【正文】 使用的固定液，其可使用的溫度范圍大，對(duì)一般的有機(jī)化合物有較好的溶解能力。 ① 甲基硅酮： C H 3 SiC H 3C H 3O SiC H 3C H 3On SiC H 3C H 3C H 3 SE30 最高使用溫度 300℃ 極性 + 溶劑：氯仿 OV1 最高使用溫度 350℃ 極性 + 溶劑：氯仿 甲基硅酮 SE30， OV1 是最常用的固定液，極性很弱，與組分的相互作用力主要是色散力，對(duì)含氧化合物有一定的選擇性。 ② 苯基甲基硅酮： C H 3 SiC H 3C H 3O SiC H 3On SiC H 3C H 3C H 3 OV17 最高使用溫度 300℃ 極性 ++ 溶劑：氯仿 由于硅原子上引入苯基，與甲基硅酮相比較，芳香化合物的溶解度升高，極性組分的保留 8 值增大。 OV17 屬中苯基硅酮。 ③ 氰烷基硅酮： C H 3 SiC H 3C H 3O SiC 2 H 4 C NC H 3On SiC H 3C H 3C H 3 C H 3 SiC H 3C H 3O SiC 3 H 6 C NC H 3On SiC H 3C H 3C H 3 這類固定液含有電負(fù)性的氰基，對(duì)極性組分有較強(qiáng)的定向力，對(duì)易極化組分可使之產(chǎn)生誘導(dǎo)偶極。是極性較強(qiáng)、選擇性高、熱穩(wěn)定性好的少數(shù)固定液之一。 ④ 氟烷基硅酮： C H 3 SiC H 3C H 3O SiC H 3C H 3C H 3SiC 2 H 4 C F 3C H 3On QF1 含三氟丙基，對(duì)硝基化合物和酮類有顯著的選擇性保留。對(duì)于酮 芳烴，酮 醇能很好地分離。在氫鍵的形成中，既是氫鍵的質(zhì)子接受體又是質(zhì)子給予體。組分在這類固定液上的保留主要取決于氫鍵力的大 小。 ⑥ 聚酯： C H 2 C H 2C H 2 O C H 2 C H 2 O COC H 2 C H 2 C H 2 C H 2 COOn DEGA ++++ 200℃ 氯仿 C H 2C H 2 O C H 2 C H 2 O COC H 2 C H 2 COOn DEGS ++++ 200℃ 丙酮 DEGA、 DEGS 等為線性脂肪族聚酯，酯基中的氧原子有未用電子對(duì)，有親核性，能與帶部分正電荷的氫形成氫鍵。適用于分離醇類、酚類、脂肪酸類、酯類、胺類等化合物。最好參考已發(fā)表的分離相同或相似結(jié)構(gòu)化合物的文獻(xiàn)。分離非極性的組分，則可選用非極性或弱極性固定液。 （ 2）若樣品中的待測(cè)成分一個(gè)是極性組分，另一個(gè)是非極性組分，則采用極性固定液比非極性固定液有利。 （ 4）混合固定液 對(duì)于復(fù)雜混合物樣品，如無(wú)適當(dāng)?shù)膯我还潭ㄒ簳r(shí)，則可考慮選擇混合固定液。因此，在同一條件下分別測(cè)出被分離組分在單一固定液柱上的調(diào)整保留時(shí)間（ tR＇）后，可用圖解法求出混合固定液的最佳配比。以混合固定液的配比為橫坐標(biāo)，以 tR＇為縱坐標(biāo)， 將相同組分的 tR＇以直線相連。組分在 A， B 兩種混合固定液上的保留值具有如下關(guān)系： 若組分在純 A 固定液柱上的保留值為 tR＇ A ，固定液重 WA ； 若組分在純 B 固定液柱上的保留值為 tR＇ B ，固定液重 WB ； tR＇ A 3 1， 2 0 25 50 75 100 B A 100 75 50 25 0 1， 3 2 30 75 3 2 1 2 3 1 B tR＇ 11 在混合柱（含 A 的重量為 WA ＇， B的重量為 WB ＇）上為 tR＇ X 則：（混合固定液的保留值具有加和性） 制備混合固定液柱的方式： 二．擔(dān)體 擔(dān)體的作用是支持固定液，使成均勻薄膜，以利氣液平衡。 （二）常用擔(dān)體 藥物分析中常用擔(dān)體為硅藻土擔(dān)體。主要用于非極性固定液（樣品）。結(jié)構(gòu)疏松，機(jī)械強(qiáng)度較前者差，易碎而產(chǎn)生結(jié)粉，極性中心較紅色擔(dān)體少。 酸洗法 13 (二 ) 柱管預(yù)處理 填充柱的柱管材料有不銹鋼管和玻璃管兩種。 不銹鋼柱：熱 5~10% NaOH 液沖洗→水洗至中性→乙醇→乙酸乙酯→有機(jī)溶劑洗→烘干。 （三） 柱子填裝及老化 1．裝柱 加一匙料，在柱子的四周敲擊一次，再加一匙料，再在柱子的四周敲擊一次，直至填滿，填滿后在柱子的入口處填上玻璃棉。 2．老化 裝柱子入口處與氣路相接，另一端放空（不能與檢測(cè)器相連，以免老化時(shí)污染檢測(cè)器），將柱溫設(shè)置在低于固定液最高使用溫度 30℃處，加熱老化 24~48 小時(shí)，以除去填料中殘余溶劑及固定液中帶來(lái)的低分子聚合物。 FID 檢測(cè)器時(shí)：普氮。 TCD 檢測(cè)器時(shí)：氫氣及氦氣均可達(dá)到較高靈敏度。 （二）溫度： 原則： 1． 檢測(cè)器溫度至少比柱溫高 30℃。 2． 柱溫至少比固定液的最高使用溫度低 30℃。 3． 柱溫降低，保留時(shí)間延長(zhǎng)， k’↑，分離可得到改善。 15 第三節(jié) 毛細(xì)管柱 在 60 年代至 70 年代毛細(xì)管柱（ Capillary Column）氣相色譜法取得了很大發(fā)展，它解決了許多復(fù)雜的分離分析問(wèn)題。但在使用過(guò)程中人們很快感受到了玻璃作為毛細(xì)管柱柱壁材料的二大缺點(diǎn)： 玻璃毛細(xì)管柱無(wú)柔性，容易碎裂，這是導(dǎo)致其被逐步淘汰的主 要缺點(diǎn)。 1979 年產(chǎn)生了熔融二氧化硅空心柱 FSOT（ Fused Silica Open Tubular），亦稱“柔性石英毛細(xì)管”。 FSOT 開(kāi)發(fā)出來(lái)以后，迅速被商品化，并得以迅速普及。 一．柱管 上圖為毛細(xì)管拉制機(jī)的示意圖。常用的保護(hù)涂層為聚酰亞胺。未加保護(hù)層的 FSOT 柱受濕度影響，易于斷裂，這是因?yàn)樗肿忧譅t 激光直徑測(cè)量器 涂布器 干燥爐 固化爐 毛細(xì)管 卷繞機(jī) 送料器 16 襲 SiO 鍵形成硅醇基。 二．柱類型 （一）壁涂開(kāi)管柱 WCOT（ Wall Coated Open Tubular） WCOT 柱是較常用的毛細(xì)管柱。商品化的 WCOT 柱內(nèi)徑從 至 ，內(nèi)壁均勻涂布了固定相，如 SE30， OV1， OV225， PEG20M 等。固定相是溶解在溶劑中，用靜態(tài)法或動(dòng)態(tài)法涂布的。 動(dòng)態(tài)法方便、快速，但重現(xiàn)性不夠理想，涂出的柱子柱效相對(duì)較低。在恒溫下（低 于溶劑沸點(diǎn) 10~20℃）減壓除去溶劑。 （二）固定化固定相柱（ immobilized solid phase open tubular） 為了得到穩(wěn)定的固定相涂層，在涂布了固定液后，常常需要使之橫向交聯(lián)（ crosslinked）或鍵合（ bonded）使之穩(wěn)定。鍵合是指經(jīng)化學(xué)處理后，將固定相結(jié)合在毛細(xì)管內(nèi)表面。游離基起始劑包括氧化物、γ射線、臭氧和偶氮 17 化合物。 橫向交聯(lián)及鍵合的優(yōu)點(diǎn)： （ 1）產(chǎn)生穩(wěn)定的涂層，固定相流失大大減少。如色譜柱污染，可用溶劑沖洗進(jìn)行再生。 （ 3）使用溫度范圍寬。但聚酰亞胺涂層在 380℃以上不穩(wěn)定。 （一）固定相 可參照填充柱，但由于 FSOT 柱有很高的柱效，固定相的選擇不如填充柱那樣重要。 （二）柱內(nèi)徑與固定液膜厚度 內(nèi)徑 ，膜厚 m 的柱是常規(guī)柱，兼顧了柱效和樣品容量。 2．為了提高柱效 可選擇細(xì)內(nèi)徑，薄涂層的柱，以分析復(fù)雜樣品。 3．固定液的流失比例與柱中固定液的重量 對(duì)于 GCMS 這種高靈敏度的檢測(cè)器，宜選用細(xì)內(nèi)徑、薄涂層 FSOT，如 . μ m 柱。復(fù)雜樣品需長(zhǎng)柱，短柱分析速度快。 2．柱老化 新柱要老化。否則基線漂移，峰拖尾。 4．柱污染時(shí)用戊烷、二氯甲烷或甲醇沖洗。 分流的目的：防止 毛細(xì)管柱超載。 氣化室 檢 測(cè) 器 記錄儀 載氣 進(jìn)樣 分流 補(bǔ)氣 19 （一） 分流進(jìn)樣 毛細(xì)管柱的載樣量小，所需載氣流速也小 ~5ml/min，使用常規(guī)微量注射器進(jìn)樣時(shí)，柱子必然超負(fù)荷，得不到毛細(xì)管柱的高效分離能力。分流進(jìn)樣法進(jìn)入柱子的樣品量只是進(jìn)樣量的極小部分，因此不會(huì)超載。 1．分流比 分流比可以定義為：在所進(jìn)樣品完全氣化，并與載氣充分混合的條件下，樣品通過(guò)分流進(jìn)樣器進(jìn)入柱子的流量 Fc，與通過(guò)分流器放空的流量 F 分流 之比。 由于載氣通過(guò)毛細(xì)管柱的流量很小，用皂膜流量計(jì)不易測(cè)量， Fc 也可以通過(guò)計(jì)算求出： Fc = п r2L/ tM 分流口