草苷 蘆薈苷 NNNNNH2O 四 知識鏈接及拓展 結(jié)晶與重結(jié)晶 原理 溶劑選擇 操作技術(shù) 結(jié)晶與重結(jié)晶的基本原理 結(jié)晶與重結(jié)晶法是利用混合物中各成分在不同溫度溶劑中溶解度的不同來達到分離的方法。 溶劑的沸點亦不易太高。結(jié)晶溶劑又常會用到混合溶劑。 （二）結(jié)晶條件的控制 1．趁熱過濾得到的濾液應長時間靜置，逐漸冷卻，避免溫度驟降使析晶過快帶出雜質(zhì)。 五 課 堂 互 動 1．聚酰胺柱色譜用于分離黃酮類化合物（苷、苷元）的原理、方法及洗脫規(guī)律。 3．何謂交叉共軛體系，它與黃酮類化合物顏色的關(guān)系如何？ 任務二 葛根中黃酮類化合物的提取分離技術(shù) 學習目標 一 二 三 任務導入 必備知識 五 四 六 相關(guān)知識鏈接及拓展 課堂互動 目標測試 一 學習目標 2 掌握葛根大豆 苷元的提取、分離及鑒定技術(shù)。氧化鋁柱色譜的原理及操作。 知識要求 3 能力要求 1 掌握葛根中黃酮類化學成分的提取分離原理及操作技術(shù)。 學會葛根 中黃酮類 化合物的色譜鑒定技術(shù) 。具有解肌退熱，生津，透疹，升陽止瀉的作用?，F(xiàn)代醫(yī)學研究表明：葛根中的異黃酮類化合物葛根素對高血壓、高血脂、高血糖和心腦血管疾病有一定療效?？傸S酮再通過氧化鋁柱色譜進行分離。 （二）葛根中黃酮類成分的提取分離 （一）葛根中黃酮類主要有效成分及結(jié)構(gòu) 三 必備知識 （一）葛根中黃酮類主要效成分及結(jié)構(gòu) 葛根中主要含異黃酮類化合物，如葛根素（ C苷）、大豆素、大豆苷等。大豆素為無色針晶， 265℃ 升華， 320℃ 分解，易溶于乙醇。 R1 R2 R3 大豆素 H H H 大豆苷 H 葡萄糖 H 葛根素 葡萄糖 H H OOR 1R 2 OO R 3（二）葛根中黃酮類化合物的提取分離 葛根中黃酮類化合物的分離 方法一： 葛 根 粗 粉9 5 % 乙 醇 加 熱 回 流 提 取 2 次 ，每 次 8 h ， 合 并 醇 液 ， 濾 過藥 渣醇 液減 壓 濃 縮 成 浸 膏 ， 用 苯脫 脂 ， 蒸 去 殘 余 苯 苯 液 脫 脂 浸 膏加 濃 鹽 酸 在 水 浴 上 攪 拌回 流 2 h ， 放 冷 ， 濾 過酸 水 不 溶 物醋 酸 乙 酯 萃 取 3 ~ 4 次